雙波長系數倍率分光光度法測定痤瘡洗劑中2組分的含量

馬亮英，謝晶，林伊梅，馬莉（.新疆醫科大學第二附屬醫院藥劑科，烏魯木齊市83008；.新疆醫科大學藥學院，烏魯木齊市 830054）

痤瘡（Acne）是一種毛囊皮脂腺的慢性炎癥，主要發生于面、胸、背等處，形成黑頭、丘疹、膿包、結節等損害[1]。輕者影響容顏而煩惱[2]，嚴重者甚至會產生自殺傾向[3]，影響患者的身心健康。痤瘡洗劑是新疆醫科大學第二附屬醫院自制制劑，主要成分為甲硝唑、己烯雌酚，用于痤瘡及脂溢性皮炎的治療。為控制該制劑質量，筆者采用系數倍率分光光度法測定痤瘡洗劑中2組分含量，結果表明建立的測定方法簡便，可用于該制劑的質量控制，同時為該制劑申請新疆維吾爾自治區醫院制劑批準文號提供了質量標準的實驗室基礎資料。

1 儀器與試藥

UV-2550PC型紫外分光光度儀（日本島津公司）；BS200S電子天平（德國Sartorius公司）。

甲硝唑（原料藥及對照品，武漢武藥制藥有限公司，批號：0611254，純度：≥98%）；己烯雌酚（原料藥及對照品，廣州市漢普醫藥有限公司，批號：20100301，純度：≥98%）；痤瘡洗劑（新疆醫科大學第二附屬醫院，批號：20100602、20100618、20100630，含甲硝唑（C6H9N3O3）為4.50%～5.50%、己烯雌酚（C18H20O2）為0.045%～0.055%，g·mL－1）；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 吸收光譜的繪制

精密稱定干燥至恒重的甲硝唑500 mg、己烯雌酚50 mg，分別置于50 mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，即得濃度為10 mg·mL－1的甲硝唑醇溶液和1 mg·mL－1的己烯雌酚醇溶液。分別精密吸取甲硝唑醇溶液和己烯雌酚醇溶液各0.1 mL，分別置于100 mL容量瓶中，加水稀釋成含甲硝唑10 μg·mL－1的水溶液、己烯雌酚1 μg·mL－1的水溶液。以水為空白，在220～400 nm范圍內自動掃描，得甲硝唑和己烯雌酚的吸收光譜；另取輔料制備成溶液后掃描。光譜詳見圖1。

圖1 紫外吸收光譜Fig 1 UV absorption spectra

由圖1可見，甲硝唑在319 nm波長處有最大吸收，而己烯雌酚此處無吸收，因此可在319 nm波長處直接測定甲硝唑的含量。己烯雌酚在239 nm波長處有最大吸收，而甲硝唑在此處也有吸收，此波長處2組分吸收光譜相互干擾。根據光譜行為，選取319 nm為甲硝唑的測定波長，選取239 nm為己烯雌酚的測定波長，并將319 nm定為轉換波長。輔料對二者無干擾。

2.2 系數倍率分光光度法的計算公式

式中，A為吸光度，c為濃度，K為倍率系數，E為百分吸收系數，“甲”表示甲硝唑，“己”表示己烯雌酚，“混”表示二者混合溶液（即樣品溶液）。

2.3 穩定性試驗

取“2.1”項下甲硝唑水溶液和己烯雌酚水溶液分別于0、0.5、1、2、4、12 h考察其光譜行為和測定波長處的吸光度，結果表明，在12 h內2組分吸收光譜及測定波長的吸光度未見顯著變化，RSD為0.28%，因此可選擇水作為測定溶劑。

2.4 K值的測定

稱取甲硝唑2.501 7 g至50 mL容量瓶中，用75%乙醇定容至刻度（置于水浴中加熱使其溶解），得濃度為5.003 4×104μg·mL－1溶液作為貯備液。從貯備液分別吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50 mL至100 mL容量瓶中，加水至刻度，得不同濃度溶液，每份溶液平行3份，以水為空白，在239、319 nm波長處測定吸光度。按A239nm/A319nm計算K值，結果為0.313 5，RSD為0.83%（n＝5）。

