兩種降鈣素原檢測方法的比較研究

高紅軍，鄭 敏，周艷秋*，王洪武

1.煤炭總醫院中心實驗室，北京 100028；2.北京市朝陽區三間房第二社區衛生服務中心，北京 100024

降鈣素原（procalcitonin，PCT）目前主要用于鑒別嚴重細菌感染和病毒感染、自身免疫性疾病所致的炎癥性反應[1]。PCT是由116個氨基酸組成的糖蛋白，是降鈣素（calcitonin，CT）的前體[2]。外周血中的PCT通常在嚴重的細菌感染及膿毒血癥時才明顯升高，由此PCT可用來早期檢測敗血癥，并快速評估其嚴重程度[3-5]。目前臨床上使用的PCT檢測方法主要分為兩大類，一類是定量檢測，一類是半定量檢測。定量檢測和半定量檢測在實際臨床應用中結果是否完全一致值得探討，本研究選用國產定量檢測試劑盒和進口半定量檢測試劑盒對比研究其檢測結果的一致性。

1 材料與方法

1.1 材料

PCT定量檢測試劑盒購自深圳新產業生物醫學工程有限公司（批號：F68100801188）；PCT半定量檢測試劑盒購自德國B.R.A.H.M.S公司（批號：0106007）。60例檢測標本為2010年12月～2011年3月實驗室接收的臨床送檢標本。PCT半定量法隨時檢測送檢標本，剩余血清-80℃保存用于PCT定量檢測（一次完成）。

1.2 方法

1.2.1 定量PCT檢測 嚴格按照廠家試劑盒標準操作規程進行試驗。標準品、質控品、標本各加20 μl，然后加發光物標記抗體 20 μl，加熒光素標記抗體 20 μl，混勻，37℃水浴 15 min；加磁分離試劑 40 μl，混勻，37℃水浴 5 min，上磁分離器分離4 min，倒去上清；加應用洗滌液 400 μl，混勻，上磁分離器分離4 min，倒去上清；重復一次洗滌過程；直接按要求上機測試。PCT濃度與相對光強度（RLU）成一定的比例關系，儀器自動擬合計算PCT濃度。

1.2.2 半定量PCT檢測 將分離后的血清200 μl加到反應孔中，定時開始，觀察反應區的顏色變化，如果2～3 min后反應區無較明顯的顯色反應，繼續加血清200 μl至反應孔中，再計時30 min后觀察反應區的顏色。在紅色的對照帶顯示的前提下（證明PCT試驗有效），如果加入的總血清量為200 μl，比照200 μl的比色卡讀出PCT的大概范圍（結果分為<0.5 ng/ml，≥0.5 ng/ml，≥2 ng/ml，≥10 ng/ml）；如果加入的總血清量為400 μl，比照 400 μl的比色卡讀出 PCT 的大概范圍（結果分為<0.25 ng/ml，≥0.25 ng/ml，≥1 ng/ml，≥5 ng/ml）。

2 結果

本研究共收集了60例進行半定量PCT測定的標本，隨后用定量檢測試劑盒分析了PCT的具體含量，比較二者檢測結果的一致性（表1）。不同半定量范圍內的PCT與定量PCT檢測結果是否一致的判斷標準如下：①≥10 ng/ml的標本，只要定量檢測值≥10 ng/ml即認為二者檢測結果一致；②半定量PCT結果介于中間值范圍的標本，只要定量檢測值在相應的范圍內，即認為二者檢測結果一致；③<0.25 ng/ml的標本，只要定量檢測值＜0.25 ng/ml即認為二者檢測結果一致；④定量值如果超出對應的半定量范圍，那么超出范圍的定量數值是否與半定量PCT檢測結果一致，按照如下標準判斷，如果定量數值低于下限，如有按照二者檢測一致判斷，否則認為二者檢測結果不一致；如果定量數值高于上限，如有按照二者檢測一致判斷，否則認為二者檢測結果不一致。從表中可以看出兩種方法檢測結果一致率達90%，只有10%的標本檢測結果相差比較大。

