慢性酒精中毒患者血清脂聯(lián)素、葉酸、維生素B12含量測(cè)定及其臨床意義

宋 巖， 崔松彪， 吳 光

脂聯(lián)素(APN)是一種由脂肪細(xì)胞特異性分泌的血漿激素蛋白，具有多種生物學(xué)功能。在調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、免疫功能、糖脂代謝、抗胰島素抵抗、抗動(dòng)脈粥樣硬化及在腦血管疾病等方面發(fā)揮著重要作用。隨著慢性酒精中毒的發(fā)病率的持續(xù)上升，維生素缺乏、營(yíng)養(yǎng)障礙與慢性酒精中毒的關(guān)系越來(lái)越受到人們的重視。了解慢性酒精中毒患者的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響也越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)界的重視。由于慢性酒精中毒的人長(zhǎng)期大量飲酒，進(jìn)食量減少，并且很大一部分人經(jīng)常空腹飲酒，這就導(dǎo)致了營(yíng)養(yǎng)不良、造成了葉酸和維生素B12的攝入不足，再加上慢性酒精中毒造成胃腸道的病變及功能紊亂，可引起葉酸和維生素B12的吸收障礙。本研究探討慢性酒精中毒患者血清脂聯(lián)素(APN)、葉酸(FA)、維生素B12水平的變化及其與甘油三酯、膽固醇、HDL-C、LDL-C、空腹血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等指標(biāo)的相關(guān)性，進(jìn)一步探討慢性酒精中毒與腦血管疾病及其高危因素的關(guān)系，為臨床預(yù)防和治療慢性酒精中毒患者、觀察其預(yù)后均有重要的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 (1)慢性酒精中毒患者均符合中國(guó)精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)CCMD-3修訂的酒精所致精神障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。(2)選擇2009年6月～12月期間在延邊醫(yī)院及延邊腦科醫(yī)院住院的酒精中毒患者及參加體檢的健康體檢者。依研究目的分為慢性酒精中毒組和對(duì)照組。其中患者組共54例，均為男性，年齡37～68歲，平均48.6±6.73歲，飲酒年限為5～42年，平均為48.42±6.39歲。對(duì)照組共43例，不飲酒或偶爾飲酒的男性，均為同期健康體檢者，年齡24～59歲，平均34.12±10.11歲。按飲酒年限分為飲酒＜10年組、飲酒10～20年組、飲酒20～30年組、飲酒＞30年組;按CT是否合并腦萎縮及腦血管疾病分為慢性酒精中毒CT異常組與慢性酒精中毒CT正常組。頭部CT診斷符合1995年全國(guó)腦血管病學(xué)會(huì)制定的腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.2 標(biāo)本采集及保存 所有患者均在確診后未治療前和對(duì)照組在體檢后清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采取靜脈血5ml，標(biāo)本采集后不抗凝，以3000r/min進(jìn)行離心10min，分離血清，一管置于-80℃低溫冰箱中保存待測(cè)脂聯(lián)素、葉酸及維生素B12。另一管作為血清脂類檢測(cè)及血糖檢測(cè)。

1.3 APN測(cè)定 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人脂聯(lián)素(APN)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂聯(lián)素(APN)，再與HRP標(biāo)記的脂聯(lián)素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂聯(lián)素(APN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人脂聯(lián)素(APN)濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 酒中毒組與對(duì)照組血清各項(xiàng)臨床指標(biāo)比較 本試驗(yàn)中慢性酒精中毒組血清APN較對(duì)照組明顯降低，比較有顯著性差異(P＜0.05);慢性酒精中毒組與對(duì)照組相比，慢性酒精中毒組的FA明顯低于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01);慢性酒精中毒組與對(duì)照組相比，慢性酒精中毒組的維生素B12高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.05);慢性酒精中毒組與對(duì)照組相比，慢性酒精中毒組的空腹血糖明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01);慢性酒精中毒組SBP、DBP較對(duì)照組均明顯增高，比較有顯著性差異(P＜0.01)。慢性酒精中毒組的 TC、TG、HDL-c、LDL-c均高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)。慢性酒精中毒組AST、ALT較對(duì)照組均明顯增高，比較有顯著性差異(P＜0.01)(見(jiàn)表1)。

