龍花膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺所致血小板減少癥小鼠骨髓巨核細(xì)胞的影響*

張亞密 王希勝 趙艷莉 王院春 張莉莉 杜 鵑

陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(咸陽(yáng) 712000)

龍花膠囊系陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科王希勝主任醫(yī)師的研究精華,臨床用于治療惡性腫瘤放、化療后血小板減少癥,療效確切。我們采用腹腔注射環(huán)磷酰胺復(fù)制成化療后血小板減少癥模型,觀察龍花膠囊對(duì)模型小鼠骨髓巨核細(xì)胞的影響。

1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠 60只,雄性,6～8周齡,體重 18～22g,購(gòu)于西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 主要試劑及藥品 中成藥龍花膠囊,配方組成:仙鶴草 50g,花生衣 50g,大棗 10枚;制備方法:將花生衣乙醇提取液與仙鶴草、大棗水提取液合并、濃縮、干燥、粉碎、制粒、整粒、干燥、裝膠囊,0.35g/粒 (生藥含量為 0.1675g/粒,由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心配制)。巨和粒 1.5mg/支(齊魯制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)號(hào):S20030016)。環(huán)磷酰胺 200mg/支(山西普德藥業(yè)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)號(hào):H14023686)。

1.3 主要儀器設(shè)備 超凈工作臺(tái)、電子天平、解剖顯微鏡、CKX31-A12PHP-O LIM PU S倒置顯微鏡、X S2-81光學(xué)顯微鏡等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 將 60只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、巨和粒組(C組)、龍花膠囊小劑量組(D組)、中劑量組(E組)和大劑量組 (F組),每組 10只。先用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng) 1周后,除空白對(duì)照組 (A組)外,其余 50只依據(jù)新藥研究指導(dǎo)原則[1]及徐氏[2]介紹方法,腹腔注射環(huán)磷酰胺75mg/kg,每日 1次,連續(xù) 3d,以小鼠停藥后 3d左右血小板計(jì)數(shù)下降至注射環(huán)磷酰胺前計(jì)數(shù)的 20%～30%為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。 A、B組每日用生理鹽水 0.4mL/只/天灌胃,C組每日用巨和粒 0.25μg/g皮下注射,D、E、F組分別以 42mg/mL、84mg/mL、168mg/mL濃度的龍花膠囊藥液 0.4mL灌胃,各組每日用藥 1次,連續(xù)用藥 14d。造模后第 14天頸椎脫臼處死小鼠,剪下股骨,用 2.5mL注射器吸取少量的 PBS緩沖液,向骨髓腔內(nèi)快速推入,沖洗出骨髓細(xì)胞,繼而定量涂片、風(fēng)干后瑞氏-姬姆沙染色、油鏡下計(jì)數(shù) 1.0mm×1.0mm范圍內(nèi)骨髓巨核細(xì)胞數(shù),每只小鼠本骨髓片制作 3張,取平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所得到數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組之間的兩兩比較用配對(duì)t檢驗(yàn),以 P＜0.05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與模型組對(duì)比較,中藥大、中劑量組、巨和粒組均能促進(jìn)骨髓巨核細(xì)胞增值,中藥大劑量組與巨和粒組相比無(wú)顯著性差異 (P＞0.05),中藥中、小劑量組與巨和粒組相比有顯著性差異(P＜0.05)。各組小鼠骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)比較見(jiàn)附表。

附表 骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(個(gè)/mm2)(± s,n=10)

附表 骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(個(gè)/mm2)(± s,n=10)

注:與空白對(duì)照組比較★P＜0.05,有顯著性差異;與模型對(duì)照組比較▲P＜0.05,有顯著性差異;與巨和粒組比較●P＞0.05,無(wú)顯著性差異。

