參姜鎖陽益氣片的小鼠急性毒性實驗研究

賈丹兵，劉 珊，李乃民，唐立明，李春杰，鞏沅鑫

解放軍第二一一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150080

參姜鎖陽益氣片是防治高寒缺氧的優(yōu)效藥品，其處方來源于我院主任醫(yī)師師承經(jīng)驗方，具有深厚的臨床基礎(chǔ)。參姜鎖陽益氣片主要由西洋參、干姜、桂枝、寸冬、鎖陽、紅花、阿膠等成分組成，具有溫陽祛寒，納氣平喘，益肺補腎，通經(jīng)活絡(luò)，調(diào)元散瘀之功效，可抗御寒冷環(huán)境中機體心、肺、腎、腦等重要器官缺氧、功能減退等，防止高寒缺氧性疲勞的發(fā)生。為了提高臨床用藥的安全性，本實驗參照文獻[1-4]，通過對小鼠灌胃給藥，觀察參姜鎖陽益氣片的急性毒性反應(yīng)，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

采用ICR小鼠（SPF級）40只，雌雄各半，體重18.8～21.9 g，平均年齡6周，動物由上海西普爾-必凱試驗動物有限公司提供，實驗動物質(zhì)量合格證號2008001601736，生產(chǎn)許可證號 SCXK（滬）2008-0016，使用許可證號 SYXK（滬）2007-0003。 室內(nèi)溫度：23.2～24.0℃；濕度：43.2%～55.2%。

1.2 實驗藥物

參姜鎖陽益氣片，由解放軍第二一一醫(yī)院研制并提供，成人每日用量為2 g。藥物溶于蒸餾水中，該藥最大濃度為0.4 g/ml，保存溫度為 4℃。

1.3 給藥途徑

采用口服灌胃給藥，與推薦的臨床用藥途徑一致。

1.4 實驗方法

1.4.1 預(yù)試驗 取體重18～22 g小鼠10只，雌雄各半，禁飼供水12 h，給予小鼠可承受的體積0.8 ml/20 g體重，藥物最大濃度0.4 g/ml，一次性給予小鼠灌胃，給藥后常規(guī)飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7 d，此期間發(fā)現(xiàn)小鼠生命狀況良好，無死亡現(xiàn)象。因無法測出該藥的LD50，故進行最大耐受量（MTD）的測定[4]。

1.4.2 最大耐受量（MTD）取清潔級ICR小鼠40只，雌雄各半，常規(guī)飼養(yǎng)3 d。按體重隨機分成2組：給藥組和溶媒對照組，每組20只，雌雄各半。實驗前小鼠禁飼供水12～14 h，兩次給藥期間禁飼供水。給藥組給藥當(dāng)日上、下午各給藥1次，參姜鎖陽益氣片的最大給藥濃度為0.4 g/ml，最大給藥容積為50.0 ml/kg，單次給藥劑量為20.0 g/kg，總給藥量為40.0 g/kg；溶媒對照組給予同規(guī)格容積的去離子水。連續(xù)觀察14 d，記錄動物給藥后的毒性反應(yīng)及死亡情況。毒性反應(yīng)重點觀察癥狀、損傷程度、毒性反應(yīng)起始時間、持續(xù)時間及恢復(fù)時間等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計較件進行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用 t檢驗，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組動物給藥觀察14 d后，均未見明顯異常。動物第1、7及14天體重均有所增加，且兩組增長幅度相近。見表1。14 d后小鼠處死，經(jīng)剖檢肉眼觀察未見異常。

表1 參姜鎖陽益氣片急性毒性實驗動物體重的變化（±s,g）

表1 參姜鎖陽益氣片急性毒性實驗動物體重的變化（±s,g）

組別 性別 體重服藥前 給藥后1 d給藥后7 d給藥后14 d給藥組溶媒對照組♀♂♀♂19.73±0.5420.43±0.6619.75±0.5520.50±0.6420.74±1.0921.97±0.8721.62±0.8923.48±0.8424.23±0.8627.14±0.8925.15±1.9727.51±0.8327.95±1.3528.28±1.1128.38±2.0131.75±0.97

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為：肺為氣之主，腎為氣之根，寒為殺厲之氣，在天為寒，在人臟為腎；寒則血泣，有所犯大寒，內(nèi)致骨髓；寒勝者，當(dāng)從溫治。因此，本研究依據(jù)中醫(yī)理論治療高寒缺氧之疾，應(yīng)首以溫?zé)崴幊ズ?，再以補陽消陰、暖丹田、固真氣、活血增元之藥，合而治寒邪入臟，達增五臟之真氣、蓄陽以御外寒、強身而固本之功效[5]。

本實驗表明：①小鼠用參姜鎖陽益氣片灌胃后能正常飲食，精神狀態(tài)良好，活動積極靈活，體重增加正常，沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。第14 d小鼠處死后經(jīng)剖檢肉眼觀察未見異常。②一般認(rèn)為，按體重計算，小鼠1日內(nèi)最大給藥量相當(dāng)于成人臨床日用量的100倍以上是較為安全的。以最大濃度、最大體積給予ICR小鼠灌胃，均未出現(xiàn)動物死亡，測不出LD50。故做最大耐受量測試，1 d小鼠最大給藥量為40 g/kg，相當(dāng)于60 kg成人日用量的1200倍 （安全倍數(shù)=小鼠最大耐受量×成人平均體重/成人每日用量=40 g/kg×60 kg/2g=1200倍）。可見參姜鎖陽益氣片的急性毒性小，可作為一種安全的藥物制劑應(yīng)用于臨床。

[1]袁伯俊,王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐[M].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,1997:23-42.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性研究指導(dǎo)原則[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:9.

[3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:107-110.

[4]毛和平,劉光斌,劉效栓,等.和胃散急性毒性實驗研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2009,6(6):22,34.

[5]衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:203.