表1 慢性酒精中毒組與對(duì)照組血清各項(xiàng)臨床指標(biāo)比較()

表1 慢性酒精中毒組與對(duì)照組血清各項(xiàng)臨床指標(biāo)比較()

與對(duì)照組比較* P ＜0.05，＊＊P ＜0.001

觀察指標(biāo) 慢性酒精中毒組 正常對(duì)照組 F值 P值A(chǔ)PN(mg/L)FA(ng/ml)VitB12(pg/ml)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-c(mmol/L)LDL-c(mmol/L)FBG(mmol/L)AST(U/L)ALT(U/L)SBP(mmHg)DBP(mmHg)1.54 ±0.57*3.63 ±1.97＊＊497.57 ±289.57*4.47 ±1.38*1.73 ±1.29＊＊1.62 ±0.70＊＊2.29 ±0.85*6.00 ±1.45＊＊106.03 ±40.63＊＊64.19 ±8.04＊＊136.76 ±20.56 ＊＊84.91 ±12.27*2.05 ±1.10 7.33 ±2.40 403.40 ±116.17 3.98 ±0.81 0.95 ±0.44 0.77 ±0.29 2.00 ±0.43 4.34 ±0.37 29.90 ±6.90 25.67 ±8.52 117.67 ±13.38 80.12 ±11.21 8.936 69.612 4.025 4.383 14.569 55.949 4.064 54.319 13.218 13.577 27.680 3.940 0.004 0.000 0.048 0.039 0.000 0.000 0.047 0.000 0.000 0.000 0.000 0.050

2.2 慢性酒精中毒組與對(duì)照組之間相關(guān)疾病的患病水平 慢性酒精中毒組的空腹血糖與對(duì)照組相比較明顯增高，比較具有顯著性差異(P＜0.001)，說(shuō)明慢性酒精中毒組增加了患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。慢性酒精中毒組血TC、血TG癥與對(duì)照組相比明顯增高，有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明慢性酒精中毒組患者增加血脂異常的風(fēng)險(xiǎn);慢性酒精中毒組血壓與對(duì)照組相比明顯增高，有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明慢性酒精中毒組患者增加了患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)。而高血壓、糖尿病、血脂異常又與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，并且它們均為腦卒中的高危因素。故慢性酒精中毒組患者增加了高血壓、糖尿病、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中等疾病的患病率。

2.3 慢性酒精中毒各飲酒年限組 APN、FA、VitB12比較 對(duì)54例慢性酒精中毒患者按飲酒年限分為4組及對(duì)照組，觀察飲酒年限與APN、FA、VitB12的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著飲酒年限的增加，F(xiàn)A隨之逐年降低(P＜0.05)，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但隨著飲酒年限的增加，未發(fā)現(xiàn)血清APN降低有規(guī)律性(P＜0.05)。隨著飲酒年限的增加，未發(fā)現(xiàn)血清VitB12有規(guī)律性，比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。飲酒＜10年組、飲酒 l0～20年組、飲酒20～30年組、飲酒＞30年組與對(duì)照組5組間APN、FA比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0.05，P ＜0.01)(見(jiàn)表2)。

2.4 酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組、對(duì)照組的APN、FA、VitB12比較 酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對(duì)照組3組間血清APN比較都有顯著差異(P＜0.05)，酒中毒CT異常組與對(duì)照組、酒中毒CT正常組與對(duì)照組血清APN比較都有顯著差異(P＜0.05)。酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對(duì)照組3組間維生素B12比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。酒中毒CT異常組、酒中毒CT正常組與對(duì)照組FA比較都有顯著差異(P＜0.05)，酒中毒CT異常組與對(duì)照組、酒中毒CT正常組與對(duì)照組FA比較都有顯著差異(P＜0.01)(見(jiàn)表3)。

表2 酒中毒各飲酒年限組APN、FA、VitB12含量比較()

表2 酒中毒各飲酒年限組APN、FA、VitB12含量比較()

與對(duì)照組比較*P ＜ 0.05，＊＊P ＜0.001

組別 例數(shù)APN FA VitB12 43 8 27 17 2 403.40 ±116.17 473.88 ±166.91 481.04 ±317.25 531.35 ±312.44 528.50 ±193.04 0.345對(duì)照組飲酒＜10年組飲酒10～20年組飲酒20～30年組飲酒＞30年組P值2.05 ±1.10 1.24 ±0.21*1.67 ±0.58*1.42 ±0.62*1.81 ±0.01*0.032 7.33 ±2.40 4.17 ±2.35＊＊3.65 ±2.00＊＊3.46 ±1.89＊＊2.56 ±0.95＊＊0.000

