非小細胞肺癌組織中DNA-PKcs的表達變化及意義

蔣昌斌，甄俊杰，莫明聰，牛道立

(廣州醫學院第一附屬醫院，廣州 510230)

DNA依賴性蛋白激酶(DNA-PK)是細胞雙鏈斷裂(DSB)的主要修復蛋白之一，由兩個小的調節亞基Ku70、Ku80和一個大的催化亞基——DNA依賴性蛋白激酶催化單位(DNA-PKcs)組成［1］。有關DNA-PKcs與非小細胞肺癌(NSCLC)輻射敏感性的關系已有文獻報道［2，3］。因此，本研對73例 NSCLC患者癌組織及其癌旁組織中的DNA-PKcs進行了檢測，觀察其表達變化并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2005年5月～2009年4月在廣州醫學院第一附屬醫院確診的NSCLC患者73例，男55例，女18例;年齡33～75歲。治療前經手術或纖維支氣管鏡取標本，所取標本中可同時找到癌組織及與癌組織相應的癌旁組織，病理檢查診斷為NSCLC。病理組織學類型:腺癌36例，鱗癌33例，腺鱗癌2例，大細胞癌及肉瘤樣癌各1例。TNM分期:Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，Ⅲ期44例，Ⅳ期16例。38例未行手術治療而僅行放療，35例接受手術治療并于術后放療。將未行手術治療的38例根據放療(采用Simens Oncor直線加速器進行三維適形放射治療，用6 MV X 射線，2 Gy/次，5次/周，照射總劑量為60～70 Gy)的近期療效，分為輻射敏感組(CR+PR)和輻射抗拒組(NC+PD)。近期療效的評價依據《WHO實體瘤療效評價標準》，根據患者放療前及放療結束后1～3個月時的胸部CT檢查結果分為CR(腫瘤完全消失，且持續1個月以上，無復發或轉移)、PR(腫瘤最大直徑及垂直直徑的乘積縮小50%以上，病灶無增大，持續1個月以上)、NC(腫瘤兩徑乘積縮小不足50%，增大不超過25%，持續超過1個月)、PD(病灶兩徑乘積增大25%以上或有新病灶出現)。

1.2 DNA-PKcs的檢測 將73例患者治療前經手術或纖維支氣管鏡所取癌組織及癌旁組織進行免疫組化染色，顯微鏡下觀察。DNA-PKcs定位于細胞核，呈棕黃色或棕褐色顆粒。參考許良中的判斷標準，根據染色強度評分，無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;對每例的病理切片隨機掃描計數5個高倍視野(40×10)中的總細胞及陽性細胞數，陽性細胞率≤25%為0分、26% ～50%為1分、51% ～75%為2分、＞75%為3分;上述兩種計分的乘積＞3分為高表達、≤3分為低表達(陰性表達歸為低表達)。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。數據比較用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DNA-PKcs在癌組織及癌旁組織中的表達在73例NSCLC的癌組織中，DNA-PKcs高表達66例、低表達7例，高表達率為90.4%;在相應的癌旁組織中，DNA-PKcs高表達7例、低表達66例，高表達率為9.6%;兩種組織中DNA-PKcs的高表達率相比，P ＜0.01。

2.2 癌組織中DNA-PKcs的表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系 癌組織中DNA-PKcs的表達與患者性別、年齡、病理類型、TNM分期均無關(P均＞0.05)。詳見表 1。

表1 DNA-PKcs的表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系

2.3 癌組織中DNA-PKcs的表達與NSCLC放療近期療效的關系 未手術治療的38例NSCLC患者放療后，放射敏感組13例，DNA-PKcs高表達12例、低表達1例;放射不敏感組25例，DNA-PKcs高表達22例、低表達3例;兩組相比，P ＞0.05。

2.4 癌組織中DNA-PKcs的表達與NSCLC手術患者生存率的關系 35例手術治療的NSCLC，隨訪滿1 a者30例，存活19例、死亡11例，存活者DNAPKcs高表達17例、低表達2例，死亡者DNA-PKcs高表達10例、低表達1例，兩者相比，P＞0.05;隨訪滿2 a者26例，存活11例、死亡15例，存活者DNAPKcs高表達9例、低表達2例，死亡者DNA-PKcs高表達14例、低表達1例，兩者相比，P＞0.05。

