微陣列酶聯(lián)免疫法檢測(cè)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌的臨床價(jià)值

高 純，顧國(guó)浩，戴建青，公艷蕾，蔣 敏

(1蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006;2南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院)

結(jié)直腸癌(CRC)是常見惡性腫瘤，因早期CRC多無特異性臨床表現(xiàn)，至出現(xiàn)癥狀時(shí)多失去手術(shù)治療的最佳時(shí)機(jī)，故早診斷、早治療是提高CRC患者生存率的關(guān)鍵。研究顯示，單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)診斷CRC的敏感性或特異性較局限，多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)有助于診斷CRC、判斷其復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移、評(píng)價(jià)其術(shù)后療效。微陣列酶聯(lián)免疫法(Array-ELISA)是近年開展的新技術(shù)，可通過一次類似ELISA操作過程完成對(duì)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。為探討Array-ELISA檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物診斷CRC的臨床價(jià)值，我們進(jìn)行了相關(guān)研究。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2008年7月～2010年6月在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院行結(jié)直腸手術(shù)患者68例，男37例、女31例，年齡33～64(43±5)歲;其中CRC 49例(CRC組)，結(jié)直腸良性疾病19例(良性疾病組，其中結(jié)腸息肉10例、慢性結(jié)腸炎6例、潰瘍性結(jié)腸炎3例)。另選體檢健康者71例作為對(duì)照組，其性別、年齡與患者組有可比性。

1．2 檢測(cè)方法 抽取患者組術(shù)前(對(duì)照組查體時(shí))清晨空腹靜脈血2 ml，2 000～2 500 g/min離心8 min后分離血清，置4℃保存;采用Array-ELISA北京華大吉比愛生物公司產(chǎn)AE-1000生物芯片閱讀儀及腫瘤標(biāo)志物試劑盒，檢測(cè)其血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗體(PSA)、CA125、CA199、CA153。

1．3 結(jié)果判定 AFP、CEA、PSA、CA125、CA199、CA153 的臨界值分別為 20 ng/ml、5 ng/ml、4 ng/ml、35 U/L、37 U/L、28 U/L，超過臨界值判定為陽性。應(yīng)用敏感性［a/(a+c)］、特異性［d/(b+d)］、準(zhǔn)確度［a+d/(a+b+c+d)］、陽性預(yù)測(cè)值［a/(a+b)］及陰性預(yù)測(cè)值［d/(c+d)］評(píng)價(jià)上述指標(biāo)單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的臨床價(jià)值。a為真陽性數(shù)，b為假陽性數(shù)，c為假陰性數(shù)，d為真陰性數(shù)。聯(lián)合檢測(cè)的判定標(biāo)準(zhǔn):聯(lián)合指標(biāo)中有一項(xiàng)超過臨界值判定為陽性，各項(xiàng)指標(biāo)均低于臨界值判定為陰性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料為偏態(tài)分布時(shí)，其測(cè)定值以中位數(shù)和四分位數(shù)表示，采用Mann-Whitney檢驗(yàn);組間計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Logistic回歸法計(jì)算CRC診斷模型，用受試者工作曲線(ROC曲線)及曲線下面積(AUC)分析各檢測(cè)指標(biāo)單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的價(jià)值。AUC＜0．7示診斷價(jià)值較低，0．7～0．9示診斷價(jià)值中等，＞0．9示診斷價(jià)值較高［1］。

2 結(jié)果

2．1 三組各檢測(cè)指標(biāo)比較 見表1。

表1 三組各檢測(cè)指標(biāo)比較［M(P25，P75)］

2．2 CA199、CA125、CEA 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的臨床價(jià)值 見表2。

表2CA199、CA125、CEA單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的臨床價(jià)值(%)

2．3 CA199、CA125、CEA單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的AUC 以CA199、CA125與CEA三項(xiàng)指標(biāo)作為變量，計(jì)算CRC的Logistic回歸診斷模型為:PLog=ex/(1+ex);x= －3．269 0+0．026 3 CA199+0．139 6 CA125+0．085 8 CEA(PLog表示根據(jù)CA199、CA125與CEA聯(lián)合推測(cè)CRC發(fā)生的概率)。CA199、CA125、CEA 檢測(cè)的 AUC 分別為 0．767、0．667、0．814，三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的 AUC 為 0．867;三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的價(jià)值明顯優(yōu)于其單項(xiàng)檢測(cè)(P均 ＜0．05)。

3 討論

Array-ELISA技術(shù)是集ELISA、Array技術(shù)于一體的新檢測(cè)技術(shù)，基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫反應(yīng)原理，經(jīng)過酶和發(fā)光兩級(jí)放大，具有很高的檢測(cè)靈敏度、精密度、準(zhǔn)確性和抗干擾能力，其與電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的總符合率高于90%［2］。

