HPLC測定小建中膠囊中芍藥苷的含量

趙仙文

（山西省朔州市朔城區北城醫院，山西 朔州 030062）

小建中湯出自漢代《傷寒論》，原方由芍藥六兩，桂枝三兩去皮，甘草二兩，生姜三兩，大棗十二枚，飴糖一升組成，具有溫中補虛、和里緩急之功效，用于腹中時痛，溫按則痛減，舌淡苔白，脈弦細，或四肢痠楚，手足煩熱，咽干口燥；或心中悸動，虛煩不寧，面色無華的虛勞里急證［1］。中成藥小建中膠囊是按傳統處方配伍，將單味中藥經煎煮、濃縮、干燥后混合精制而成，與傳統飲片使用相比雖然具有服用量少、攜帶方便、劑量準確、藥物穩定、便于儲存等優點，但也存在大量爭議。本實驗用HPLC法對小建中膠囊中芍藥苷的含量進行測定，現將結果總結報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

日本島津LC-2010高效液相色譜儀，CLASSVP色譜處理系統（配有四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器），電子天平（METTLER AE-200）。

1.2 藥品與試劑

芍藥苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200628；乙腈、甲醇均為色譜純；水為實驗室專用純水機XYD-10-H處理超純水；其余試劑均為分析純。小建中膠囊為我院自制，經我院藥房主管藥師鑒定。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱（4.6 mm×250 mm），十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫檢測為常溫（30℃），檢測波長為260 nm，以乙腈-0.1%磷酸（15∶85）溶液為流動相，流速1.0 mL/min，進樣量為 10 μL。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取經干燥的芍藥苷對照品5.060 mg，置10 mL量瓶中，加無水乙醇，制成每1 mL含芍藥苷0.506 0 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備［2-3］

精密稱取經干燥后研細的樣品0.6 g，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇30 mL，密塞，置40℃恒溫水浴中溫浸4 h，不時振搖，濾過，濾渣用無水乙醇洗滌5次，每次10 mL，洗滌液與濾液合并，濃縮并定容于10 mL量瓶中，搖勻即可。

2.4 陰性對照品溶液制備

按本品處方去除白芍，按照制備工藝制成陰性對照品，并按照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.5 線性關系學考察

精密稱取芍藥苷對照品0.5 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶液并稀釋至刻度，搖勻，即得標準品儲備液。分別精密吸取上述標準品儲備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，分別稀釋定容于25 mL量瓶中，各取20 μL注入色譜儀中測定，按上述色譜條件依次進樣測定峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積的積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=11 078.289X+3.569，r=0.999 5，芍藥苷在0.1 μg/mL～1.2 μg/mL之間呈良好的線性關系。

2.6 精密度實驗

精密吸取0.506 0 mg/mL濃度的對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測芍藥苷峰面積，結果RSD為1.25%，表明儀器進樣精密度良好。

2.7 重現性實驗

取相同批次的小建中膠囊，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進樣20 μL，測峰面積，結果RSD為1.0%，表明測定方法重現性良好。

2.8 穩定性實驗

取同一供試樣品溶液分別在 0 h、2 h、4 h、8 h、20 h進樣20 μL，結果表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的研細樣品0.6 g，分別置具塞錐形瓶中，照2.3項方法進行操作，得到6份供試品溶液，分別吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定，結果見表1。

表1 小建中膠囊中芍藥苷含量測定與加樣回收率結果

2.10 樣品含量測定

取不同批次的小建中膠囊，照上述方法測定5批樣品中芍藥苷的含量，結果見表2。

表2 5批樣品測定結果

根據芍藥苷測得的結果，將本品中芍藥苷含量限度定為本品每丸含芍藥苷（C23H28O11）不得少于28 mg。

3 討 論

中藥復方制劑中以芍藥苷為指標進行含量測定的報道近年來比較多，研究報道，使用薄層色譜法測定小建中湯復方制劑中芍藥苷的含量，其操作復雜，誤差大，重現性不佳［4-5］。我們使用高效液相色譜法進行小建中膠囊中芍藥苷含量測定，結果表明選擇性好，方法簡便成熟。在檢測波長的選擇上，芍藥苷對照品溶液在180 nm～600 nm波長范圍內，最大吸收波長為260 nm，因此我們選擇260 nm作為檢測波長。在流動相上我們比較了甲醇-磷酸二氫鉀緩沖溶液、甲醇-磷酸二氫鉀緩沖溶液-水、乙腈-磷酸溶液為流動相作試驗，結果表明乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相分離效果最好。在提取方法上我們比較了40℃恒溫水浴中溫浸4 h和超聲提取芍藥苷兩種方法，結果表明40℃恒溫水浴中溫浸的提取率高于超聲提取，在該實驗中我們采用了40℃恒溫水浴中溫浸法是可取的。經實驗表明，HPLC測定小建中膠囊中芍藥苷的含量結果準確，精密度、重現性良好，平均回收率為99.895%，RSD為0.9%，故芍藥苷可作為小建中膠囊的質量控制指標。

［1］許濟群，王綿之，許子建，等.方劑學［M］.上海：上海科技出版社，1985：102.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：化學工業出版社，2010.

［3］張貴中.常用中藥化學鑒定［M］.北京：化學工業出版社，2005：191.

［4］王綺秋.中藥制劑成分現代分析法［M］.貴陽：貴州科技出版社，1991：18.

［5］梁宏，王春芳.高效液相色譜法測定八珍丸中芍藥苷的含量［J］.藥物分析雜志，1999，19（2）：44-45.