鋅對酒精性肝損害小鼠保護(hù)作用的研究

張素云，許秀舉

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)科，內(nèi)蒙古包頭 014040；2.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014040

隨著人們生活水平的提高及經(jīng)濟(jì)活動日趨活躍，飲酒人數(shù)越來越多，現(xiàn)在飲酒已經(jīng)成為很多人生活中必不可少的一部分。但酒精引起的相關(guān)疾病也逐漸被人們所認(rèn)識。酒精可引起肝臟、胃、心臟、腦組織等多個臟器的損害，尤其是酒精性肝病發(fā)病率最高。酒精性肝病已成為男性的第四大死因[1]。目前，解酒保肝已成為醫(yī)學(xué)界與生物界迫切需要解決的問題。本研究采用一次大劑量白酒灌胃的方法，制作白酒模型[2]，探討急性大量飲酒對肝組織酶的影響以及不同劑量鋅對急性酒精性肝損害小鼠的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，均為雄性，體重18～24 g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心提供，為清潔級動物。合格證號為SCXKC蒙2002-0001。

1.1.2 主要試劑 葡萄糖酸鋅，北京高科藥物有限責(zé)任公司生產(chǎn)；紅星二鍋頭酒，紅星股份有限公司生產(chǎn)；谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）測定試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及處理 將50只健康昆明種小鼠（均為雄性）隨機分為5組，每組各10只，分別為空白對照組，白酒對照組和鋅低、中、高3個劑量組，含鋅劑量分別為1.25、2.50、5.00mg/kg。其中空白對照組和白酒對照組飲用自來水；其他各組飲用自由溶于水的鋅溶液。各組大鼠均采用自由飲用的方式，連續(xù)飲用30 d。在實驗期間，每周稱一次體重，觀察小鼠的一般狀況。第30天時對小鼠進(jìn)行空腹白酒灌胃實驗。實驗時采用一次大劑量白酒灌胃的方法[2]，按12 ml/kg體重對各組小鼠進(jìn)行灌胃，16 h后處死小鼠，取小鼠肝組織，測定各項指標(biāo)。

1.2.2 肝組織勻漿的制備 處死小鼠后立即打開腹腔取出肝組織，制成組織勻漿。組織勻漿用低溫離心機離心10 min，取適量上清液進(jìn)行MDA、GSH-Px、ALT、谷AST的測定。

1.2.3 各項生化指標(biāo)測定 肝勻漿谷胱甘肽活性、MDA含量測定：采用二硫代對硝基苯甲酸法（DTNB法）測定肝勻漿中GSH-Px，硫代巴比妥酸法（TBA法）測定肝勻漿中MDA含量。肝勻漿ALT、AST含量測定：采用賴氏法測定，按試劑盒說明操作進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析，計量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示。采用單因素方差分析 （One-Way ANOVA）比較組間差異。

2 結(jié)果

2.1 實驗動物的一般情況

在整個實驗過程中，所有小鼠活動正常，健康狀況良好，無死亡現(xiàn)象發(fā)生。隨著實驗的進(jìn)行，各組小鼠體重逐漸增加，但各組間平均體重比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）

2.2 小鼠肝組織酶測定結(jié)果

見表1。由表1可見，白酒對照組及各劑量鋅組與空白對照組比較，肝組織谷胱甘肽明顯下降，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。各劑量鋅組與白酒對照組比較稍有升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。說明飲白酒可使肝組織受損，谷胱甘肽過氧化物酶明顯下降，但葡萄糖酸鋅干預(yù)對肝組織的谷胱甘肽保護(hù)作用不明確。

表1 小鼠肝組織谷胱甘肽測定結(jié)果[±s，mmol/（kg·min）]

表1 小鼠肝組織谷胱甘肽測定結(jié)果[±s，mmol/（kg·min）]

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

?

2.3 小鼠肝組織丙二醛測定結(jié)果

見表2。從表2可見，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織丙二醛明顯升高，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。各劑量鋅組與白酒對照組比較明顯降低，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。說明飲白酒可使肝組織受損，丙二醛明顯升高，經(jīng)葡萄糖酸鋅干預(yù)可使肝組織中丙二醛下降。

表2 小鼠肝組織丙二醛測定結(jié)果（±s，μmol/g）

表2 小鼠肝組織丙二醛測定結(jié)果（±s，μmol/g）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

P2值空白對照組白酒對照組鋅低劑量組鋅中劑量組鋅高劑量組組別 只數(shù)1010101010丙二醛測定值1.5861±0.70594.0310±1.40182.9256±1.25601.8177±0.87211.7688±0.7397 P1值0.0000.0070.0010.0010.0450.7220.7790.203

2.4 小鼠肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定結(jié)果

見表3。由表3可見，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），不同劑量鋅干預(yù)與白酒對照組相比，谷丙轉(zhuǎn)氨酶有所下降，僅高劑量鋅組與白酒對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明葡萄糖酸鋅對酒精性肝損害小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶影響與劑量相關(guān)。

表3 小鼠肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨測定結(jié)果（±s，U/L）

表3 小鼠肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨測定結(jié)果（±s，U/L）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

P2值組別 只數(shù)1010101010空白對照組白酒對照組鋅低劑量組鋅中劑量組鋅高劑量組谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定值22.2860±7.170835.3600±12.661927.6950±4.064324.1500±11.101222.2870±4.9897 P1值0.0320.2040.0650.0320.0080.3570.5540.722

2.5 小鼠肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶測定結(jié)果

見表4。從表4可以看出，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），不同劑量鋅干預(yù)與白酒對照組相比，谷草轉(zhuǎn)氨酶有所下降，中、高劑量鋅組與白酒對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明葡萄糖酸鋅對酒精性肝損害小鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶有影響。

表4 小鼠肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶測定結(jié)果（±s，U/L）

表4 小鼠肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶測定結(jié)果（±s，U/L）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

?

