萬寧廣藿香青枯病菌生物變種和生理小種調查＊

楊春雨 ，魏建和 ，，張 爭 ，馮錦東 ，甘炳春

(1.中國醫學科學院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護與開發重點實驗室，海南 萬寧 571533;2.中國醫學科學院藥用植物研究所，北京 100193)

廣藿香是重要的南藥之一，是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.，以葉、梗入藥，味辛，性微溫，歸脾、胃、肺經，功能芳香化濕、和胃止吐、祛暑解表，主治濕阻中焦之脘腹痞悶、食欲不振、嘔吐、泄瀉，外感暑濕之寒熱頭痛，濕溫初起的發熱身困、胸悶惡心，鼻淵，手足癬[1]。青枯病是廣藿香的毀滅性病害。為更好地防治廣藿香青枯病，我所對該病原菌的生物變種和生理小種分布進行了深入的調查研究，現報道如下。

1 材料

廣藿香青枯病原菌為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.[2]，海南省萬寧市廣藿香種植區采樣(表1)，分離培養、鑒定獲得。樣本采集1～3級的新鮮病株，常規處理樣本。病株的分級標準:病害葉片少于10%為1級，11% ～20%為 2級，21% ～50%為3級，51% ～80%為4級，大于81%(至死亡)為5級。實驗苗木有芭蕉(二倍體香蕉)、貢蕉(三倍體香蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等，育苗獲得。實驗室設備為常規設備。

表1 病原菌編號及采樣點(海南省萬寧市)

2 方法與結果

2.1 生物變種鑒定

廣藿香青枯病原菌生物變種鑒定方法參考文獻[3]進行。如果接種菌株能利用“三糖三醇”，產酸時菌種培養液顏色比對照淺，產堿時菌種培養液顏色比對照深;如果接種菌株不能利用“三糖三醇”，則菌種培養液顏色與對照相同。生物變種鑒定表見表2。參考文獻[3]，配制Ayers培養基;分別加入乳糖、麥芽糖、纖維二糖、甘露醇、山梨醇、衛茅醇，消毒;加入按要求配制的菌液，裝管，培養3～4周。將不接種的培養液設為對照。結果編號為1－8的每支試管菌種培養液顏色都比對照管淺，表明廣藿香青枯病原菌8個菌株都能利用“三糖三醇”產酸，都屬于青枯菌生物變種Ⅲ。

表2 青枯菌生物變種鑒定表[3]

2.2 生理小種鑒定

青枯菌生理小種鑒定表[2－4]:見表3。

致病性鑒定[2－3]:采用輸液接種法，將在KBA培養基上培養24～48 h的菌苔稀釋為1×107～1×108個/mL的菌種懸浮液，用0.55×20型靜脈輸液針頭導入植物體內。寄主為廣藿香、二倍體香蕉(芭蕉)、三倍體香蕉(貢蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯;茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等苗木均為10～15 cm，二倍體香蕉和三倍體香蕉主干20～25 cm。田間溫度30～32℃，相對濕度85% ～90%，土壤相對濕度15% ～18%。1～2周后觀察結果。以無菌水代替菌種懸浮液，設為對照。結果見表4。可見，編號1－8的菌株對廣藿香、番茄、茄子、煙葉、馬鈴薯等致病力較強，但對二倍體香蕉和三倍體香蕉無致病力，表明8個菌株都是青枯菌生理小種1。

表3 青枯菌生理小種鑒定表

表4 廣藿香青枯病原菌生理小種寄主致病性鑒定結果

煙葉過敏試驗:采用1×107～1×108個/mL的菌種懸浮液，以注射針頭注入煙葉的支葉脈，每點間距0.01～0.03 cm，1～2周后觀察結果。結果編號1－8的菌株對煙葉都有較強的致病力，接種點都出現壞死斑，表明8個菌株都是青枯菌生理小種1。

黑色素反應檢測:將 L－酪氨酸培養基鋪成平板后，分別接種各菌株，1周后觀察結果。結果培養1周后，盡管編號1－8的菌株產生黑色素的多少略有差異，出現時間遲早也略有不同，但總體上都能產生大量黑色素，故8個菌株都鑒定為生理小種1。

3 討論

在海南省萬寧市各種植區，廣藿香青枯病原菌都為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.生物變種Ⅲ、生理小種1;廣藿香青枯病原菌生物變種和生理小種的種類單一，可能與各種植區的苗木來源相同有關。本研究采用的是隨機采樣法。該法自有其合理性，但與全面采樣法相比仍存在差異。

[1]中醫藥管理局《中華本草》編輯委員會.中華本草(7冊)[M].上海:上海科學技術出版社，1999:130－134.

[2]文衍堂，鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學報，1984(2):113－120.

[3]任欣正.植物病原細菌的分類和鑒定[M].北京:中國農業出版社，1999:16－17，142－143.

[4]鄒 陽，肖崇剛.重慶地區煙草青枯病菌生理小種的初步鑒定[J].煙草科技，2008(5):60－64.