2.5 E值的測定

2.5.1E239nm己的測定。精密稱取己烯雌酚0.025 1 g至50 mL容量瓶中，以75%乙醇定容至刻度，得濃度為5.02×102μg·mL－1溶液作為貯備液，從中分別吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，以水定容至50 mL容量瓶中；另從貯備液中精密吸取0.3 mL，以水定容至100 mL（n＝3）。以水為空白，于239 nm波長處測定吸光度，結果E239nm己為566.7，RSD＝0.66%（n＝5）。

2.5.2E319nm甲的測定。取“2.4”項下不同濃度溶液，各精密吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。以水為空白在319 nm波長處測定吸光度，結果，E319nm甲為534.7，RSD＝0.58%（n＝5）。

2.6 線性范圍考察

2.6.1 己烯雌酚的線性范圍考察。精密吸取“2.5.1”項下各溶液，以水為空白，在239 nm波長處測定吸光度，以己烯雌酚檢測濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為：A239nm己＝0.052 9c己－0.031 1（r＝0.999 8），結果表明己烯雌酚檢測濃度的線性范圍為1～20 μg·mL－1。

2.6.2 甲硝唑的線性范圍考察。取“2.4”項下貯備液，從中分別吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度。從上述瓶中各吸取5.00 mL，置于不同的25 mL容量瓶中，加水至刻度。以水為空白，在239、319 nm波長處測定吸光度，以甲硝唑檢測濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為：A239nm甲＝0.018 3c甲－0.037 2（r＝0.998 8），A319nm甲＝0.053 8c甲－0.013 0（r＝0.999 9），結果表明甲硝唑檢測濃度的線性范圍為5～75 μg·mL－1。

2.7 回收率試驗

精密稱取干燥至恒重的甲硝唑、己烯雌酚不同量，按處方比例制備，用水稀釋后以水為空白，在239、319 nm波長處分別測定吸光度，按公式：c己＝（A239nm混－10KA319nm甲）/E239nm己及式（4）計算濃度，回收率結果見表1。

由表1得出甲硝唑的平均回收率為98.8%，RSD＝0.40%；己烯雌酚的平均回收率為99.0%，RSD＝0.64%。

表1 回收率試驗結果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 精密度試驗

選取“2.6”項下甲硝唑及己烯雌酚的高、中、低濃度溶液，每個濃度做5份樣品，分別連續測定3次。結果RSD分別為0.55%、0.85%（n＝5），表明精密度符合要求。

2.9 樣品含量測定

取痤瘡洗劑3批，分別精密吸取0.1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度；取稀釋液5.00 mL，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，以水為空白，在319 nm波長處測定吸光度。另精密吸取0.1 mL，置于50 mL容量瓶，加水至刻度，以水為空白，于239 nm波長處測定吸光度。按標示量計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果Tab 2 Results of content determination of samples

3 討論

筆者在試驗中觀察到甲硝唑在75%乙醇中溶解較慢，可用水浴加熱使溶解，放冷至室溫也不再析出，并在試驗中得到證實。同時該制劑為混懸液，在制劑分裝過程中會出現裝量均勻性問題，需進一步進行處方優化，因此本文為今后處方優化的驗證提供了實驗室依據。

由于處方中甲硝唑濃度為50 mg·mL－1，己烯雌酚濃度為0.5 mg·mL－1，甲硝唑濃度是己烯雌酚濃度的100倍；2組分濃度在差距過大的情況下，若稀釋相同倍數即可造成在239 nm波長處測定的A混（A混＝A239nm甲+A319nm己）超出測定范圍而無法測定，因此需選擇合適的稀釋倍數，且稀釋后濃度在線性范圍內。經過一系列濃度篩選，最終確定為甲硝唑稀釋5 000倍，己烯雌酚稀釋500倍。在K值使用時，代入方程（3）時的K值需要乘以擴大倍數10。

系數倍率分光光度法原理簡單、計算簡便、結果準確，能不經分離直接測定本品中的2種主要組分的含量，因而具有操作方便、快速的優點，有利于控制本品的質量，易于基層單位開展日常檢測工作。

[1] 王俠生，廖康煌，楊國亮.皮膚病學[M].上海：上海科學技術文獻出版社，2005：725.

[2] 郭麗紅.雄激素對痤瘡影響及治療的研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報，2009，11（1）：70.

[3] 蘭曉玲，林新瑜，付興瓊，等.痤瘡患者心理量化分析及護理[J].中國醫療前沿，2009，4（8）：100.