3 討論

酒精引起急慢性肝損害的原因非常復(fù)雜，研究普遍認(rèn)為與脂質(zhì)過氧化、炎癥介質(zhì)、內(nèi)毒素、細(xì)胞因子和免疫調(diào)節(jié)等多種因素有關(guān)[3-4]。有研究證實，脂質(zhì)過氧化在酒精性肝病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[5]，從某種角度上來講，脂質(zhì)過氧化是機體正常生理過程，但過度的脂質(zhì)過氧化卻可以造成肝臟損傷[6]。抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是減輕肝臟損害的有效途徑。目前，國內(nèi)外陸續(xù)有報道，N-乙酰半胱氨酸、卵磷脂及很多中藥，如三七、丹參、枳黃芳、決明子、鹿茸等對酒精性肝損傷具保護(hù)作用，其機制均與其抗氧化作用有關(guān)。但微量元素鋅對酒精性肝損傷保護(hù)作用研究很少。鋅是人體內(nèi)的含量僅次于鐵的15種微量元素之一，具有抗氧化作用，能抑制脂質(zhì)過氧化或硫醇氧化，維持生物膜的正常生理功能。本研究利用鋅的抗氧化作用來觀察其對急性酒精性肝損害的營養(yǎng)保護(hù)作用。MDA是氧自由基與生物膜多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，與氧自由基的量一致，GSH-Px是細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化作用保護(hù)系統(tǒng)的主要成分，不僅是肝細(xì)胞損傷的標(biāo)志，也反映體內(nèi)對脂質(zhì)過氧化拮抗能力的高低，所以，本研究以MDA和 GDH-Px作為反映機體脂質(zhì)過氧化水平。ALT、AST是肝細(xì)胞受損后主要釋放的酶，其測定結(jié)果直接可反映肝細(xì)胞損傷程度，故本項研究將其列為觀察指標(biāo)。常用的鋅源包括無機鋅、有機合成鋅和有機鋅，它們的生物學(xué)效價存在很大差異。本項研究中所使用的是葡萄糖酸鋅，是有機合成鋅。

本研究結(jié)果顯示：①白酒可造成急性酒精中毒小鼠肝臟功能及脂質(zhì)過氧化損害。②鋅對酒精性肝損害小鼠具保護(hù)作用，并且與鋅劑量相關(guān)，在允許范圍內(nèi)，鋅劑量越大，保護(hù)作用越強。在本研究中，各劑量組葡萄糖酸鋅均可使谷胱甘肽過氧化物酶升高，但與白酒對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與理論不相符[4,7]，分析可能有以下原因：①實驗動物的樣本數(shù)較少，結(jié)果離散度較大。②可能與鋅源類型有關(guān)，不同鋅源吸收、利用度不同。③與乙醇處理的劑量和時間、動物品系及小鼠灌白酒后處死時間有關(guān)。為此，在今后的科研工作中筆者建議盡量增加樣本量，選擇吸收、利用度更好的鋅源，如氨基酸螯合鋅，同時增加測定肝組織中酶的種類，如一氧化氮、超氧化物歧化酶、乙醇脫氫酶，試圖找到更能反映鋅對酒精性肝損害起保護(hù)作用的酶類，為鋅對酒精性肝損害起保護(hù)作用提供理論依據(jù)。

[1]Ronaid GT,Blar UB,Iimuro Y,et al.Role of kuffer cell,endotoxin,and free radicals in hepatoxicity due to prolonged alcohol consumption:studies in female and male rats[J].J Nutr,1997,127(suppl):903-906.

[2]段薈,付成效,縐瑾.黃芪對酒精性肝損傷小鼠MDAGSH和TG的影響及肝臟保護(hù)作用的研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2010,39(3):271-272.

[3]McClain CJ,Barve S,Barve S,et al.Tumor necnosis factor and alcoholic liver disease[J].Alcohol Clin Exp Res,1998,22(5 suppl):248-252.

[4]杜時雨,房龍.脂質(zhì)過氧化反應(yīng)大鼠急性酒精性肝損害中的作用[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2008,17(7):600-602.

[5]Arteel GE.Oxidants and antioxidants in alcohol-induced liver disease[J].Gastroenterology,2003,124(1):778-790.

[6]Hoek JB,Pastorino JG.Ethanol oxidative stress and cylokine-induced liver cell injury[J].Alcohol,2002,27(2):63-68.

[7]Enty B,Berson A,Pessayre D.Microvesicular steatosis and steatohepatitis role of mitochondrial dysfunction and lipid peroxidation[J].J Hepatol,1997,26(suppl 1):13-22.