表1 半定量PCT與定量PCT檢測結果一致性比較

3 討論

PCT的臨床檢測方法主要包括定量法和半定量法[6]，二者的檢測基礎均是利用了抗原抗體的特異性免疫反應。本試驗采用的定量檢測法的原理是免疫發光夾心法：采用針對PCT的一株單克隆抗體標記ABEI，另一株標記FITC。標本、標準液、質控液與ABEI標記的單克隆抗體，FITC標記的單克隆抗體，混勻置37℃孵育形成“夾心三明治”，加入包被羊抗FITC抗體的納米免疫磁性微珠，37℃孵育后外加磁場沉淀目的抗原抗體復合物，去掉上清液漂洗后通過檢測發光強度（RLU）判斷PCT的含量。其他廠家的定量檢測試劑的原理基本類似，不同的地方主要是與抗體相連的示蹤物和標記物不同，自動化程度略有不同。半定量法主要是應用一個單克隆鼠抗katacalcin（一種PCT降解產物）抗體結合在膠體金上（示蹤物）和一個多克隆羊抗降鈣素抗體（固相）。標本加到反應孔后，示蹤物結合樣品中的PCT并形成明顯的抗原抗體復合物。該復合物經虹吸作用通過觀察區，在這里標記的抗原抗體復合物結合到固定的抗降鈣素抗體上形成夾心復合物。當PCT高于檢測下限時，夾心復合物呈紅色帶，顏色深淺與樣品中的PCT濃度成正比。未結合的示蹤物擴散到對照區，結合并產生了紅色的對照帶。

半定量PCT檢測有方法簡單、報告結果快、不受標本數量和特殊設備限制等優點，然而由于半定量檢測需要肉眼觀察色帶，不同操作者的判斷可能截然不同，尤其是接近陽性下限值時比較難判斷，有時可能誤導臨床醫生的治療。因此，PCT的定量檢測顯得尤為重要，尤其是對于需要定期觀測治療效果的患者很有意義。本研究比較了兩種不同方法的檢測結果，由于一種是定量檢測，另一種是半定量檢測，檢測結果不能進行相關性分析，因此本研究借鑒相對偏差的分析方法判斷二者檢測結果是否一致，其中偏差計算中的平均數是上限值或下限值與超出范圍的定量值和的一半，單純從數值考慮，相對偏差小于10%時筆者認為二者檢測結果一致，超過10%則認為檢測結果不一致。如果按照半定量PCT檢測方法中小于0.25 ng/ml作為陰性值的判斷標準，那么從檢測結果陰陽性的角度考慮，其中54例二者的檢測結果一致，一致率高達90%。

定量方法需要同時做標準曲線和質控品，從實驗室效益管理角度考慮，比較適合臨床標本比較多的實驗室。半定量法的主要優勢在于檢測快速，不受標本數量限制，比較適合急診科、ICU等重癥監護患者的定性判斷。本研究結果表明兩種檢測方法的檢測結果還是比較一致的，均是臨床上比較可靠的方法，每個實驗室可以根據自己的實際情況選擇其中一種或聯合兩種檢測方法為臨床提供及時可靠的檢測報告。

[1]楊濱,康梅.降鈣素原在細菌感染性疾病診斷及治療中的應用[J].現代預防醫學,2009,36(3):596-597.

[2]Oberhoffer M,Karzai W,Meier-Hellmann A,et al.A new diagnostic parameter for severe infections and sepsis[J].Anaesthesist,1998,47(7):581-587.

[3]Sudhir U,Venkatachalaiah RK,Kumar TA,et al.Significance of serum procalcitonin in sepsis[J].Indian J Crit Care Med,2011,15(1):1-5.

[4]陳自武.降鈣素原、超敏C反應蛋白與外周血堿性磷酸酶積分在細菌感染中應用探討[J].臨床和實驗醫學雜志,2010,9(8):572-573.

[5]杜冀暉,蘇卓娃,麥麗文,等.血清降鈣素原測定在兒科感染性疾病診斷中的應用[J].臨床和實驗醫學雜志,2006,5(9):1320-1321.

[6]陳淑丹.降鈣素原的臨床應用及不同檢測方法[J].現代醫學儀器與應用,2007,19(4):61-62.