鮮生地對大鼠腸源性內毒素血癥防治作用的實驗研究

天津南開醫院 (天津 300100)房 杰 孫蘭菊 陳明慧

腸源性內毒素血癥[1]在臨床疾病的發生發展過程中起著非常重要的作用,目前被越來越多的人重視,已成為臨床及科研熱點問題。腸缺血再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury,I/R)不僅可導致腸道粘膜局部組織壞死,產生腸源性內毒素血癥,還可導致腸道菌群移位和腸吸收功能的改變,以及遠處器官的損害,甚至發生多系統器官功能不全綜合征。本研究擬通過腸缺血再灌注建立大鼠腸源性內毒素血癥模型,觀察鮮生地治療對腸源性內毒素血癥的影響,探討其作用機制,為腸源性內毒素血癥的治療提供思路。

材料與方法

1 材 料 鮮生地來源于河南武陟縣,經鑒定為玄參科植物地黃的根狀莖,采購后真空凍存保鮮[2],去皮后榨汁使用。乳果糖口服液由蘇威制藥生產。內毒素測定試劑盒由上海醫學實驗所提供。

2 方 法

2.1 實驗動物與分組:健康成年 SD大鼠 180只,體質量 200～ 220g,由軍事醫學科學院四所動物中心提供,實驗前適應性喂養 3d。隨機分為 5組,即正常組、腸缺血再灌注(I/R)組、I/R+鮮生地大劑量組(15ml/kg體質量)、I/R+鮮生地小劑量組(7.5ml/kg體質量)和 I/R+乳果糖組(7.5ml/kg體質量),每組36只,雌雄各半。正常組、I/R模型組按 7.5ml/kg體質量生理鹽水灌胃,用藥組給予相應劑量藥物灌胃。提前給藥 3d后造模,術前禁食 12h,自由飲水。

2.2 大鼠模型的建立:參照 Koike等方法復制腸I/R模型。大鼠腹腔注射 10%水合氯醛(30ml/kg體質量)麻醉,經腹正中切口,分離腸系膜上動脈,微動脈夾夾閉其根部,30min后取出動脈夾,恢復血供,進行腹部切口縫合,再灌注 24h、48h、72h時麻醉下腹腔切開,留取門靜脈血液,腸組織標本。

2.3 顯微鏡觀察:距十二指腸球部 10cm處相同部位取約 1cm腸管,4℃生理鹽水洗去腸內容物,除去外膜脂肪組織,固定于 4%多聚甲醛 12h。常規石蠟切片,HE染色,在光鏡下觀察。腸粘膜病理損傷程度分 5級。光鏡下閱片由兩人分別獨立進行,取均值,按照分級進行評分。

2.4 內毒素測定:血液肝素抗凝后,在 4℃低溫離心機,500r/min離心 10min后,分離血漿,采用合成基質偶氮顯色法鱟試驗測定血漿內毒素。

2.5 統計學方法:數據處理采用 SPSS11.5軟件,結果以(±s)表示。組內治療前后比較用方差分析,組間比較采用 t檢驗。

結 果

1 各組大鼠血漿內毒素含量變化:I/R組血漿各時點 ET含量明顯高于正常組,鮮生地大、小劑量組及乳果糖組與 I/R組相比,各時點血漿 ET含量均明顯降低。而鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組各時點血漿ET水平無顯著差異,見表 1。

表1 各組大鼠門靜脈血內毒素含量比較(±s,Eu/ml)

表1 各組大鼠門靜脈血內毒素含量比較(±s,Eu/ml)

注:I/R組與正常組比較,各時點 P＜0.01;I/R組與鮮生地大、小劑量組,乳果糖組相比,各時點 P＜0.05;鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組相比,各時點 P＞ 0.05。組內比較,鮮生地大、小劑量組,乳果糖組不同時點 P＜0.01

組 別 n 24h 48h 72h正常組 12 0.046± 0.004 0.047± 0.002 0.045± 0.006 I/R組 12 0.303± 0.108 0.257± 0.034 0.146± 0.028生地小劑量組 12 0.178± 0.030 0.096±0.007 0.060±0.008生地大劑量組 12 0.173± 0.011 0.093±0.007 0.058±0.010乳果糖對照組 12 0.169± 0.006 0.094±0.008 0.056±0.007

