內臟脂肪堆積與內臟脂肪酶活性及胰島素抵抗的關系

(河北省人民醫院，石家莊 050051)

脂肪分解代謝是脂肪細胞內中性脂質水解釋放甘油和游離脂肪酸(FFA)的過程，此過程受激素敏感性脂肪酶(HSL)和脂肪組織甘油三酯脂酶(ATGL)調控［1］。研究顯示，內臟脂肪與脂肪代謝紊亂、糖尿病及心血管疾病有關［2～4］，胰島素抵抗(IR)與脂肪分解代謝異常有關［3，4］。為探討膽囊三角脂肪堆積與其脂肪組織中脂肪酶活性、IR的關系，我們對55例肝膽疾病患者進行了脂肪組織中的ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達檢測。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年9月～2008年3月在我院肝膽微創外科擇期行腹腔鏡膽囊切除術患者55例，男35 例、女20 例，年齡(40.78 ±11.56)歲;其中膽囊結石39例，非膽囊結石16例。排除急性炎癥、腫瘤、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及其他影響機體代謝的內分泌疾病(如甲狀腺功能亢進、Cushing綜合征、多囊卵巢綜合征等)。根據術中所見膽囊三角區脂肪堆積程度，分為正常組(薄層脂肪均勻堆積)27例、脂肪堆積組(脂肪堆積)28例，兩組性別、年齡有可比性。兩組均于術中取約2.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的膽囊三角脂肪一塊，置入液氮中－70℃保存，用于RNA和蛋白提取。

1.2 方法

1.2.1 臨床參數測定 測量兩組血壓、腰圍及臀圍，根據腰圍、臀圍計算腰臀比(WHR)。

1.2.2 實驗室檢測 抽取患者入院次晨空腹肘靜脈血5 ml，離心后分離血清。采用美國產全自動生化儀檢測空腹血糖，放射免疫法檢測空腹胰島素(FINS)，銅顯色法檢測游離脂肪酸(FFA);計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR)。

1.2.3 ATGL mRNA、HSL mRNA 及其蛋白表達檢測 ① ATGL、HSL蛋白表達:采用Western Blotting法檢測ATGL、HSL蛋白表達，結果用樣品的光密度值與β-actin的光密度比值表示。②ATGL mRNA、HSL mRNA表達:采用RT-PCR法檢測ATGL mRNA、HSL mRNA表達。用RNAiso plus進行組織總RNA提取，1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定所提RNA的完整性，紫外分光光度計比色測定OD260/OD280鑒定RNA的純度，并進行定量。引物設計用DNAMAN軟件設計，由上海生物工程公司合成。人ATGL引物序列上游引物:5'-GTGTCAGACGGCGAGAA TGT-3'，下游引物:5'-GTTGAACTGGATGCTGGTGTTG-3';人HSL引物序列上游引物:5'-ACCTCTTTGACCTGGACCCA-3'，下游引物:5'-CCTGTCTCGTTGCGTTTGTAG-3';人β-actin引物序列上游引物:5'-TGGCACCACACCTTCTACAA-3'，下游引物:5'-AATGTCACGCACGATTTCCC-3'。用UVP凝膠圖像成像分析系統讀取目的基因與內參基因條帶密度，并以兩者比值作為目的基因表達的相對量。

1.2.4 統計學方法 采用 SPSS17.0統計軟件，計量資料用±s表示，先行正態性檢驗及方差齊性檢驗，兩樣本均數比較用t檢驗或χ2檢驗;各指標間用直線相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床參數比較 脂肪堆積組WHR為0.90 ±0.24，正常組為 0.70 ±0.15，兩組比較有統計學差異(P＜0.05);兩組血壓比較無統計學差異(P ＞0.05)。

2.2 兩組實驗室指標比較 正常組 FINS、FFA、HOMA-IR 分別為(11.15 ±4.67)mIU/L、(0.66 ±0.23)mmol/L、1.44 ± 0.49，脂肪堆積組分別為(25.87 ±14.21)mIU/L、(1.35 ±0.45)mmol/L、2.5±0.5。兩者比較均有統計學差異(P均＜0.05)。

2.3 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達比較 見表1。

2.4 相關分析 ATGL、HSL蛋白表達均與 FINS、FFA呈明顯負相關(r分別為 －0.235、－0.214、－0.185、－0.246，P 均 ＜0.05)。直線相關分析顯示，ATGL與HSL蛋白表達呈高度正相關(r=0.708，P ＜0.01)。

表1 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達比較( ±s)

表1 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達比較( ±s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 n mRNA ATGL HSL蛋白ATGL HSL正常組27 2.32 ±0.25 2.43 ±0.41 0.98 ±0.15 1.56 ±0.30脂肪堆積組 28 1.12 ±0.21＊＊1.45 ±0.25* 0.60 ±0.12* 1.03 ±0.19*

3 討論

HSL和ATGL是脂肪分解代謝的關鍵酶，占脂肪組織中甘油三酯水解活性酶的95%。本研究顯示，與正常組比較，脂肪堆積組的內臟脂肪組織(膽囊三角)ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達均降低，且其ATGL和HSL蛋白表達呈高度正相關，與文獻報道一致［1］;說明膽囊三角脂肪組織中的ATGL、HSL活性決定脂肪堆積程度。本研究還發現，脂肪堆積組的血清FFA高于正常組，且與脂肪組織中的ATGL和HSL蛋白表達呈負相關;說明脂肪組織中的ATGL mRNA、HSL mRNA轉錄和蛋白表達不僅影響內臟脂肪代謝，還與FFA水平有關。本研究結果與有關報道一致［5］。

IR 是多種內科疾病發病的基礎，據報道［2，3］，脂肪代謝紊亂與IR形成機制有關。本研究脂肪堆積組HOMA-IR、FFA明顯高于正常組，與多數報道一致［2，3，5］。說明內臟脂肪組織在 IR 形成機制中可能起一定作用。另外，本研究脂肪堆積組WHR明顯高于正常組，且WHR與其HSL蛋白表達呈負相關;WHR可否作為臨床評估內臟脂肪組織中HSL活性和膽囊三角脂肪堆積程度的指標，尚待進一步研究。

［1］徐沖，徐國恒.脂肪組織甘油三酯水解酶參與脂肪分解調控［J］.生理科學進展，2008，39(1):10-14.

［2］Wu CK，Yang CY，Lin JW，et al.The relationship among central obesity，systemic inflammation，and left ventricular diastolic dysfunction as determined by structural equation modeling［J］.Obesity Silver Spring，2011，20(3):36-42.

［3］Veilleux A，Caron-Jobin M.Vsisceral adipocyte hypertrophy is associated with dyslipidemia independent of body composition and fat distribution in women［J］.Diabetes，2011，60(4):1055-1062.

［4］陳述林，王淑艷，唐與曉.糖尿病和肥胖癥患者網膜脂肪組織中的內脂素表達及其影響因素［J］.山東醫藥，2010，50(39):25-27.

［5］Ryden M，Jocken J，van Harmelen V，et al.Comparative studies of the role of hormone-sensitive lipase and adipose triglyceride lipase in human fat cell lipolysis［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2007，292(6):1847-1855.