Ezrin蛋白和CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)及其意義

趙樹(shù)鵬 齊鳳杰 (遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院普通外科，遼寧 錦州 121001)

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素參與的多步驟發(fā)展過(guò)程。研究表明，Ezrin和CD44－V6蛋白在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用。但有些研究結(jié)果尚未達(dá)成共識(shí)。Moilanen等〔1〕報(bào)道Ezrin蛋白在卵巢漿液性囊腺癌中表達(dá)越低，其預(yù)后越差，而Akisawa等〔2〕報(bào)道在胰腺癌中Ezrin蛋白高表達(dá)則預(yù)示患者預(yù)后不良。Hiscox等〔3〕在體外結(jié)腸癌細(xì)胞株研究顯示Ezrin蛋白的缺失與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力和侵襲性增加有關(guān)。上述研究結(jié)果均說(shuō)明Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在著更復(fù)雜的作用機(jī)制，可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié)。本研究通過(guò)檢測(cè)Ezrin和CD44－V6蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討其在結(jié)腸癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2006年1月至2009年1月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院行結(jié)腸癌手術(shù)切除病例共100例，其中包括癌旁腸組織20例;結(jié)腸腺癌80例，高分化17例，中－低分化63例;未侵及全層15例，侵及全層65例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。所有病例術(shù)前均未采取放療、化療及免疫治療。

1.2 試劑 鼠抗人Ezrin單克隆抗體，鼠抗人CD44－V6單克隆抗體，濃縮型DAB顯色液以及S－P染色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 將蠟塊標(biāo)本制成4 μm連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟、脫苯、水化后進(jìn)行HE和免疫組化染色。以已知陽(yáng)性組織為陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗為陰性對(duì)照。采用雙評(píng)分法進(jìn)行判定，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(400×)，按陽(yáng)性細(xì)胞百分率(A值)評(píng)分:＜25%為1分，25～50%為2分，＞50%為3分;按染色強(qiáng)度(B值)評(píng)分:無(wú)顯色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與染色強(qiáng)度的乘積得分作為判定標(biāo)準(zhǔn):0～4分者為陰性;5分以上為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗(yàn)、Fisher精確概率法;等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)用 Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin和CD44－V6蛋白在結(jié)腸癌及癌旁腸組織中的表達(dá) Ezrin和 CD44－V6蛋白分別定位于胞質(zhì)和胞膜。Ezrin及CD44－V6蛋白在癌旁腸組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為35．0%、25．0%，腸腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為83．75%、82．5%，兩種蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于癌旁組織差異顯著(P＜0．01)。

2.2 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸高分化腺癌組的陽(yáng)性表達(dá)顯著低于低－中分化腺癌組，在有漿膜層浸潤(rùn)組顯著高于無(wú)漿膜層浸潤(rùn)組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，各組間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。在Dukes分期中，兩種蛋白在Dukes C、D期的表達(dá)顯著高于Dukes A、B期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)與性別、年齡、腫物最大直徑無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0．05)。見(jiàn)表 1，圖 1。

2.3 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中表達(dá)的相關(guān)性分析 Ezrin及CD44－V6蛋白在80例結(jié)腸腺癌中同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)為60例，占總數(shù)的75．00%(60/80)，而兩者同時(shí)陰性表達(dá)的例數(shù)為7例，占總數(shù)的8．75%(7/80)，應(yīng)用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)腸腺癌中Ezrin及CD44－V6蛋白表達(dá)的相關(guān)性，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r's=0．421，P=0．000)。進(jìn)一步觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，在60例Ezrin及CD44－V6蛋白同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)65．0%;7例兩者同時(shí)陰性表達(dá)的患者，只有1例腸系膜淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率僅為14．29%，兩者表達(dá)上的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。

表1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

圖1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)(SP法，×200)

3 討論

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是腫瘤細(xì)胞之間的黏附力下降，因此腫瘤細(xì)胞表面黏附分子的去黏附作用在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著非常重要的作用。Ezrin屬于埃絲蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)蛋白家族，Ezrin蛋白通過(guò)調(diào)整黏附因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑，參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用，從而進(jìn)一步影響腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為〔4〕。CD44分子是一種分布廣泛的細(xì)胞表面黏附分子，是細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)相互識(shí)別和作用的分子基礎(chǔ)，并且具備一系列的生理功能。某些CD44分子的異常表達(dá)可顯著提高惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔5〕。有研究發(fā)現(xiàn)，Ezrin與CD44及其變異體形成復(fù)合物，在腫瘤細(xì)胞中共同表達(dá)〔6〕。本研究結(jié)果提示結(jié)腸腺癌的發(fā)生及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移潛能的獲得可能與Ezrin與CD44蛋白的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。Ezrin與CD44兩種蛋白在結(jié)腸腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著協(xié)同作用。CD44－V6蛋白通過(guò)與其細(xì)胞內(nèi)羧基端與Ezrin蛋白連接，影響細(xì)胞骨架的構(gòu)象，從而改變腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。本研究亦為上述的觀(guān)點(diǎn)進(jìn)一步提供了實(shí)驗(yàn)佐證。但腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演不同的重要角色〔7〕。Khanna 等〔8〕和 Yu〔9〕等通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，Ezrin 在具有高轉(zhuǎn)移特性的鼠橫紋肌肉瘤及骨肉瘤細(xì)胞株中高度表達(dá)，抑制橫紋肌肉瘤細(xì)胞及骨肉瘤細(xì)胞中Ezrin的表達(dá)能顯著抑制腫瘤的肺轉(zhuǎn)移，提示Ezrin蛋白是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，并且Ezrin蛋白的表達(dá)與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。但另有一些研究發(fā)現(xiàn)，卵巢漿液性囊腺癌中Ezrin的低表達(dá)提示預(yù)后差，因此，Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在著更復(fù)雜的作用機(jī)制。

1 Moilanen J，Lassus H，Leminen A，et al．Ezrin immunoreactivity in relation to survival in serous ovarian carcinoma patients〔J〕．Gynecol Oncol，2003;90(2):273－81．

2 Akisawa N，Nishimori I，Iwamura T，et al．High levels of ezrin expressed by human pancreatic adenocarcinoma cell lines with high metastatic potential〔J〕．Biochem Biophys Res Commun，1999;258(2):395－400．

3 Hiscox S，Jiang WG．Ezein regulates cell－cell and cell－matrix adhesion，a possible role with E－cadherin/beta－catenin〔J〕．J Cell Sci，1999;112(18):3081－90．

4 M?kitie T，Carpén O，Vaheri A，et al．Ezrin as a prognostic indicator and its relationship to tumor characteristics in uveal malignant melanoma〔J〕．Invest Ophthalmol Vis Sci，2001;42(11):2442－9．

5 Slven M，Krupinski J，Gaffney J，et al．Hyaluronan－mediated angiogenesis in vascular disease:uncovering RHAMM and CD44 receptor signaling pathways〔J〕．Matrix Biol，2007;26(1):58－68．

6 Set?l? L，Lipponen P，Tammi R，et al．Expression of CD44 and its varant isoform v3 has no prognostic value in gastric cancer〔J〕．Histopathology，2001;38(1):13－20．

7 McClatchey AI．Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development〔J〕?Nat Rev Cancer，2003;3(11):877－83．

8 Khanna C，Wan X，Bose S，et al．The membrane－cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis〔J〕．Nat Med，2004;10(2):182－6．

9 Yu Y，Khan J，Khanna C，et al．Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six－1 as key metastatic regulators〔J〕．Nat Med，2004;10(2):175－81．