2 各組腸粘膜病理損傷情況及評分:正常組小腸粘膜結構完整,無毛細血管淤血和炎癥細胞浸潤(圖A)。 I/R組小腸粘膜明顯損傷,隨 I/R時間的延長,腸粘膜損傷加重,腸絨毛排列紊亂,至粘膜脫落和出血(圖 B)。炎癥細胞浸潤增多且逐漸擴散,由充血進而出血且范圍擴大,以至造成為中重度損傷,甚至累及漿膜層。鮮生地大、小劑量組及乳果糖組各時點腸粘膜損傷程度較 I/R組有明顯改善,見表 2。

表2 各組大鼠腸粘膜損傷評分表

圖 A 正常組(HE× 100)

圖 B I/R組 (HE×100)

討 論

腸道作為人體的消化器官,在維持機體正常營養中起著極其重要的作用[3]。腸道依靠其屏障功能及正常的微生態環境等,有效阻止腸道細菌移位和內毒素血癥的發生。但腸粘膜的缺血缺氧及再灌注損傷、應激性損傷、營養障礙等因素[4,5]均可直接或間接造成腸道屏障的破壞,從而使腸粘膜通透性升高。腸屏障功能減弱,就可使大量的細菌和內毒素經由門靜脈和腸系膜淋巴系統侵入體循環,造成腸源性內毒素血癥和細菌移位,并在一定條件下激發細胞因子和其它炎癥介質反應,產生持續性全身炎癥反應,導致多器官功能衰竭(MODS)。

我們的研究結果觀察到 I/R組血漿各時點 ET含量明顯高于正常組,鮮生地大、小劑量組及乳果糖組與I/R組相比,各時點血漿 ET含量均明顯降低。而鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組各時點血漿 ET水平無顯著差異,證實了鮮生地對腸源性內毒素血癥具有治療作用。同時鮮生地大、小劑量組及乳果糖組各時點腸粘膜損傷程度較 I/R組有明顯改善。I/R組大鼠腸粘膜損傷評分明顯高于正常組,鮮生地汁大、小劑量組及乳果糖組與 I/R組相比,腸粘膜損傷評分明顯降低,提示鮮生地汁、乳果糖可使腸粘膜損傷降低,對腸粘膜有保護作用。

鮮生地偏于寒,具有清熱生津之功效,味甘苦,性大寒,苦寒泄熱,甘寒質潤,以養陰潤燥,入心肝血分,具有緩瀉作用。腸源性內毒素血癥可納入中醫熱證范疇,應用鮮生地甘、苦、寒的特性治療藥對其證。趙潤生等[6]研究表明生地黃能明顯改善血瘀證大鼠血液流變學相關指標,具有改善微循環的作用。 Prieto JM等[7]研究了 15種中國抗炎的藥用植物對白血球和血小板功能的影響,發現地黃能有選擇的抑制完整白血球和血小板 12-(S)-HHT1E(一個有效的環加氧酶活性標志)產生,表明其具有一定的抗炎癥作用。綜上考慮鮮生地治療對腸粘膜的保護作用可能與其改善微循環、抗炎作用以及富含多種氨基酸物質等有關。總之,應用鮮生地汁治療對腸源性內毒素血癥具有治療作用,其機理可能與鮮生地緩瀉及對腸粘膜的保護作用有關。

[1]陳煒萍.腸毒清顆粒治療脾虛兼濕熱內蘊型肝硬化腸源性內毒素血癥 60例[J].陜西中醫,2010,31(1):22-24.

[2]賈建偉,李俊萍,馬 瑩,等.鮮生地保鮮技術的研究 [J].中草藥,2005,36(10):1569-1570.

[3]李秋偉,劉旭強,房 杰,等.鮮生地汁對大鼠腸缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究[J].陜西中醫,2008,29(2):241-242.

[4]劉春峰,袁 壯.內臟缺血缺氧代謝障礙在 SIRS和MODS中的作用 [J].小兒急救醫學,2000,7(4):180-182.

[5]Secchi A,Ortanderl JM,Schmidt W,et al.Effect of endotoxemia on hepatic portal and sinusoidal blood flow in rats[J].J Surg Res,2000,89(1):26-30.

[6]趙潤生,張一昕,苗冬雪,等.生地黃對血瘀模型大鼠血液流變性的影響[J].中藥藥理與臨床,2006,22(3、4):123.

[7]Prieto JM,Recio M C,Giner RiM,et al.Influence of traditional Chinese anti inflammatory medicinal plants on leukocyte and platelet functions[J].J Pharm Pharmacol,2003,55:1275-1282.