銀黃注射液刺激性、過敏性和溶血性試驗(yàn)研究

鮑玉琳

銀黃注射液收載于(衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn))中藥成方制劑第十九冊197頁。是由金銀花提取物、黃芩苷組成。具有清熱、解毒、利咽之功效，臨床用于風(fēng)熱犯肺所致發(fā)熱、咳嗽、咽痛等癥。上呼吸道感染，急性扁桃體炎，咽炎等見上述癥候者，臨床療效可靠。本研究對銀黃注射液的相關(guān)毒性進(jìn)行試驗(yàn)，為臨床安全用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 銀黃注射液由四川三精升和制藥有限公生產(chǎn)，每支裝2 ml，內(nèi)含綠原酸25 mg，含黃芩甙40 mg。生理鹽水由山東臨淄制藥廠生產(chǎn)。卵蛋白由上海伯奧生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物 新西蘭家兔，體重2～2.5 kg，雌雄各半，青島康大食品有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號：SCXK(魯)20070023，普通級;一級白色豚鼠，體重300～400 g，由山東省衛(wèi)生防疫站提供，動(dòng)物合格證號為魯動(dòng)質(zhì)字20020603;Wistar大鼠，體重120～180，雌雄各半，購自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，合格證號：SCXK(魯)2005-0017。

2 試驗(yàn)方法

2.1 肌肉刺激試驗(yàn) 兔4只，雌雄各半，剪去兔兩腿外側(cè)毛，75%的乙醇消毒后，每只兔左腿股四頭肌內(nèi)注射2 mg/ml銀黃注射液1 ml，右腿股四頭肌內(nèi)注射生理鹽水1 ml注射后48 h處死動(dòng)物，解剖取出兩側(cè)股四頭肌，縱向切開，觀察注射局部刺激反應(yīng)。按照《中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》對局部進(jìn)行評分(表1)。取局部組織標(biāo)本進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.2 血管刺激試驗(yàn) 兔6只，雌雄各半，每只兔左耳靜脈滴注2 mg/ml的銀黃注射液，給藥體積15 ml/kg，給藥速度1～2 s/滴;右耳靜脈滴注生理鹽水，給藥體積和給藥速度同試驗(yàn)組。注射后48 h處死動(dòng)物，解剖取注射部位進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.3 全身主動(dòng)過敏試驗(yàn) 取健康雄性豚鼠24只，隨機(jī)分為4組，分別為銀黃注射液高劑量組、低劑量組、陽性對照組和生理鹽水對照組，每組6只。銀黃注射液高劑量組為72 mg/kg，低劑量組為24 mg/kg;陽性對照組為牛血清白蛋白，劑量為3 mg/只;陰性對照組給予等體積的生理鹽水。隔日腹腔注射相應(yīng)的藥液，共3次。末次注射后第10天快速靜脈給藥激發(fā)，激發(fā)時(shí)劑量、體積翻倍。按表2進(jìn)行過敏反應(yīng)評價(jià)。

表1 肌肉刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)

表2 過敏反應(yīng)癥狀評價(jià)表

2.4 被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn) 取健康大鼠8只，隨機(jī)分為4組，分別為受試藥物高劑量組、低劑量組、陽性對照組和陰性對照組，每組2只。銀黃注射液高劑量組為270 mg/kg;低劑量組為27 mg/kg;陽性對照組為卵白蛋白，劑量為75 mg/kg;陰性對照組給等體積的生理鹽水。各組隔日腹腔注射相應(yīng)的藥液，共注射五次。末次致敏注射后第10天采血，2000轉(zhuǎn)/min離心10 min，分離血清，-20℃保存，兩周內(nèi)備用。另取16只大鼠隨機(jī)分為4組，分組同致敏試驗(yàn)。大鼠兩側(cè)背部剪毛，面積約3×4 cm。上述各組抗血清與生理鹽水以1∶2和1∶10稀釋。各組在預(yù)先剪毛的背部皮膚左側(cè)皮內(nèi)注射1∶2的抗血清0.1 ml，右側(cè)皮內(nèi)注射1∶10的抗血清0.1 ml。24 h后各組靜脈注射與致敏劑量相同的藥液加等量的1%伊文斯蘭染料共1 ml。30 min后麻醉處死各組動(dòng)物，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于5 mm者為陽性。