組 別 n(只) 骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)空白對(duì)照組 10 29.65± 2.77模型組 10 7.46± 1.60★巨和粒組 10 30.84± 3.28▲中藥小劑量組 10 8.61± 1.96★中藥中劑量組 10 13.26± 1.39★▲中藥大劑量組 10 29.55± 2.85▲●

4 討 論 化療引起血小板減少癥是指在化療期間及之后較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi),化療藥物破壞了骨髓內(nèi)巨核細(xì)胞增殖成熟與外周血液中血小板衰老之間的平衡,導(dǎo)致外周血血小板不同程度的降低[3]。血小板的產(chǎn)生是由造血干細(xì)胞在造血微環(huán)境中經(jīng)過(guò)多種調(diào)節(jié)因子的復(fù)雜作用下逐步完成的。造血干細(xì)胞(HSC)在造血組織中數(shù)量很少,但有多向分化的潛能,故也稱多能造血干細(xì)胞(PHSC)。它具有高度自我更新和自我復(fù)制的能力。對(duì)于血小板生成而言,最早的造血干細(xì)胞稱為全能造血干細(xì)胞,即淋巴-骨髓造血干細(xì)胞,它分化為髓系限制性干細(xì)胞,這種干細(xì)胞可進(jìn)一步分化為巨核系祖細(xì)胞,繼之分化為巨核細(xì)胞,該細(xì)胞體積巨大,成熟的巨核細(xì)胞邊緣部分破裂脫落后形成血小板,每個(gè)巨核細(xì)胞平均能生成 2000個(gè)左右的血小板[4]。骨髓巨核細(xì)胞是生成血小板的物質(zhì)基礎(chǔ),因而研究骨髓巨核細(xì)胞對(duì)于研究血小板減少癥具有十分重要的病理學(xué)意義。

龍花膠囊是王希勝主任醫(yī)師在其臨床經(jīng)驗(yàn)方“花紅湯”、“龍花湯”基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)反復(fù)臨床驗(yàn)證,根據(jù)臨床需要及療效,篩選、優(yōu)化處方組合,并經(jīng)過(guò)多種制劑研究研制而成的復(fù)方中藥制劑。由仙鶴草、花生紅衣和大棗三味組成,花生衣別名長(zhǎng)果衣、落花生衣、紅薄皮,性味甘、澀、平,入肺、脾、肝經(jīng),有止血散瘀、消腫之功;仙鶴草性平,味微苦辛,無(wú)毒,入肺、肝、脾經(jīng),具有止血健胃之功效;大棗甘、微溫,入脾、胃經(jīng),有補(bǔ)中益氣、養(yǎng)血安神、抗癌的功效,大棗水提取物可緩解腫瘤病人放、化療后骨髓抑制的不良反應(yīng)[5]。三味相伍健脾養(yǎng)胃、益氣攝血。臨床觀察花紅湯 (花生衣 50g,仙鶴草 30g,大棗 10枚 )治療腫瘤化療后血小板減少癥 50例,結(jié)果 7d后血小板升高絕對(duì)值＞ 20×109/L者占 90%[6];在常規(guī)化療基礎(chǔ)上加用龍花湯預(yù)防化療后血小板減少癥,與單純化療組對(duì)照,結(jié)果顯示加用龍花湯(花生衣、仙鶴草各 50g,大棗 10枚)組較單純化療組血小板抑制情況輕[7]。為便于患者服用 ,將花紅湯研制成龍花膠囊。王春霞等用龍花膠囊治療化療后血小板減少患者,治療組化療后口服龍華膠囊連服 21d,對(duì)照組不治療。結(jié)果顯示治療組血小板減少分級(jí)明顯優(yōu)于對(duì)照組[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:中藥大、中劑量組、巨和粒組都能促進(jìn)骨髓巨核細(xì)胞增值,中藥大劑量組與巨和粒組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05);由此提示:一定濃度的龍花膠囊藥液能促進(jìn)骨髓巨核細(xì)胞增值,有促進(jìn)血小板生成的作用。

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