2型糖尿病并不穩定型心絞痛患者hs-CRP、Lp(a)和ADPN懸浮芯片集成檢測及意義

映峰*

(1南方醫科大學珠江醫院，廣州 510282;2清遠市人民醫院)

冠心病(CHD)和2型糖尿病(T2DM)關系密切，T2DM患者出現冠脈粥樣硬化的時間早、程度重、預后差［1］。因 T2DM 的自主神經病變可使不穩定型心絞痛(UAP)的早期臨床表現不典型，故及時診斷T2DM并UAP有助于盡快干預冠脈粥樣硬化進展，減少患者心血管疾病的致殘率和病死率。在T2DM和冠脈粥樣硬化脂質斑塊形成過程中，既有脂質斑塊代謝紊亂，也有炎癥因子參與，表明炎癥反應可能是連接T2DM和冠脈粥樣硬化發展的一個紐帶［2］;因單項檢測炎癥因子診斷CHD的價值有限，故多項指標的懸浮芯片集成檢測有望提高其早期診斷。為探討高敏 C-反應蛋白(hs-CRP)、脂蛋白 a［Lp(a)］、脂聯素(ADPN)懸浮芯片集成檢測診斷T2DM并UAP的臨床價值，我們進行了相關研究。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2007年4月～2008年4月在珠江醫院住院的UAP患者102例，男70例、女32例，年齡(61.6±10.8)歲。患者近1個月出現心絞痛表現，或原有穩定型心絞痛表現而近期發生變化;冠脈造影顯示左主干、左前降支、左回旋支和右冠脈中至少有一支病變血管狹窄直徑≥75%。排除急性心肌梗死、吸煙、高脂血癥、高血壓病史、肝腎功能不全、急性感染、惡性腫瘤、肺栓塞、下肢動靜脈栓塞、全身免疫性疾病及凝血功能障礙者。根據患者有無T2DM病史分為兩組，觀察組52例有T2DM病史，對照組50例無T2DM病史;兩組性別、年齡有可比性，其冠脈病變血管檢測參數見表1。

表1 兩組冠脈病變血管檢測參數比較(±s)

表1 兩組冠脈病變血管檢測參數比較(±s)

檢測參數 觀察組(n=52)對照組(n=50)P冠脈病變狹窄程度(%)90.5 ±8.20 86.3 ±10.10 ＜0.05冠脈病變長度(mm) 26.8 ±6.20 10.6 ± 5.60 ＜0.05彌漫病變(例) 36 18 ＜0.05多支冠脈病變(例)30 10 ＜0.05

1.2 檢測方法 抽取兩組入院次晨靜脈血5 ml，3 500 r/min離心10 min后分離血清，－80℃冰箱凍存。將分別包被hs-CRP、Lp(a)、ADPN抗體的偶聯微珠按50 μl/孔加入96孔板中，真空抽干;加入100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，真空抽干;分別加入用 1×Washing Buffer 1∶2 000稀釋的樣品100 μl/孔、標準品Ⅰ～Ⅵ，貼上封板膜。將反應板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、600 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入100 μl/孔的1 ×Washing Buffer，洗滌3 次;加入100 μl/孔的生物素標記抗體，將反應板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、600 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入 100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，洗滌3次;加入用1×Assay buffer 1∶12.5稀釋的鏈親和素—藻紅蛋白50 μl/孔，將反應板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、400 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入100 μl/孔的1×Washing Buffer，洗滌 3 次;加入 125 μl/孔的 1 × Assay buffer重懸微珠，將反應板放在平板搖床上，1 100 r/min振蕩1 min。最后，將反應板置于Lumi-nex100多功能流式點陣分析儀上讀數。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，計量數據以±s表示，兩組比較用t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組檢測指標比較見表2。

表2 兩組檢測指標比較(mg/L，±s)

表2 兩組檢測指標比較(mg/L，±s)

注:與對照組比較，*P ＜0.01

組別 n hs-CRP Lp(a)ADPN觀察組 52 11.6 ±5.3* 406 ±156* 5.5 ±3.2*對照組50 8.3 ±3.4 337 ±130 7.2 ±2.6

3 討論

T2DM并CHD患者發生UAP時，其冠脈造影多見血管病變較嚴重且彌漫，患者預后較差;如能及時對T2DM并UAP患者做出診斷并早期進行干預，T2DM并CHD的心血管事件將得到有效抑制。傳統診斷T2DM并CHD的方法特異性不高，而冠脈造影是有創檢查。因此，尋找簡便快捷診斷T2DM并CHD的方法極為必要。

研究表明，DM患者的CHD患病率高于非DM人群，各種慢性并發癥(特別是心血管事件)已成為T2DM患者的主要死亡原因;因炎癥反應在T2DM冠脈粥樣硬化發生、發展過程中起重要作用，故大量研究發現hs-CRP、Lp(a)、ADPN是CHD的獨立危險因素［3，4］，且其對心血管事件發生具有良好的預測價值。目前，hs-CRP及Lp(a)作為CHD的獨立危險因素、ADPN作為CHD的強保護因子，在臨床廣泛應用;但因檢測方法僅能觀察單個炎癥因子，其敏感性和特異性均受影響。此外，CHD致病因素復雜，迄今尚無一種炎癥因子可單獨預測CHD事件發生。

懸浮芯片集成檢測技術是將流式細胞技術和酶聯免疫吸附檢測技術有機地整合在一起，實現多因子集成檢測，具有應用范圍廣、快速高效等優點。既往研究證實［5］，采用懸浮芯片集成檢測診斷CHD的敏感性及準確性均明顯高于酶聯免疫吸附檢測，可提高CHD的早期預測。本研究顯示，與對照組比較，觀察組的冠脈病變狹窄程度嚴重，冠脈病變長，彌漫病變及多支冠脈病變多;血清hs-CRP、Lp(a)明顯升高，ADPN明顯降低，與文獻報道的糖調節受損導致冠脈粥樣硬化的危險因素作用增強、炎癥反應參與冠脈粥樣硬化形成及其并發癥的過程一致［6］。提示懸浮芯片集成檢測技術將hs-CRP、Lp(a)、ADPN的檢測方法統一在一個平臺上，能在較短時間內準確地獲得多指標的信息。

總之，本研究表明懸浮芯片集成檢測技術監測炎癥因子變化，可及早診斷T2DM并UAP患者，進行有效干預，以減少其心血管事件發生。

［1］Burke AP，Kolodgie FD，Zieske A，et al.Morphologic findings of coronary atherosclerotic plaques in diabetics:a postmortem study［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(7):1266-1271.

［2］Sobel BE.Optimizing cardiovascular outcomes in diabetes mellitus［J］.Am J Med，2007，120(suppl 2):3-11.

［3］Abou DCH，Oghlakian GO，Antonios SI，et al.The role of high sensitivity c-reactive protein in coronary artery disease risk prediction:a review［J］.J Med Liban，2004，52(1):39-47.

［4］Kato H，Kashiwagi H，Shiraga M，et al.Adiponectin acts as an endogenous antithrombotic factor［J］.Arterioscl Thromb Vasc Biol，2006，26(1):224-230.

［5］李健洪，劉映峰，繆緋，等.超敏C反應蛋白、脂蛋白(a)和脂聯素集成檢測診斷冠心病的價值［J］.心臟雜志，2008，20(2):210-212.

［6］Chazova TE，Masenko VP，Zykov KA，et al.The role of inflammation factors in development of acute coronary syndrome in patients with type 2 diabetes mellitus and impaired glucose tolerance［J］.Ter Arkh，2007，79(6):60-64.