兒童EB病毒感染的分子生物學診斷及臨床分析

王 蕾，李玉芬

(河北北方學院附屬第一醫院，河北張家口075000)

近幾年來特殊病毒及變異病毒引起兒童呼吸道感染的情況增加，且病情特殊、發病嚴重、病死率增高。EB病毒是兒童常見的感染源，其臨床表現多樣復雜，可造成全身多系統損傷，但以呼吸道感染最多見［1，2］，不易早期診斷。為提高認識，我們對呼吸道感染患兒采集咽拭子標本，應用熒光定量PCR技術(FQ-PCR)檢查EB-DNA并進行分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本院2010年6月～2011年6月門診及住院不明原因呼吸道感染的127例患兒，經EB-DNA監測陽性，確診為EB病毒感染的68例，其中男39例、女29例，年齡0～1歲12例、1～3歲23例、3～5歲18例、5～7歲10例、7～9歲3例、＞9歲2例。

1.2 臨床表現 68例EB病毒感染患兒除典型的呼吸道感染癥狀如咳嗽、咽痛、咽峽部充血、肺部可聞及干、濕羅音等外，均有發熱，其中高熱30例(44.1%)、中度熱38 例(55.8%)，淋巴結腫大 9 例(13.2%)，頭痛 18 例(20.5%)，驚厥 4 例(5.9%)，眼瞼浮腫 6 例(8.8%)，腹瀉 3 例(4.4%)，皮膚出血點8 例(12.5%)，肝腫大7 例(12.9%)，脾腫大5例(7.3%)。另有皮疹10例(14.7%)，多為猩紅熱樣皮疹及斑丘疹，分布全身各部位。所有就診患兒均進行血常規、肝功能、心肌酶譜等常規化驗及胸片正側位檢查。

1.3 FQ-PCR實驗室檢查 無菌咽拭子采集患兒咽喉分泌物、痰液標本放入試管中備用。檢測儀器為羅氏公司Light Cycle全自動熒光定量PCR儀。采用EB核酸擴增熒光定量檢測試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司)對咽拭子標本進行核酸檢測，嚴格按試劑盒說明書操作。操作步驟包括細胞分離、DNA提取和PCR擴增分析。以病毒載量＞50 copies/ml為陽性。

2 結果

2.1 實驗室及其他輔助檢查 血常規:外周白細胞＞10×109/L 21例(30.9%)、＜10×109/L 8例(12.5%)，分類中異型淋巴細胞 ＞10%10例(12.5%)、單核細胞 ＞10%9 例(13.2%)，血小板減少4例(5.9%);肝功能:丙氨酸氨基轉移酶(ALT)增高(60～210 U/L)、天門冬酸氨基轉移酶(AST)增高(90～320 U/L)5例(7.3%);心肌酶譜:肌酸激素(CR)增高4例(5.9%)、乳酸脫氨酶增高19例(27.9%)。X光胸片檢查23例，其中雙肺紋理紊亂及部分斑點狀陰影14例(20.6%)、肺門淋巴結腫大9例(13.2%)。FQ-PCR檢查本組127例標本中EB-DNA陽性68例(53.3%)。

2.2 診斷 本組68例EB病毒感染陽性患兒，結合各項實驗室檢查結果及其臨床表現，診斷上呼吸道感染19例、咽炎扁桃體炎7例、支氣管炎肺炎15例、傳染性單核細胞增多癥17例、心肌炎3例、血小板減少性紫癜4例、病毒性腦炎1例、腎炎2例，大多數患兒有并發癥。患兒從發病到確診時間1～20 d、平均7 d。這些患兒從發病到確診為EB病毒感染時為止均給予過口服或靜點抗生素治療，甚至是長時間使用抗生素，但沒有顯著療效，確診后在常規治療的基礎上加抗病毒治療(更昔洛韋)，多數患兒在2周內臨床癥狀減輕，全部病例均好轉、痊愈出院，預后良好。

3 討論

EB病毒是皰疹病毒科γ亞科中惟一能引起人類感染的淋巴濾泡病毒，是目前臨床常見病毒之一［3］。EB病毒也是兒童常見病毒性疾病的感染源，其臨床表現變化多樣、輕重不一，可引起多系統病變，以發熱、咽喉炎典型癥狀及肝脾腫大、淋巴結腫大及周圍血液中淋巴細胞增多，并出現異型淋巴細胞為臨床特征，易于診斷［4］。但對非典型EB病毒感染或以循環、泌尿、呼吸、血液及神經系統為主要癥狀的患兒易出現誤診和漏診。患兒如在原發病基礎上再感染EB病毒，可使其病情復雜并加重，致使延誤治療，出現并發癥等。因此，在診斷過程應重視病原學診斷，凡對以呼吸道感染起病，伴有多系統臨床表現的患兒應及時進行EB-DNA檢測，以指導臨床正確診斷、合理用藥。

分離EB病毒病原體做病毒培養的技術要求高、操作復雜、所需時間長、陽性率低，一般在臨床較少采用。許多醫療機構采用ELISA或免疫熒光技術檢測血清中特異性EB病毒抗體，但檢出率較低且只能定性，而且由于方法的局限性常有假陽性發生，給臨床確診帶來不便［5］。本院采集患兒呼吸道分泌物，以咽拭子提取標本用FQ-PCR技術對病毒進行檢測，結果證實該生物學診斷技術取材方便、快捷、靈敏、準確率高，在輔助確診EB病毒感染和指導臨床治療方面具有良好的應用前景。

［1］李中躍，樓金玕，陳潔.兒童EB病毒感染首發癥狀及其相關性疾病譜分析［J］.中華兒科雜志，2004，42(1):20-21.

［2］羅燕，王春如，毛瑋.兒童EB病毒感染相關疾病臨床分析［J］.中國現代醫生，2009，47(34):25-26.

［3］Epstein M，Achong B，Bart Y.Virus particles in cultured lympho2 blasma from Burkitt’s lymphoma［J］.Lancet，1964，1(2):702-703.

［4］王群，謝正德.兒童EB病毒相關疾病的診斷標準和治療原則［J］.實用兒科臨床雜志，2010，25(10):706-708.

［5］莊國華，李標.EB病毒兩種實驗室檢測方法對比分析［J］.中國醫院感染學雜志，2009，19(13):1762-1764.