生長抑素聯合應用黃芪對裸鼠結腸移植瘤的影響

樊占兵

(灤縣人民醫院普外一科，河北 灤縣 063700)

生長抑素是存在于胃黏膜、胰島、胃腸道神經、垂體后葉和中樞神經系統中的肽激素，能夠抑制胃分泌和蠕動，以及在下丘腦/垂體中抑制促生長素的釋放，是一種具有廣泛的生物效應的環狀多肽類激素[1]。人工合成生長抑素類似物如醋酸奧曲肽注射液(善寧)是一種天然生長抑素的八肽衍生物，它保留了與生長抑素類似的藥理作用，且作用持久[2]。在動物實驗中，善寧抑制生長激素、胰高糖素和胰島素的作用較生長抑素更強，且對生長激素和胰高糖素的選擇性更高。長期(26周)給藥，大鼠的劑量達1 mg/(kg·d)(腹膜內注射)，狗的劑量達0.5 mg/(kg·d)(靜脈注射)，均能被很好耐受[3]。有研究表明，奧曲肽不僅能抑制絕大多數具有神經內分泌功能的腫瘤增殖，對普通的實體性腫瘤亦存在抑制作用[4]。黃芪是祖國醫學里一味常用的中藥，在臨床上應用廣泛。也有研究表明，傳統的補氣藥黃芪具有抗腫瘤能力。實驗證實，黃芪在體內和體外均有抗腫瘤作用。但二者的報導均較少見。二者聯合的抗腫瘤研究更少[5]。本研究通過建立人結腸癌裸鼠原位種植轉移模型探討生長抑素聯合應用黃芪對裸鼠結腸原位移植瘤生長和轉移的作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 建立裸鼠人結腸癌原位移植瘤模型 制作裸鼠人結腸癌原位種植轉移模型，采用BALB/C裸鼠81只[購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司：SCXK(滬)2011—0010]，全為雄性，鼠齡5周左右，體重20 g左右，在SPF級條件下飼養。在超凈生物層流架內飼養裸鼠，定期環境紫外線消毒，保持恒溫、恒濕，高壓蒸汽滅菌籠具、飲水，在無菌罩內進行實驗操作。采用中國科學院上海細胞所提供的人的結腸癌瘤株，在裸鼠腹股溝接種癌細胞的懸液，得到實體瘤后將瘤組織切成2 mm×2 mm×2 mm的瘤塊。用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉實驗裸鼠。無菌罩內常規消毒皮膚，經腹正中切口入腹，鉗出盲腸壁，于腸末端切開漿膜，將腫瘤組織塊縫入盲腸切開處。

1.2 實驗分組及所用藥物 采用隨機分組方法將荷瘤鼠分為4組，每組20只，種植后第1天開始腹腔注射藥物，每12 h注射1次，各組所用藥物如下：生長抑素聯合黃芪組：腹腔注射注射善寧注射液50 μg/(kg·次)+黃芪注射液500 mg/(kg·次)；生長抑素組：腹腔注射善寧注射液50 μg/(kg·次)；黃芪組：腹腔黃芪注射液500 mg/(kg·次)；D組：生理鹽水組，腹腔注射生理鹽水10 μl/(g·d)。

1.3 評價指標 移植瘤瘤體積：種植后35 d，將荷瘤鼠處死，取出原位腫瘤，用游標卡尺測量腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，按公式計算腫瘤體積：V(mm3)=∏/6×(a+b)3。腫瘤抑制率：腫瘤抑制率=(1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100%。相對腫瘤增殖率：(實驗組相對腫瘤體積/對照組相對腫瘤體積)×100%。肝、肺或腹膜轉移率：處死小鼠后，檢查肝、肺和腹膜，對可疑轉移病灶送病理檢查，肝、肺或腹膜轉移率=(肝、肺或腹膜轉移裸鼠個數/該組裸鼠總個數)×100%。腹水發生率：檢查荷瘤鼠結腸癌轉移情況標本用10%甲醛固定、包埋后蘇木精一伊紅染色，作組織病理學檢測。觀察腹水出現情況。腹水發生率=(腹水發生裸鼠數/該組裸鼠總個數)×100%。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計學分析軟件包進行數據處理，計量資料采用均值±標準差（±s）表示，計量資料行t檢驗，計數資料用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 四組裸鼠平均移植瘤瘤體積的比較 生長抑素聯合黃芪組的平均移植瘤瘤體積小于其他三組，差異均有統計學意義(P＜0.01)；生長抑素組與黃芪組的平均移植瘤瘤體積差異無統計學意義(P＞0.05)，而生理鹽水組的平均移植瘤瘤體積最大，見表1。

