顛茄片中非法添加阿托品的快速檢查方法

黃 偉，張文婷，趙維良

1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州 310053；2.浙江省食品藥品檢驗所，浙江杭州 310004

顛茄片是傳統(tǒng)抗膽堿制劑，主要含天仙子胺（hyoscyamine）、東莨菪堿（scopolamine）等莨菪類生物堿成分，可用于平滑肌痙攣引起的疼痛、胃潰瘍等病癥[1]。天仙子胺又稱莨菪堿，左旋，其散瞳作用比d-天仙子胺大100倍[2]，且顛茄片藥效為其中多種莨菪烷類生物堿協(xié)同作用的結(jié)果。《中國藥典》2010年版顛茄片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中TLC鑒別的指標(biāo)成分為阿托品（atropine）。雖然阿托品與天仙子胺在TLC中的比移值與在HPLC中的保留時間均相同，但阿托品為天仙子胺的外消旋體，一般為化學(xué)合成品，或是在富含莨菪堿植物中提取、消旋所得，因此顛茄片以阿托品作為TLC鑒別的指標(biāo)成分不甚合理。目前國內(nèi)對顛茄片的最新研究報道僅限于用RP-HPLC對硫酸阿托品等成分進行定量測定[3-5]，未曾報道顛茄片中非法添加阿托品的檢查方法，國外文獻有報道稱，可用以手性為基礎(chǔ)的高效液相色譜法[6]、核磁共振等[7]加以鑒別，但檢測成本高，再加上阿托品成本低廉，使得在顛茄片中非法添加阿托品的現(xiàn)象較為嚴(yán)重。因此，建立能快速區(qū)分阿托品與天仙子胺的經(jīng)濟的分析方法就顯得十分重要。基于此，本文建立了特異性的阿托品與天仙子胺的鑒別方法，從而為評價顛茄片質(zhì)量控制提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器與試藥

硅膠G薄層板（青島海洋化工廠生產(chǎn)），雙槽展開缸，薄層色譜儀（瑞士卡瑪公司ATS4型全自動點樣儀），水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對照品硫酸阿托品（批號：100040-200510）購自中國藥品生物制品檢定所，硫酸天仙子胺（USP對照品，批號：1335009），顛茄片為煙臺魯銀藥業(yè)有限公司、西安利君制藥有限公司、天津力生制藥股份有限公司等十家企業(yè)提供的20余批樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液的制備

取顛茄片20片，研細，加濃氨試液1 ml和乙醚30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇0.5 ml使之溶解，作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液的配制

取硫酸天仙子胺對照品、硫酸阿托品對照品，分別加甲醇制成每1 ml各含3 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 色譜條件

硅膠 G 薄層板；展開劑：濃氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）；顯色劑：稀碘化鉍鉀試液；亞硝酸鈉試液。

2.4 測定方法

吸取上述兩種溶液各20 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以濃氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）為展開劑展開，展距 8 cm，取出，晾干，置100～105℃干燥5 min，放冷。第1次顯色：噴以稀碘化鉍鉀試液至斑點清晰；第2次顯色：在薄層板上噴以亞硝酸鈉試液，放置15 min顯色。

2.5 樣品測定結(jié)果及判定

采用上述薄層檢查方法，以硫酸阿托品為陽性對照，第一次顯色后，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。第2次顯色后，供試品色譜中，在與天仙子胺對照品色譜相應(yīng)位置上斑點顏色由橙色或棕色變?yōu)榧t棕色，不得出現(xiàn)灰藍色。如出現(xiàn)灰藍色，提示該樣品可能添加了阿托品，見圖2。結(jié)果在對10家企業(yè)28批顛茄片的檢查中，共出現(xiàn)11份陽性樣品，判定其為非法添加阿托品。

圖1 稀碘化鉍鉀顯色（第一次顯色）

圖2 顛茄片的薄層色譜圖

3 討論

3.1 展開劑的選擇

分別考察了不同的展開系統(tǒng)：乙酸乙酯-甲醇-濃氨、濃氨溶液-水-丙酮、乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水，并在此基礎(chǔ)上進行了優(yōu)化，結(jié)果表明以濃氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）作為展開劑得到的色譜分離度及斑點相對位置重現(xiàn)性好。

3.2 薄層板的選擇

比較了國產(chǎn)普通硅膠G板（青島海洋化工廠）、國產(chǎn)高效硅膠G板（煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所）、進口普通硅膠G板、進口高效硅膠G板（德國默克公司），結(jié)果均可以對顛茄流浸膏中非法添加阿托品進行定性鑒別。在保證重復(fù)性的前提下，以選擇價格易于接受為原則，推薦使用國產(chǎn)普通硅膠G板。

3.3 加樣回收實驗

取一批按上述方法試驗后呈陰性反應(yīng)的顛茄片，加入阿托品對照品，再按上述實驗方案，結(jié)果斑點的位置和顏色與阿托品對照品所顯斑點一致。

3.4 檢出限的測定

取上述阿托品和天仙子胺對照品溶液，分別混合制備成含阿托品10%、20%、30%……90%、100%的溶液，照上述方法取20 μl點于硅膠G薄層板上，展開后，按上述條件顯色。結(jié)果顯示含10%阿托品溶液可觀察到灰藍色。說明在顛茄片生產(chǎn)過程中添加10%阿托品即可被檢出。

4 小結(jié)

本文研究內(nèi)容為2010年版《中國藥典》顛茄系列標(biāo)準(zhǔn)提高課題，是國內(nèi)首次運用薄層色譜法鑒別添加阿托品的顛茄片，結(jié)果顯示28批樣品中11批樣品添加阿托品。對薄層色譜結(jié)果，采用指紋圖譜法進一步作了驗證，檢測結(jié)果完全吻合，檢出符合率100%，未出現(xiàn)誤判情況。可見本方法解決了此前難以快速檢查顛茄片中非法添加阿托品的實際問題，且操作簡便，對于顛茄片的質(zhì)量控制，具有很高的實用價值。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:396.

[2]匡學(xué)海.中藥化學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:322.

[3]吳少平,柳小秦,羅晶,等.顛茄浸膏片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].藥物分析雜志,2008,28(8):1319-1322.

[4]張楠,郭新紅,張振中.RP-HPLC測定顛茄片中3種主要成分含量[J].醫(yī)藥論壇雜志,2005,26(19):19-22.

[5]韓忠剛,馮華,羅秀瓊.HPLC色譜法測定顛茄浸膏片中硫酸阿托品的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報,2008,14(9):78-83.

[6]Soares R,Singh AK,Kedor-Hackmann ER,et al.Determination of atropine enantiomers in ophthalmic solutions by liquid chromatography using a Chiral AGP column[J].J AOAC Int,2009,92(6):1663-1672.

[7]Don Antoine Lanfranchi,Félix Tomi,Joseph Casanova.Enantiomeric differentiation of Atropine/Hyoscyamine by13C-NMR Spectroscopy and its application to Datura stramonium Extract[J].Phytochem Anal,2010,21(6):597-601.