離體兔Oddis括約肌壓力和肌電的同步檢測

張志波，李國平，何 謙，李智華

（1.福建醫科大學附屬第一醫院肝膽胰外科，福建 福州 350004； 2.福建醫科大學附屬第一醫院病理科，福建 福州 350004；3.第三軍醫大學西南醫院肝膽外科研究所，重慶 400312）

Oddis括約肌在膽汁和胰液的排出過程中具有重要作用，其運動功能異常可導致多種膽道和胰腺疾病。檢測離體Oddis括約肌的運動功能和肌電活動是了解各種因素對該平滑肌組織直接影響的重要手段和方法，目前國內外對Oddis括約肌運動和肌電的檢測方法均采用切開肌片法［1-3］，此方法對Oddis括約肌組織的損害大，不能完整地觀察該平滑肌段離體后的運動方式和肌電活動。我們在實驗過程中發現快速取出的完整Oddis括約肌段在Crebs液中仍可保持較長時間的活性，用自制的黏觸式肌電和壓力同步檢測管插入離體Oddis括約肌后測得了穩定的肌電波和壓力波，該實驗方法為進一步檢測各種因素對Oddis括約肌的單獨和聯合作用提供了一個簡單易行的實驗模型。本文介紹離體Oddis括約肌壓力波和肌電波同步檢測方法，并與在體檢測結果進行比較。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

12只健康成年家兔，由第三軍醫大學實驗動物中心提供，雌雄不限，體重2.5 kg～3.0 kg。實驗前12 h禁食，可自由飲水。

1.2 實驗方法

1.2.1 Crebs液配制 每1 000 mL中含有（mM）：Nacl 1 112.4，KCl 4.7，MgSO4·7H2O 0.12，KH2PO41.2，NaHCO325，CaCl2（無水）2.5，葡萄糖10.1。配成無色透明溶液后以鹽酸滴定pH值為7.4［4］。

1.2.2 肌電及測壓系統 HW-400S恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司），RM6240多道生理儀及信號采集處理系統（成都儀器廠），PC polygram HR高分辨、多通道胃腸功能測定儀（瑞典CTD-SyneticsMedical公司）；自制接觸性電極和低順應性毛細灌注測壓同步檢測管（圖 1）［5］，其外徑 1.2 mm，共 1 個測壓通道和2個接觸性電極。低順應性毛細管灌注系統將Crebs液以0.2 mL/min的速度灌注入導管內腔。

圖1 自制接觸性電極和低順應性毛細灌注測壓同步檢測管

1.2.3 在體檢測肌電和壓力 實驗兔禁食12 h后（可自由飲水），肌注速眠新（0.2 mL/kg）麻醉，快速自腹正中線進腹，于幽門下方約3 cm左右可見白色Oddis括約肌乳頭，于乳頭對側縱向切開十二指腸2 cm，將直徑1.2 mm的自制接觸性電極和低順應性毛細灌注測壓同步檢測管插入Oddis括約肌，共1個測壓通道和2個接觸性電極。同時記錄下肌電波和壓力波。

1.2.4 離體Oddis括約肌制備及肌電和壓力檢測 于手術顯微鏡下可見膽管末端雙側對稱的小血管包繞至Oddis括約肌乳頭，沿此血管完整切除Oddis括約肌段至膽總管下段，長約3 cm。將切除的Oddis括約肌段立即轉至37℃Crebs液中，熱缺血時間均小于10 s，浴槽底部通入95%O2加5%CO2。將上述相同檢測管插入離體括約肌管腔中。同法檢測離體后1 h及2 h的肌電和壓力波幅，此時的收縮運動及肌電基礎壓、壓力波幅及肌電電壓和頻率每個時間點各取20個連續波的平均值，實驗數據采取記錄，使用SPSS 13.0軟件進行配對樣本t檢驗。

2 結果

12只實驗兔均同步檢測到穩定的離體Oddis括約肌的肌電波和壓力波，壓力波幅、肌電信號強度與在體檢測結果比較差異無統計學意義（P>0.05），基礎壓及頻率離體較在體明顯降低，但離體后2 h與1 h強度無明顯變化（見圖2～圖5，表1）。