表3 酒中毒組CT異常組、CT正常組APN、FA、VitB12含量比較()

表3 酒中毒組CT異常組、CT正常組APN、FA、VitB12含量比較()

與對(duì)照組比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.001

組別 例數(shù) APN(mg/L) FA(ng/ml) VitB12(pg/ml)酒精中毒CT異常組酒精中毒CT正常組對(duì)照組P值28 26 43 1.59 ±0.56*1.48 ±0.58*2.05 ±1.10 0.013 3.09 ±1.46＊＊4.2 ±2.29＊＊7.33 ±2.40 0.000 502.89 ±311.86 491.85 ±269.57 403.395 ±116.17 0.140

3 討論

血清APN是由脂肪細(xì)胞特異性合成和分泌的一種重要的細(xì)胞因子，在血漿中含量豐富。脂聯(lián)素與其受體結(jié)合，具有調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能、調(diào)節(jié)人體能量代謝、抗炎、抗胰島素抵抗(IR)及抗動(dòng)脈粥樣硬化(AS)等多種作用［3］。大量臨床研究結(jié)果表明慢性酒精中毒患者的血清APN水平明顯降低，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。慢性酒精中毒患者低脂聯(lián)素血癥狀態(tài)下易引起2型糖尿病(T2DM)。T2DM重要機(jī)制之一是胰島素抵抗(IR)，表達(dá)也減少，長(zhǎng)期飲酒可以使胰島素與其受體結(jié)合受損，從而導(dǎo)致胰島素抵抗。研究表明，低脂聯(lián)素血癥與胰島素抵抗(IR)密切相關(guān)［4］，幾項(xiàng)大型前瞻性研究也表明脂聯(lián)素參與體內(nèi)糖代謝以及糖尿病的發(fā)生、發(fā)展，并且血漿APN的濃度與 FBG、IR 和高胰島素血癥呈顯著負(fù)相關(guān)［5，6］。長(zhǎng)期飲酒會(huì)導(dǎo)致胰島素及其受體結(jié)合能力下降，引起IR。一方面乙醇在氧化過(guò)程中使輔酶I(NAD)被還原形成還原型輔酶I(NADH)，抑制三羧酸循環(huán)，影響脂肪酸代謝，引起脂肪酸代謝產(chǎn)物增加，三酰甘油含量升高會(huì)抑制磷脂酰肌醇-3-激酶和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GluT4)的活性而減少葡萄糖的吸收，阻斷了胰島素信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。從而導(dǎo)致IR。另一方面，乙醇抑制脂肪酸氧化，使游離脂肪酸(FFA)增加，而FFA的增加是引起IR的重要機(jī)制之一。

長(zhǎng)期飲酒會(huì)導(dǎo)致糖、脂代謝紊亂，誘發(fā)炎性機(jī)制，加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎性疾病，AS中內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞構(gòu)成AS病灶的三要素。三者相互作用，促進(jìn)AS的發(fā)生發(fā)展。脂聯(lián)素具有抗動(dòng)脈硬化形成的作用，其作用機(jī)制可能與脂聯(lián)素具有拮抗慢性炎癥過(guò)程有關(guān)。脂聯(lián)素被認(rèn)為是有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的唯一的一種保護(hù)性細(xì)胞因子［7］，在動(dòng)脈粥樣硬化病變中起重要的調(diào)控作用。脂聯(lián)素APN通過(guò)多種途徑影響內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的生物活性，由此可見(jiàn)脂聯(lián)素可以阻止AS的發(fā)生、發(fā)展，脂聯(lián)素水平與動(dòng)脈粥樣硬化疾病的密切相關(guān)，脂聯(lián)素能明顯抑制與動(dòng)脈內(nèi)膜增生有關(guān)的過(guò)程，在動(dòng)脈硬化早期給予脂聯(lián)素進(jìn)行干預(yù)，延緩動(dòng)脈硬化的發(fā)生，在未來(lái)的臨床試驗(yàn)研究中有重要意義。

