龍花膠囊對環(huán)磷酰胺所致血小板減少癥小鼠骨髓巨核細胞的影響*

張亞密 王希勝 趙艷莉 王院春 張莉莉 杜 鵑

陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院(咸陽 712000)

龍花膠囊系陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科王希勝主任醫(yī)師的研究精華,臨床用于治療惡性腫瘤放、化療后血小板減少癥,療效確切。我們采用腹腔注射環(huán)磷酰胺復制成化療后血小板減少癥模型,觀察龍花膠囊對模型小鼠骨髓巨核細胞的影響。

1 材料與方法 1.1 實驗動物 昆明小鼠 60只,雄性,6～8周齡,體重 18～22g,購于西安交通大學實驗動物中心。

1.2 主要試劑及藥品 中成藥龍花膠囊,配方組成:仙鶴草 50g,花生衣 50g,大棗 10枚;制備方法:將花生衣乙醇提取液與仙鶴草、大棗水提取液合并、濃縮、干燥、粉碎、制粒、整粒、干燥、裝膠囊,0.35g/粒 (生藥含量為 0.1675g/粒,由陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院制劑中心配制)。巨和粒 1.5mg/支(齊魯制藥有限公司,國藥準號:S20030016)。環(huán)磷酰胺 200mg/支(山西普德藥業(yè)有限公司,國藥準號:H14023686)。

1.3 主要儀器設備 超凈工作臺、電子天平、解剖顯微鏡、CKX31-A12PHP-O LIM PU S倒置顯微鏡、X S2-81光學顯微鏡等。

1.4 實驗方法 將 60只雄性昆明小鼠隨機分為空白對照組(A組)、模型組(B組)、巨和粒組(C組)、龍花膠囊小劑量組(D組)、中劑量組(E組)和大劑量組 (F組),每組 10只。先用標準飼料喂養(yǎng) 1周后,除空白對照組 (A組)外,其余 50只依據(jù)新藥研究指導原則[1]及徐氏[2]介紹方法,腹腔注射環(huán)磷酰胺75mg/kg,每日 1次,連續(xù) 3d,以小鼠停藥后 3d左右血小板計數(shù)下降至注射環(huán)磷酰胺前計數(shù)的 20%～30%為造模成功的標準。 A、B組每日用生理鹽水 0.4mL/只/天灌胃,C組每日用巨和粒 0.25μg/g皮下注射,D、E、F組分別以 42mg/mL、84mg/mL、168mg/mL濃度的龍花膠囊藥液 0.4mL灌胃,各組每日用藥 1次,連續(xù)用藥 14d。造模后第 14天頸椎脫臼處死小鼠,剪下股骨,用 2.5mL注射器吸取少量的 PBS緩沖液,向骨髓腔內(nèi)快速推入,沖洗出骨髓細胞,繼而定量涂片、風干后瑞氏-姬姆沙染色、油鏡下計數(shù) 1.0mm×1.0mm范圍內(nèi)骨髓巨核細胞數(shù),每只小鼠本骨髓片制作 3張,取平均值。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析,所得到數(shù)值以均數(shù)±標準差表示,各組之間的兩兩比較用配對t檢驗,以 P＜0.05作為顯著性差異的標準。

2 結(jié) 果 實驗結(jié)果表明:與模型組對比較,中藥大、中劑量組、巨和粒組均能促進骨髓巨核細胞增值,中藥大劑量組與巨和粒組相比無顯著性差異 (P＞0.05),中藥中、小劑量組與巨和粒組相比有顯著性差異(P＜0.05)。各組小鼠骨髓巨核細胞計數(shù)比較見附表。

附表 骨髓巨核細胞計數(shù)比較(個/mm2)(± s,n=10)

附表 骨髓巨核細胞計數(shù)比較(個/mm2)(± s,n=10)

注:與空白對照組比較★P＜0.05,有顯著性差異;與模型對照組比較▲P＜0.05,有顯著性差異;與巨和粒組比較●P＞0.05,無顯著性差異。

組 別 n(只) 骨髓巨核細胞計數(shù)空白對照組 10 29.65± 2.77模型組 10 7.46± 1.60★巨和粒組 10 30.84± 3.28▲中藥小劑量組 10 8.61± 1.96★中藥中劑量組 10 13.26± 1.39★▲中藥大劑量組 10 29.55± 2.85▲●

4 討 論 化療引起血小板減少癥是指在化療期間及之后較長的一段時間內(nèi),化療藥物破壞了骨髓內(nèi)巨核細胞增殖成熟與外周血液中血小板衰老之間的平衡,導致外周血血小板不同程度的降低[3]。血小板的產(chǎn)生是由造血干細胞在造血微環(huán)境中經(jīng)過多種調(diào)節(jié)因子的復雜作用下逐步完成的。造血干細胞(HSC)在造血組織中數(shù)量很少,但有多向分化的潛能,故也稱多能造血干細胞(PHSC)。它具有高度自我更新和自我復制的能力。對于血小板生成而言,最早的造血干細胞稱為全能造血干細胞,即淋巴-骨髓造血干細胞,它分化為髓系限制性干細胞,這種干細胞可進一步分化為巨核系祖細胞,繼之分化為巨核細胞,該細胞體積巨大,成熟的巨核細胞邊緣部分破裂脫落后形成血小板,每個巨核細胞平均能生成 2000個左右的血小板[4]。骨髓巨核細胞是生成血小板的物質(zhì)基礎(chǔ),因而研究骨髓巨核細胞對于研究血小板減少癥具有十分重要的病理學意義。

龍花膠囊是王希勝主任醫(yī)師在其臨床經(jīng)驗方“花紅湯”、“龍花湯”基礎(chǔ)上經(jīng)過反復臨床驗證,根據(jù)臨床需要及療效,篩選、優(yōu)化處方組合,并經(jīng)過多種制劑研究研制而成的復方中藥制劑。由仙鶴草、花生紅衣和大棗三味組成,花生衣別名長果衣、落花生衣、紅薄皮,性味甘、澀、平,入肺、脾、肝經(jīng),有止血散瘀、消腫之功;仙鶴草性平,味微苦辛,無毒,入肺、肝、脾經(jīng),具有止血健胃之功效;大棗甘、微溫,入脾、胃經(jīng),有補中益氣、養(yǎng)血安神、抗癌的功效,大棗水提取物可緩解腫瘤病人放、化療后骨髓抑制的不良反應[5]。三味相伍健脾養(yǎng)胃、益氣攝血。臨床觀察花紅湯 (花生衣 50g,仙鶴草 30g,大棗 10枚 )治療腫瘤化療后血小板減少癥 50例,結(jié)果 7d后血小板升高絕對值＞ 20×109/L者占 90%[6];在常規(guī)化療基礎(chǔ)上加用龍花湯預防化療后血小板減少癥,與單純化療組對照,結(jié)果顯示加用龍花湯(花生衣、仙鶴草各 50g,大棗 10枚)組較單純化療組血小板抑制情況輕[7]。為便于患者服用 ,將花紅湯研制成龍花膠囊。王春霞等用龍花膠囊治療化療后血小板減少患者,治療組化療后口服龍華膠囊連服 21d,對照組不治療。結(jié)果顯示治療組血小板減少分級明顯優(yōu)于對照組[8]。本實驗結(jié)果顯示:中藥大、中劑量組、巨和粒組都能促進骨髓巨核細胞增值,中藥大劑量組與巨和粒組相比無顯著性差異(P＞0.05);由此提示:一定濃度的龍花膠囊藥液能促進骨髓巨核細胞增值,有促進血小板生成的作用。

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