圖2 在體壓力波

圖3 在體肌電波

圖4 離體后1 h壓力波

圖5 離體后1 h肌電波

表1 離體與在體Oddis括約肌的肌電波和壓力波，壓力波幅及肌電信號強度測定 （）

表1 離體與在體Oddis括約肌的肌電波和壓力波，壓力波幅及肌電信號強度測定 （）

注：與在體比較，1）P＜0.05

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3 討 論

Crebs液多用于離體肌片運動的研究，如本文所述的保持完整形態的離體組織運動功能的研究未見報道，主要原因在于離體組織沒有血液供應，維持其生理活動所需的各種物質及代謝后的有害物質的去除完全依靠滲透交換。家兔是一種研究Oddis括約肌肌電活動較為理想的動物［6］，我們在實驗研究中發現離體后的兔Oddis括約肌仍有較好的活性，離體運動波形在2 h后仍穩定存在，較初離體時無明顯減弱，說明該實驗方法對于研究離體Oddis括約肌的運動是可行的。主要原因可能在于兔Oddis括約肌壁在測壓管插入后本身厚僅約2 mm～3 mm，滲透交換條件較好，將非Oddis括約肌組織去除也有利于物質交換及離體后活性的保持。低順應性灌注系統測壓時通常應用無菌注射用水，但因其為低滲液，使用后對于沒有血供的離體Oddis括約肌可致組織水腫，影響離體組織功能，因此我們改用Crebs液灌注。但每次使用后應用不含電解質的無菌注射用水徹底沖洗測壓系統，避免Crebs液中離子沉淀后堵塞測壓系統的管道。

離體后的Oddis括約肌失去了上級神經支配，其運動方式完全受肌間神經元控制。從本實驗結果中我們可以看出，離體后的括約肌基礎壓、收縮頻率較在體明顯下降，反映離體平滑肌的興奮性和緊張性較在體時下降，Oddis括約肌的收縮頻率可能由上級神經元或是體液因素所支配。離體實驗中測得的肌電電壓無明顯降低，可能說明離體和在體所測得的肌電活動都是Oddis括約肌肌間神經元和平滑肌的電活動共同活動的結果。我們可以看出離體和在體肌電中都有一個高電壓的單峰波，兩者周圍的群波在電壓大小和電波樣式上非常相似，說明該離體實驗模型可以很好地反映Oddis括約肌的肌電活動。實驗所測得的壓力波幅與在體無明顯區別，此結果與肌電的強度相符合，筆者認為可能是由于平滑肌的收縮運動由肌間自主神經元所控制，上級神經的電活動主要起到頻率和緊張性的調節，而非直接控制肌細胞的收縮運動，其具體機制還有待進一步研究探索。

離體Oddis括約肌的運動功能和肌電活動是了解各種因素對該平滑肌組織在排除神經體液調節影響后作用的一種重要手段和方法，該實驗方法可以在保持Oddis括約肌生理形態的前題下檢測其離體后的收縮運動和肌電活動，并且獲得了與在體檢測相一致的收縮運動的波形和肌電信號，簡單易行且實驗過程中檢測指標穩定，可為研究各種因素對離體Oddis括約肌的作用提供一個新的簡易可靠的實驗模型。

［1］Sand J，Nordback I，Arvola P，et al.Effects of botulinum toxin A on the sphincter of Oddis：an in vivo and vitro study［J］.Gut，1998，42（4）：507-510.

［2］Cullen J J，Park H，Ephgrave K S，et al.Lipopolysaccharide tem －porarily impairs sphincter of Oddis motility［J］.Bio and Chem，2001，6（5）：547-554.

［3］Cullen J J，Conklin J L，Murray J，et al.Effects of recombinant human hemoglobin on opossum sphincter of Oddis motor function in vivo and in vitro［J］.Dig Dis Sci，1996，41（2）：1 292-1 294.

［4］李智，馬麗.內皮素對兔離體Oddis括約肌功能的影響［J］.沈陽醫學院學報，2005，7（1）：5-7.

［5］陳飛，李虎城，李智華，等.黏膜接觸電極在家兔Oddis括約肌肌電測量中的應用價值［J］.中華肝膽外科雜志，2006，12（12）：544-546.

［6］徐紅梅，李虎城，胡志安，等.研究Oddis括約肌肌電活動的實驗動物模型的建立［J］.中華肝膽外科雜志，2006，12（12）：841-843.