腫瘤標(biāo)志物是指腫瘤細(xì)胞分泌或脫落到組織中的物質(zhì)，或是宿主對(duì)寄生物反應(yīng)產(chǎn)生并進(jìn)入體液或組織的物質(zhì)。一種腫瘤可有一種或多種腫瘤標(biāo)志物產(chǎn)生。因此，合理選擇多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)某種腫瘤，既可保證其高特異性，又可增加其敏感性。在消化道腫瘤中，CA199診斷胰腺癌的特異性最高，其次為CRC。CA199與腫瘤大小、浸潤(rùn)程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，其與CEA均為診斷CRC敏感性較高的腫瘤標(biāo)志物［3］。本研究顯示，CRC組血清CEA敏感性最高，可能與其表達(dá)隨腫瘤增長(zhǎng)、病理類型發(fā)生改變，且與CRC的Duke分期有關(guān);提示檢測(cè)CRC患者的血清 CEA，對(duì)判斷其病情變化有重要意義［4］。CA125是卵巢癌相關(guān)抗原，其對(duì)惡性卵巢癌的診斷及療效評(píng)定有重要價(jià)值;在肺癌、肝癌和消化道腫瘤中表達(dá)較高，但敏感性較差，可作為腫瘤篩查的廣譜指標(biāo)［5］。本研究表明，CRC 組 CA199、CA125、CEA均明顯高于正常對(duì)照組與良性疾病組，其中CA199、CA125、CEA聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的敏感性為73．47%、準(zhǔn)確度為85．61%，均高于其單項(xiàng)指標(biāo);提示三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷CRC的敏感性和準(zhǔn)確度。另外，采用 Array-ELISA技術(shù)將CA199、CA125、CEA 點(diǎn)陣于一個(gè)微孔中，一次、2 h內(nèi)即可檢出該三項(xiàng)指標(biāo)，可明顯節(jié)省操作時(shí)間。

Logistic回歸是一種多因素回歸模型，通過擬合最佳回歸曲線，可分析多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的作用。建立回歸曲線方程，可避免將腫瘤標(biāo)志物簡(jiǎn)單疊加導(dǎo)致其特異性降低，提高腫瘤診斷的正確率。本研究中，CRC組CA199、CA125、CEA明顯高于正常對(duì)照組及良性疾病組，故將該三項(xiàng)指標(biāo)作為變量，建立CRC的Logistic回歸診斷模型。

理想的腫瘤標(biāo)志物要求既靈敏，又特異，靈敏度高有利于篩選，減少漏診;特異性高有助于鑒別診斷，避免誤診。因單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物在提高靈敏度的同時(shí)，可降低其特異性，而提高其特異性的同時(shí)也會(huì)降低其靈敏度;因此，評(píng)價(jià)腫瘤標(biāo)志物診斷CRC的臨床價(jià)值時(shí)，不宜單純地檢測(cè)其靈敏度或特異性，而應(yīng)采用ROC曲線將二者結(jié)合起來進(jìn)行綜合分析，并依據(jù)AUC判定各腫瘤標(biāo)志物診斷CRC的準(zhǔn)確性［6］。本研究 AUC分析發(fā)現(xiàn)，CA199、CEA 對(duì) CRC的診斷價(jià)值中等，CA125對(duì)CRC的診斷價(jià)值較低，CA199、CA125、CEA聯(lián)合檢測(cè)診斷CRC的價(jià)值優(yōu)于其單項(xiàng)檢測(cè)，可較準(zhǔn)確地診斷CRC。

總之，本研究顯示 CA199、CA125、CEA是CRC的腫瘤相關(guān)標(biāo)志物，采用Array-ELISA技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)三項(xiàng)指標(biāo)，可提高診斷CRC的準(zhǔn)確性。

［1］趙耐清．臨床醫(yī)學(xué)研究設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析［M］．上海:復(fù)旦大學(xué)出版社，2005:241-252．

［2］高純，喻霞云，林德華，等．應(yīng)用微陣列酶聯(lián)免疫法檢測(cè)胃癌患者腫瘤標(biāo)志物［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(9):1182-1184．

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［4］錢峻，呂銀祥，宋章法，等．TSGF、CEA和CA199在大腸癌患者血清中表達(dá)的意義［J］．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2008，14(2):98-99．

［5］張利新，周建平，王春梅，等．多種腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)糖鏈抗原CA125的臨床價(jià)值分析［J］．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2007，15(3):415-416．

［6］張克堅(jiān)，楊振華．應(yīng)用ROC曲線圖評(píng)價(jià)檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床準(zhǔn)確性［J］．江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，1999，17(3):189-191．