2.5 溶血試驗(yàn) ①2%紅細(xì)胞混懸液的制備：取兔血10 ml，放入盛有玻璃珠的滅菌三角瓶中振搖10 min，使成脫纖血液。加90 ml生理鹽水，搖勻，分裝于離心管中，1000轉(zhuǎn)/min離心10 min，去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水如上洗數(shù)次，直至上清液不顯紅色，棄去上清液，將所得紅細(xì)胞用生理鹽水配成2%的混懸液，待用。②加液：取試管7支，編為1、2、3、4、5、6、7號，每管分別加2%紅細(xì)胞混懸液2.5 ml，然后對1～7 號管分別按序號加生理鹽水 2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、0 ml，混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中溫浴30 min后，1～6管分別加10 mg/ml的銀黃注射液藥液 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0 ml，7管加蒸餾水2.5 ml(表3)，勻后置37℃恒溫箱中。③觀察：分別于 15 min、30 min、45 min、60 min、120 min、180 min 和 240 min觀察溶液上層是否呈透明紅色的溶血現(xiàn)象，或是否有棕紅色和紅棕色絮狀沉淀(紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象)。

表3 溶血試驗(yàn)各管加樣量

3 結(jié)果

3.1 肌肉刺激試驗(yàn) 試驗(yàn)組：肉眼觀察發(fā)現(xiàn)4塊股四頭肌中，有3塊肌肉有輕度充血，其范圍小于0.5×1 cm，有1塊肌肉無明顯變化。根據(jù)刺激反應(yīng)中反應(yīng)級的分值計(jì)為分3。鏡下見肌纖維結(jié)構(gòu)基本正常，部分區(qū)域見局灶性出血和肌纖維壞死灶，伴有嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及組織細(xì)胞浸潤。陰性對照組：肉眼觀察4塊肌肉中有1塊肌肉有輕度充血，另3塊肌肉未見明顯改變，根據(jù)刺激反應(yīng)中反應(yīng)級的分值計(jì)為1分。鏡下見局灶性出血，未見炎細(xì)胞浸潤以及肌纖維的變性壞死。

3.2 血管刺激試驗(yàn) 試驗(yàn)組動(dòng)物靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，血管壁增厚，部分血管內(nèi)皮增生。

3.3 全身主動(dòng)過敏試驗(yàn) 陽性對照組6只豚鼠出現(xiàn)咳嗽、打噴嚏、排尿、痙攣后死亡;生理鹽水對照組、銀黃注射液高劑量組和低劑量組的動(dòng)物均未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)現(xiàn)象。

3.4 被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn) 陽性對照組4只均出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)，直徑均大于5 mm。高劑量組1∶2稀釋血清1只出現(xiàn)斑點(diǎn)，直徑均大于5 mm。低劑量組和陰性對照組均未出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)。

3.5 溶血試驗(yàn) 7號管全部溶血，其余各管均未發(fā)現(xiàn)有溶血現(xiàn)象，也未發(fā)現(xiàn)有紅細(xì)胞凝集作用。

4 討論

銀黃注射液臨床使用過程中有一些不良反應(yīng)，主要是過敏反應(yīng)嚴(yán)重都甚至導(dǎo)致休克［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，銀黃注射液豚鼠全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)無陽性結(jié)果，而在大鼠皮膚被動(dòng)過敏試驗(yàn)中，在高劑量出現(xiàn)25%陽性結(jié)果，由此可見皮膚被動(dòng)過敏試驗(yàn)與臨床實(shí)際應(yīng)用有更好的相關(guān)性。

［1］《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》指導(dǎo)原則編號【Z】GPT4-1．

［2］國家食品藥品監(jiān)督管理局．藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范，2003，09．

［3］銀黃注射液使用說明書．

［4］賀秀芳.銀黃注射液導(dǎo)致過敏性休克1例報(bào)告.新疆預(yù)防醫(yī)學(xué)，漢文版，2004，22(2)：62．