黃瓜香提取物對(duì)大鼠急性心肌缺血的實(shí)驗(yàn)研究

彭湘萍 彭振宇 彭英福 呂江明 李春艷

1.湖南省吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理系，湖南 吉首 416000;2.湖南省湘西自治州人民醫(yī)院，湖南 吉首 416000;3.湖南省吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理系，湖南 吉首 416000

黃瓜香為堇菜科堇菜屬蔓莖堇菜 (Viola diffusa Ging，VDG)的全草，屬多年生草本植物，湘西地區(qū)亦稱黃花草、毛毛香，盛產(chǎn)于湘西、閩北等地區(qū)。其內(nèi)含豐富的化學(xué)成分，主要為有黃酮、香豆素、有機(jī)酸、糖類、氨基酸等，具有清熱解毒、散淤消腫、去腐生肌、清肺止咳、生肌接骨之效，民間使用歷史悠久。有研究發(fā)現(xiàn)黃瓜香可通過抑制超氧陰離子［1］，發(fā)揮抗氧化作用，而氧自由基生成及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是心肌缺血損傷的重要機(jī)制之一。黃瓜香是否具有心肌缺血保護(hù)作用未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用異丙腎上腺素制備心肌缺血模型，評(píng)價(jià)黃瓜香對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用，為進(jìn)一步探討黃瓜香的生物活性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑 黃瓜香的全草水提取物由吉首大學(xué)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，傳統(tǒng)方法水提、濃縮，臨用時(shí)用蒸餾水稀釋成所需濃度 (實(shí)驗(yàn)室所用劑量均與生藥計(jì));乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)測(cè)定試劑盒 (南京建成生物有限公司提供);鹽酸異丙腎上腺素 (上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)6E20003);其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器 723可見光分光光度計(jì) (上海光譜儀器有限公司);BL－420機(jī)能生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) (成都泰盟科技有限公司);95℃水浴箱;低速離心機(jī) (湖南凱達(dá)儀器公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只健康成年SD大鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體重200g左右，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。大鼠自由飲水和飲食，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后開始實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 大鼠急性心肌缺血模型制備及實(shí)驗(yàn)分組 60只大鼠隨機(jī)分成6組，每組10只:①正常對(duì)照組;②模型組;③黃瓜香低劑量組 (0.4g/kg);④黃瓜香中劑量組 (0.8g/kg);⑤黃瓜香高劑量組 (1.6g/kg);⑥消心痛組 (25mg/kg)。大鼠稱重，陽性組及黃瓜香按體重給予相應(yīng)的藥物灌胃，空白組給予同體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)7天。第6、7天灌胃1小時(shí)后，給予ISO(5mg/kg)［2］，腹腔注射，造成心肌缺血。末次給藥1小時(shí)后，3%戊巴比妥鈉 (1ml/kg)，腹腔注射麻醉動(dòng)物，背位固定，心電圖機(jī)針狀電極接在肢體導(dǎo)聯(lián)Ⅱ的位置，BL－420系統(tǒng)記錄大鼠1min，5 min，10 min，20 min心電圖，觀察心電圖 ST段及 T波變化。

2.2 血清CK、LDH測(cè)定 大鼠眼球取血，37°溫浴30min，2500轉(zhuǎn)/15min，吸取上層血清，分光光度計(jì)分別測(cè)定血清LDH、CK、SOD、MDA含量，嚴(yán)格按試劑盒說明操作。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間比較采用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 ()表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 心電圖記錄:除正常組外經(jīng)Ⅱ?qū)?lián)心電圖記錄各組心電圖ST段抬高明顯，T波高尖明顯，說明心肌缺血造模成功。見圖1。

圖1 急性心肌缺血心電圖表現(xiàn)