3 討論

本研究結果顯示，在73例NSCLC的癌組織及癌旁組織中DNA-PKcs均有表達，但在癌組織中的高表達率達90.4%，而在癌旁組織中僅為9.6%，推測DNA-PKcs可能與NSCLC的發生有關;NSCLC癌組織中DNA-PKcs的表達與患者性別、年齡和腫瘤臨床分期無關，這與文獻［2，4］報道相符。余少平［5］等檢測了113例NSCLC組織，結果顯示，DNA-PKcs的表達與NSCLC的淋巴結轉移無關，在不同病理類型NSCLC中的DNA-PKcs高表達順序依次為細支氣管肺泡癌＞腺癌＞腺鱗癌＞鱗癌。而在本研究中，鱗癌、腺癌和其他類型NSCLC組織中DNA-PKcs的表達差異無統計學意義。

Shintani等［6］的研究顯示，DNA-PKcs的表達上調與口腔鱗癌的放射抗拒有關，提示DNA-PKcs可能成為口腔鱗癌放射增敏的一個新靶點。Lee等［7］的研究發現，鼻咽癌組織DNA-PKcs表達越高，放射治療的效果越差。Ortiz等［8］認為，DNA-PKcs表達增高是預示膀胱癌細胞輻射抗拒的表型。本研究結果顯示，DNA-PKcs的表達與NSCLC的放療近期療效及術后患者的1、2年生存率無關。但之前我們的研究證實DNA-PKcs反義寡核苷酸可增強肺腺癌A549細胞的放射敏感性［9］，說明DNA-PKcs與肺腺癌細胞的放射敏感性密切相關。本研究中DNAPKcs的表達與NSCLC的放射敏感性之間無關，原因可能有以下幾方面:①進入近期療效分析和生存率分析的病例數太少。②免疫組化技術敏感性的局限以及實驗中的各種誤差。③腫瘤活體組織中DNA-PKcs的表達受到更多因素的影響，且腫瘤放療敏感性的影響因素也很多。

［1］Bucci M，Bevan A，Roach M，et al.Advances in radiation therapy:conventional to 3D，to IMRT，to 4D，and beyond［J］.CA Cancer J Clin，2005，55(2):117-134.

［2］郝艷艷，胡雪君，劉云鵬，等.ERCC1、DNA-PKcs蛋白在非小細胞肺癌中的表達與預后的關系［J］.中國肺癌雜志，2008，11(2):226-230.

［3］Xing J，Wu X，Vaporciyan AA，et al.Prognostic significance of ataxia-telangiectasia mutated，DNA-dependent protein kinase catalytic subunit，and Ku heterodimeric regulatory complex 86-kD subunit expression in patients with non-small cell lung cancer［J］.Cancer，2008，112(12):2756-2764.

［4］黃梅芳，李文輝，楊振峰，等.DNA-PKcs在云南宣威富源肺腺癌組織中的表達與分期相關性研究［J］.云南醫藥，2007，30(4):407-410.

［5］余少平，熊永炎，田素芳，等.NSCLC中DNA-PKcs的表達及其凋亡相關蛋白關系的研究［J］.中國肺癌雜志，2003，6(5):356-359.

［6］Shintani S，Mihara M，Li C，et al.Up-regulation of DNA-dependent protein kinase correlates with radiation resistance in oral squamous cell carcinoma［J］.Cancer Sci，2003，94(10):894-900.

［7］Lee S，Cho K，Park H，et al.Expressions of Ku70 and DNA-PKcs as prognostic indicators of local control in nasopharyngeal carcinoma［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2005，62(5):1451-1457.

［8］Ortiz T，Lopez S，Burguillos MA，et al.Radiosensitizer effect of wortmannin in radioresistant bladder tumoral cell lines［J］.Int J Oncol，2004，24(1):169-175.

［9］牛道立，蔣昌斌，甄俊杰，等.DNA-PKCS反義寡核苷酸轉染肺腺癌細胞系A549提高放射敏感性的實驗研究［J］.中華放射腫瘤學雜志，2009，18(1):73-75.