益腎活血中藥對精索靜脈曲張大鼠附睪內精子活力與密度的影響

曲曉偉，張培海，單中杰，韓前河，胡建庭，張蜀武

(1鄭州人民醫院，鄭州450003;2成都中醫藥大學附屬醫院)

精索靜脈曲張(VC)是引起男性不育的主要原因之一，占19% ～41%［1］。關于VC的治療目前還存在許多爭議，手術療效并不確切［2］。在臨床工作中我們發現，益腎活血中藥強精膠囊對VC不育患者有較好療效，但尚缺乏實驗數據支持。精子密度與活力是反映生育力的最直接指標［3］。基于此，2008～2009年我們通過觀察益腎活血中藥強精膠囊對VC大鼠附睪精子活力與密度的影響，探討其提高生育力的可能作用機理。

1 材料與方法

1.1 藥物及主要設備 益腎活血方強精膠囊由四川省中西醫結合醫院中藥房提供(0.4 g/粒)，益腎方五子衍宗膠囊由河北紫薇山制藥有限責任公司生產(0.4 g/粒)，活血方少腹逐瘀膠囊由東阿澳東藥業有限公司生產(0.45 g/粒)。WLJY-9000北京偉力彩色精子質量檢測系統、中興202型電熱恒溫干燥箱、YP1201N電子天平、DK-600A型電熱恒溫水箱。

1.2 動物模型建立及分組 選擇青春期(2月齡)SD雄性大鼠100只(成都中醫藥大學動物實驗中心提供)，體質量(200±20)g。常規飼養，整個實驗過程中動物自由攝食飲水，室溫控制在20～25℃，相對濕度為40%～60%。隨機抽取10只為假手術組(僅顯露左腎靜脈，但不結扎)，余90只參照文獻［4］以縮窄左腎靜脈法建立VC大鼠模型。于造模后4周，麻醉大鼠，剖腹觀察，用帶測微器的目鏡測量精索靜脈直徑，觀察其曲張程度。若大鼠左側精索內靜脈直徑比假手術組擴張約3倍及雙腎大小無明顯差異，則表明造模成功。造模成功者(72只)隨機分為益活組(36只)和益腎組、活血組、模型組，后三組各12只。益活組又分為高、中、低濃度組(各12只)。

1.3 藥物混懸液制備及用法 ①制備:按照人與大鼠體表面積比換算等效劑量，均在臨用前用生理鹽水配制。強精膠囊配制成濃度為 0.216、0.108、0.054 g/ml的強精膠囊混懸液，五子衍宗膠囊配制成0.130 g/ml的混懸液，少腹逐瘀膠囊配制成0.146 g/ml的混懸液。②用法:益活組的高、中、低濃度組分別給予濃度為 0.216、0.108、0.054 g/ml的強精膠囊混懸液，按10 ml/kg灌胃、1次/d、共4周;益腎組給予五子衍宗膠囊混懸液、活血組給予少腹逐瘀膠囊混懸液、模型組及假手術組給予生理鹽水灌胃，劑量、用藥時間均同益活組。

1.4 精子密度與活力檢測方法 于末次給藥后24 h，大鼠稱重，斷頸處死，無菌條件下摘除左側附睪組織，拭干，在附睪尾部剪一小口，收集精液。采用WLJY-9000北京偉力彩色精子質量檢測系統分析精子密度與活力。

1.5 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。數據以表示，組間比較采用單因素方差分析，其中方差齊者用LSD法，方差不齊者用Dunnett's T3檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況觀察 造模后各組大鼠出現不同程度的攝食減少、精神萎靡、毛發枯黃、缺乏光澤，逐漸出現惡寒倦臥、反應遲鈍、少動、體毛干枯脫落、消瘦等表現，中藥灌胃后1周開始逐漸改善。實驗中動物死亡10只，其中模型組3只，益活組的低、中濃度組和益腎組各1只，高濃度組、活血組各2只。死亡原因為術后感染、灌胃操作不當及大鼠相互咬斗致死。

2.2 各組附睪精子活力及密度比較 見表1。

表1 各組附睪精子活力及密度比較(±s)

表1 各組附睪精子活力及密度比較(±s)

注:與假手術組比較，*P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.01;與高濃度組比較，★P ＜0.01