慢性酒精中毒時(shí)，由于酒精能夠提供熱量，使患者進(jìn)食量減少，甚至一部分人經(jīng)常空腹飲酒，這就導(dǎo)致了營(yíng)養(yǎng)不良、維生素B12、FA攝入量不足;并且長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致胃腸道的病變及功能紊亂，可引起葉酸和維生素B12的吸收障礙。此外，酒精可以阻止維生素B12與胃體壁細(xì)胞分泌的內(nèi)因子結(jié)合，阻礙了維生素B12的吸收。酒精損害使肝臟對(duì)葉酸的儲(chǔ)存轉(zhuǎn)化為四氫葉酸的能力下降［8］。葉酸和維生素B12是人體不可缺少的維生素，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生、形成中起著重要作用，而慢性酒精中毒的患者往往伴有葉酸和維生素B12的異常，從而引發(fā)多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。本文結(jié)果顯示慢性酒精中毒患者FA水平顯著低于對(duì)照組，并且隨著飲酒年限的增加，葉酸FA降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)慢性酒精中毒患者維生素B12水平明顯高于對(duì)照組，并且隨著飲酒年限的增加，無(wú)明顯規(guī)律性。目前認(rèn)為血清葉酸水平低，血漿同型半胱氨酸水平高等因素，與原發(fā)性高血壓、糖尿病、血脂異常等共同作用，可能是導(dǎo)致我國(guó)腦卒中發(fā)生率和死亡率居高不下的重要原因。通過(guò)合理補(bǔ)充葉酸和維生素B12，能有效地降低血液中Hcy水平，并對(duì)于降低腦血管疾病的發(fā)生具有重要的臨床價(jià)值。

有研究表明［9，10］，酗酒人群中有38%血清FA水平降低、18%伴紅細(xì)胞FA水平下降，長(zhǎng)期酗酒也可導(dǎo)致維生素B12吸收障礙。葉酸缺乏時(shí)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)蛋白質(zhì)合成受到抑制，致使神經(jīng)元的能量缺乏及遞質(zhì)合成障礙，可出現(xiàn)彌漫性神經(jīng)系統(tǒng)損害，包括大腦損害、小腦損害、脊髓損害和周圍神經(jīng)損害，多項(xiàng)研究表明補(bǔ)充葉酸能顯著降低腦卒中風(fēng)險(xiǎn)。葉酸缺乏可引起高Hcy血癥，目前認(rèn)為高Hcy血癥與腦卒中的發(fā)生密切相關(guān)，是心腦血管疾病發(fā)病的危險(xiǎn)指標(biāo)［11］，增加葉酸和維生素B12的攝入能降低同型半胱氨酸(Hcy)水平［12］。葉酸可改善血管內(nèi)皮功能、預(yù)防心、腦血管疾病。葉酸缺乏引起巨幼紅細(xì)胞貧血、白細(xì)胞和血小板減少，引起血液成分和血液流變學(xué)的改變。葉酸具有抗氧化應(yīng)激作用，大量證據(jù)證明氧化應(yīng)激在血管病的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。

綜上所述，在慢性酒精中毒的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，脂聯(lián)素起保護(hù)性作用，它可以促進(jìn)脂肪酸氧化，抑制脂肪酸合成，減少脂質(zhì)沉積，增加胰島素敏感性，還具有抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，減少腦卒中的發(fā)生等多種生物學(xué)作用。進(jìn)一步研究脂聯(lián)素慢性酒精中毒中的作用機(jī)制，將有助于開(kāi)發(fā)新藥物。制定新的治療方案，促進(jìn)慢性酒精中毒治療手段的發(fā)展，因此具有廣泛的臨床意義及應(yīng)用前景。盡管本研究采用了有效的前瞻性隊(duì)列研究設(shè)計(jì)，但仍有若干不足之處。在該群體中慢性酒精中毒組樣本例數(shù)相對(duì)較少(n=54)，使研究結(jié)果的可靠性降低。而且，如同所有以容易發(fā)生致命事件的高危患者為對(duì)象的研究一樣，本文也不包括已經(jīng)死亡的病例。因此，這種對(duì)患者的選擇可以解釋一些危險(xiǎn)因素在脂聯(lián)素高、低水平組間的不平衡分布，可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

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