黃柏五味膏對兔實驗性膝關節滑膜炎滑液中 NO的影響

林占軍 內蒙古自治區烏蘭察布醫學高等專科學校(烏蘭察布 012000)

骨關節炎(OA)滑膜炎,OA滑膜炎反復發作,長年不愈,急性發作期疼痛腫脹嚴重,因此對滑膜炎病因、治療方法及藥物的研究越來越受到重視。為了驗證滑膜炎經驗方(黃柏五味膏)臨床治療效果,本課題將健康兔造模成實驗性兔膝骨關節滑膜炎模型,通過外用藥膏(黃柏五味膏)的治療,測定關節液 NO水平來證實其治療滑膜炎的效果。進一步探討治療滑膜炎的作用機理。

1 材料與方法 1.1 實驗材料 實驗動物:健康日本大耳白兔 40只 ,雌雄各半,體重 2.5±0.5kg,由西安交大醫學院實驗動物中心提供。質量合格證號:陜醫動字 08-018。實驗藥品及試劑:黃柏五味膏 由黃柏 3份,梔子、乳香各 2份,銀花1份,冰片 0.5份共研細末,過 120目篩 ,與凡士林按 2:8比例混合制成軟膏(所用藥物均購自于陜中附院中藥房)。扶他林軟膏:北京諾華制藥有限公司,國藥準字:H19990291,批號X0704。木瓜蛋白酶:由河北博海生物工程有限公司提供,批號000607。 NO試劑盒(硝酸還原酶法):南京建成生物工程研究所 ,批號 20060320。

1.2 實驗方法 造模與分組:適應性喂養 7d后,死亡 1只。動物按體重隨機分為 4組:空白組 9只、模型組、對照組及治療組各 10只。后 3組參照日本鬼頭康彥[1]兔膝關節腔內注入木瓜蛋白酶造成滑膜炎病變模型方法。

給藥及觀察:獲得穩定的骨關節炎性滑膜炎模型[2]開始,對照組外涂扶他林軟膏,治療組外敷黃柏五味膏。空白組和模型組外涂凡士林,4組均每天 2次。 8周后,動物處死切開關節囊,用 2mL注射器吸取關節液 0.5mL,用等量鹽水稀釋后,按試劑盒說明書,用硝酸還原酶法測定 NO含量。

2 實驗結果 開始造模后第 1天模型組死亡一只,可能由于創傷反應所致。關節液 NO含量測定(硝酸還原酶法)結果見附表。

附表 關節液 NO含量的測定(±s)(mmol/L)

附表 關節液 NO含量的測定(±s)(mmol/L)

注:與模型組比較,△P＜0.01,與空白組比較,▲P＜0.01

組 別 n關節液模型組 9 40.17± 8.89▲治療組 10 19.76± 5.95△對照組 10 22.73± 7.37△空白組 9 16.72± 5.56△

關節液 NO含量,模型組與空白組比較,有顯著性差異(P＜0.01);治療組及對照組與模型組比較均明顯降低,有顯著性差異(P＜0.01)。模型組關節液中 NO含量顯著升高,應用黃柏五味膏可降低關節液中 NO含量。

3 討 論 臨床研究證明,OA患者血清及關節液中 NO的含量增高,且關節液中的 NO又明顯高于血清[3]。O A關節中NO的產生主要來于軟骨細胞和滑膜細胞,關節中的炎性因子刺激軟骨細胞和滑膜細胞一氧化氮合成酶(iNOS)表達,產生NO[4]。高培國等[5]認為 NO主要產生于滑膜,而后入滑液,經淋巴系統進入血液循環系統。并認為 OA患者中高的 NO濃度是由于滑膜炎變化而引起的。

本實驗主要觀察對象是 O A繼發滑膜炎動物模型,重在滑膜炎形成。Pritzker總結了向實驗兔關節內注射蛋白水解酶,特別是木瓜蛋白酶,建立骨關節炎動物模型機制,雖然與人正常膝骨關節炎滑膜炎發生不同,但注射木瓜蛋白酶就會短時間誘發滑膜炎,并伴有軟骨破壞,病理變化與骨關節滑膜炎中晚期相似[6]。最終選擇了鬼頭康彥的向關節腔注射木瓜蛋白酶的造模方法。

黃柏五味膏以黃柏為君藥;梔子、乳香、銀花為臣藥;冰片為使藥。功效為清熱解毒,活血止痛,利濕消腫。本病正虛標實,風寒濕熱內侵為標,瘀血阻絡加重的表現。全國規劃六版教材《中醫骨病學》將本病分為邪實證(包括風寒濕痹和風濕熱痹)、正虛證和瘀血證[7]。大量臨床觀察滑膜炎急性發作期主要以風濕熱痹證和瘀血證為多見,“急則治其標”,以清熱、活血、消腫、止痛為立方大法,輔以凡士林制外膏,借藥力作用,將黃柏五味膏有效成份直接導入病變部位,可以明顯改善局部營養,有效消除滑膜炎癥。

現代藥理研究認為,黃柏增強白細胞吞噬作用,收縮血管,減輕炎癥反應。梔子、乳香、銀花 ,具有利尿消腫,減少炎性滲出,促進壞死組織愈合。冰片有抗炎作用 ,還具有促進外用藥物的滲透作用[8]。

[1]Kitohy,Katsuvamakit,Tanakah,etal.Effect of SL 1010 on experimental osteoarthritis induced by intro articularly,applied papain in rabbits[J].Folia pharmacol japon,1992,100:67.

[2]汪清春.骨關節炎動物模型的建立和選擇[J].中醫正骨,1998,10(3):40.

[3]Miyasaka N,Hirata Y.Nitric oxide and inflammatory arthritides[J].Life Sei,1997,61:2073.

[4]Evans CⅡ,stefanovic Racic M,Lancaster J.Nitric oxide and its role in orthopaedic disease[J].Clin Orthop,1995,312:275.

[5]高培國,陳百成,湯慧華,等.一氧化氮在骨性關節炎發病機制中的作用[J].中華骨科雜志,1997,19(7):411-414.

[6]王學謙,婁思權,李世民,等.骨關節炎診斷與治療[M].天津:天津科技翻譯出版公司,2005:140.

[7].浩,婁多峰.中醫骨病學[M].上海:上海科學技術出版社,1998:38-62.

[8]沈映君.中藥藥理學[M].北京:人民衛生出版社,2004:231.