組別 n 精子活力(%) 精子密度(×106/ml)10 53.89±4.57 37.14±3.77模型組 9 26.26±5.89* 15.42±3.48*益活組高濃度組 10 47.64±4.60＊△ 32.73±4.33＊△中濃度組 11 35.51±4.30＊△★ 25.97±3.56＊△★低濃度組 11 27.62±4.71＊★ 18.92±3.03＊★益腎組 11 35.26±4.67＊△★ 24.50±3.41＊△★活血組 10 26.02±5.29＊★ 18.01±3.40假手術組＊★

3 討論

VC是男性不育癥的主要病因之一。雖然醫學家對VC性不育癥的病理機制作了大量的研究，如睪丸溫度增高、毒物反流、自由基損害等學說，但迄今為止，仍未能清楚解釋VC致生育力低下的確切病理機制。目前多采用精索靜脈高位結扎術治療VC。手術僅僅解決了精索靜脈血液反流的問題，未能解決睪丸生精功能障礙和附睪功能障礙，所以諸多學者對手術治療不育的療效提出了質疑。另外，西醫目前尚無特效治療藥物，在臨床用藥多為經驗及非特異性藥物，如乙烯雌酚、左卡尼汀、維生素族等。因此，探討VC性不育癥的發病機制，探索更為確切有效的治療藥物，勢在必行，而中醫藥在此方面優勢明顯。

祖國傳統醫學中，VC性不育屬筋瘤、筋疝、無子等范疇，其病因病機復雜，概括起來不外虛實二端，以腎虛為本，血瘀為標，腎虛導致血瘀，血瘀加重腎虛，互為因果，相互影響，造成生殖之精化生障礙，從而導致不育。

精子密度與活力是反映生育力的最直接指標。精子的運動能力是在附睪成熟過程中獲得并得到發展的，該能力包括超激活運動和前向運動(精子在附睪中是不活動的，此處是指精子在體外稀釋介質中的運動);精子活力(運動速度)的發展是不平行的。大鼠附睪頭部和體部精子運動情況基本相似，但在附睪尾部，精子運動速度和運動的直線性均有明顯增加。在人類，精子運動速度和直線性在附睪體尾部明顯增加［5］。

本研究結果顯示，模型組附睪精子活力與密度明顯低于其他各組，與假手術組比較，除益活組的高濃度組外，余組大鼠附睪精子活力與密度均降低(P均＜0.01);益活組與益腎組均能明顯提高精子活力與密度，益活組的高濃度組提高最明顯(P＜0.01)，活血組改善不明顯。結果表明益腎活血方強精膠囊能一定程度提高VC大鼠附睪內精子活力與密度。益腎活血中藥強精膠囊方劑由仙靈脾、仙茅、菟絲子、枸杞子、熟地、當歸、川芎、紅花、丹參、雞血藤、生黃芪、川牛膝等組成。仙靈脾、仙茅、菟絲子、枸杞子、熟地補腎以生精，當歸、川芎、紅花、丹參、雞血藤等活血以化瘀，標本兼顧，使腎氣得以充，瘀血得以去，生精功能得以恢復，達到治療VC性不育的目的。

綜上，益腎活血中藥灌胃能夠提高VC性大鼠附睪內精子活力與密度，促進附睪精子成熟，其功效優于單純益腎和單純活血中藥。此外，精漿約占精液的95%以上，含大量營養精子、激發精子活力的重要物質，影響精子的成熟及運動［6］。益腎活血類中藥是否通過改善附睪精子能量系統、提高前向運動蛋白等附睪精子成熟相關蛋白表達，以改善精子密度與活力，促進附睪精子成熟，從而提高生育力，有待進一步研究。

［1］Daughton CK，Nangia AK，Agarwal A.Pathophysiology of varicoceles in male infertility［J］.Hum Reprod Update，2001，7(5):473-481.

［2］張永康.精索靜脈曲張的幾個相關問題［J］.中國男科學雜志，2004，18(3):3-4.

［3］Elzanaty S，Malm J.Effects of ejaculation to analysis delay on levels of markers of epididymal and accessory sex gland functions and sperm motility［J］.J Androl，2007，28(6):847-852.

［4］劉建軍，董強，楊宇如.實驗性精索靜脈曲張大鼠血清及睪內睪酮的變化［J］.中華男科學雜志，2007，13(4):335-337.

［5］陳文成，康熙雄，潘云，等.75例少精不育患者精細胞GSTM1基因檢測結果分析［J］.山東醫藥，2010，50(19):28-29.

［6］鄭賢紅，高元奇，錢聰，等.不育男性精漿中性α-糖苷酶活性與精子參數關系探討［J］.山東醫藥，2009，49(4):70-72.