3.2 黃瓜香對(duì)心肌損傷大鼠血清LDH、CK含量的影響與正常組比較，模型組大鼠血清中LDH、CK含量均升高(P＜0.05);與模型組比較，黃瓜香各劑量組，消心痛組均可不同程度減低血清中LDH、CK含量，其中高劑量組作用比低劑量組作用更明顯，提示黃瓜香具有調(diào)節(jié)心肌酶的作用，并具有一定的劑量依賴關(guān)系 (P＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 黃瓜香對(duì)急性心肌缺血大鼠血清LDH、CK含量的影響 (x±S)

3.3 黃瓜香對(duì)心肌損傷大鼠血清SOD、MDA的影響 與正常組比較，模型組大鼠血清中SOD含量明顯降低，MDA含量明顯升高 (P＜0.05)。黃瓜香各劑量組，消心痛組均可不同程度增加血清中SOD含量，且不同程度降低MDA含量，;與模型組比較具有明顯差異性 (P＜0.05)，其中高劑量組作用比低劑量組作用更明顯，提示黃瓜香具有抗氧化的作用，并具有一定的劑量依賴關(guān)系。

4 討論

缺血性心臟病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，如冠心病、心絞痛等發(fā)病率逐年上升。因此尋求抗心肌缺血的天然藥物是一種有效的途徑。急性心肌缺血時(shí)冠脈供血不足或耗氧量增加均可導(dǎo)致心肌缺血損傷，心肌損傷時(shí)心肌細(xì)胞膜的通透性增加，導(dǎo)致心肌中LDH、CK釋放入血，故血清中CK、LDH活性越高，心肌損傷越嚴(yán)重，是實(shí)驗(yàn)和臨床公認(rèn)的對(duì)心肌缺血有診斷意義的酶，可作為判斷心肌缺血損傷程度的指標(biāo)［3］。心肌缺血時(shí)機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生大量氧自由基，氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸 (PUFA)，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，如丙二醛 (MDA)。MDA為氧自由基攻擊生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其值可間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。超氧化物歧化酶(SOD)是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)。SOD活性的高低間接地反映了機(jī)體清除自由基的能力，它是機(jī)體清除氧自由基的重要酶類，能清除超氧陰離子，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，常被作為反映氧自由基清除能力的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用異丙腎上腺素 (ISO)造成急性心肌缺血模型，ISO為β受體強(qiáng)激動(dòng)劑，大劑量應(yīng)用能誘導(dǎo)心肌產(chǎn)生不可逆的缺血損傷［4］，給予三個(gè)劑量的黃瓜香處理，觀察對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，模型組大鼠血清中LDH、CK及MDA含量增加，SOD含量下降。黃瓜香各劑量組能降低心肌缺血大鼠血清中LDH、CK及MDA含量，升高血清中SOD含量。抗氧化損傷一直是心肌缺血治療的重要措施之一［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黃瓜香能穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜，減少心肌酶外漏，能夠增強(qiáng)機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力，減少細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷，這可能是其保護(hù)心肌缺血的機(jī)制之一。說明黃瓜香具有減輕心肌損傷，對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果將為進(jìn)一步研究黃瓜香的藥理療效提供重要依據(jù)，為天然藥物抗心肌缺血提供新的思路。

［1］李先輝，李春艷，呂江明，方世賢，彭湘萍.黃瓜香水提物體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)［J］.吉首大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(5):95－97.

［2］胡旭光，相湘，楊超燕，周毅生.丹酚酸B對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用［J］.廣東醫(yī)藥，2010，31(3):334－336.

［3］徐光佑，謝勇，藺曉源，劉柏炎，蔡光先.超微參附湯對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用［J］.吉林中醫(yī)藥，2010.30(7):633－634.

［4］王道成，李七一，朱萱萱，嚴(yán)士海，秦曉康，馬俊杰.“冠心平”對(duì)大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用研究［J］.江蘇中醫(yī)藥，2010，42(11):79－81.

［5］王維亭，趙專友，周則衛(wèi)，湯立達(dá)，劉厚孝，魯卓林.核桃殼提取物對(duì)大鼠急性心肌缺血作用的影響［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30(5):386－368.