表1 四組裸鼠的平均移植瘤瘤體積比較（±s）

表1 四組裸鼠的平均移植瘤瘤體積比較（±s）

組別 只數 移植瘤瘤體積(mm3)t值P值生長抑素聯合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組20 20 20 20 1061±165 1361±251 1392±326 1698±435＞10.3621 0.3369＜0.01 0.3737＞19.6184＜0.01

2.2 四組裸鼠腫瘤抑制率的比較 生長抑素聯合黃芪組的腫瘤抑制率高于其他三組，差異均有統計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的腫瘤抑制率差異無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 四組裸鼠的腫瘤抑制率比較（±s）

表2 四組裸鼠的腫瘤抑制率比較（±s）

χ2組別生長抑素聯合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組只數20 20 20 20腫瘤抑制率(%)89.34±3.45 60.31±6.81 61.52+5.21 0 20.7764 0.6310 P值＜0.01 0.2643

2.3 四組裸鼠相對腫瘤增殖率的比較 生長抑素聯合黃芪組的相對腫瘤增殖率小于其他三組，差異均有統計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的相對腫瘤增殖率差異有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 四組裸鼠的相對腫瘤增殖率比較（±s）

表3 四組裸鼠的相對腫瘤增殖率比較（±s）

組別生長抑素聯合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組只數20 20 20 20相對腫瘤增殖率(%)25.62±6.94 53.61±12.36 63.95±15.92 100 χ2 8.8306 2.2943 P值＜0.01 0.0110

2.4 四組裸鼠肝、肺或腹膜轉移率的比較 生長抑素聯合黃芪組的肝、肺或腹膜轉移率(10%)小于其他三組，差異均有統計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的肝、肺或腹膜轉移率差異無統計學意義(P＞0.05)，生理鹽水組的肝、肺或腹膜轉移率最大，見表4。

表4 四組裸鼠的肝、肺或腹膜轉移率比較

2.5 四組裸鼠腹水發生率的比較 生長抑素聯合黃芪組的腹水發生率(10%)小于其他三組，差異均有統計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的腹水發生率差異無統計學意義(P＞0.05)，D組(生理鹽水組)的腹水發生率最大，見表5。

表5 四組裸鼠的腹水發生率比較

3 討論

研究證實生長抑素能抑制不同正常細胞和腫瘤細胞的生長和發展。在體內和體外實驗中，生長抑素類似物對多種實驗室模型顯示出抗腫瘤作用[6]。奧曲肽注射液(善寧)是一種人工合成的天然生長抑素的八肽衍生物，它保留了與生長抑素類似的藥理作用，且作用持久[7]。研究表明，奧曲肽不僅能抑制絕大多數具有神經內分泌功能的腫瘤增殖，對普通的實體性腫瘤亦存在抑制作用[8]。黃芪是祖國醫學里一味常用的中藥，在臨床上應用廣泛，而傳統的補氣藥黃芪具有抗腫瘤能力，在體內和體外均有抗腫瘤作用[9-11]。本研究通過建立人結腸癌裸鼠原位種植轉移模型探討生長抑素聯合應用黃芪對裸鼠結腸原位移植瘤生長和轉移的作用。本研究結果提示生長抑素聯合黃芪組在抑瘤率和相對腫瘤增值率，肝、肺或腹膜轉移率，腹水發生率等方面均優于生長抑素組和黃芪組(P＜0.01)，其具體機制有待進一步研究。

綜上所述，筆者認為生長抑素聯合應用黃芪比單獨應用生長抑素或黃芪更能顯著抑制裸鼠結腸原位移植瘤的生長和轉移，臨床可考慮使用。

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