復方降脂膠囊對實驗性血栓形成的影響

江蘇省蘇州市立醫院(215001) 席與斌 徐 蓉 吳允孚

本文觀察復方降脂膠囊對實驗性血栓形成的影響。

1 實驗試劑和儀器

1.1 受試藥物 復方降脂膠囊浸膏粉,由南京中醫藥大學提供,每克含生藥 8.9g,為棕褐色粉末。

1.2 試劑 ADP:美國 sigma公司;曲克蘆丁:天津藥業焦作有限公司;鹽酸腎上腺素注射液:天津金耀氨基酸有限公司。

1.3 實驗動物 SD大鼠 40只,體重 200～250g。浙江省實驗動物中心提供。ICR小鼠50只,體重 18～22g,揚州大學實驗動物中心。

1.4 實驗儀器 實驗性體內血栓形成測定儀:包頭醫學院心血管研究室 型號:BT8723;普力菲爾超純水機:上海富詩特儀器設備有限公司 型號:FS7-LH-20;電子天平(體重)電子計重秤 :中國-凱豐集團型號:ACS-H 1;分析天平 :SHIMADZU CORPORATION JAPAN型號:AY120。

2 實驗方法

2.1 復方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸總動脈后混合血栓形成的影響[1-2]。2.1.1取雄性 SD大鼠 10只,體重 200～250g,按體重隨機分為 5組,每組 10只,即空白對照組(生理鹽水),陽性組 (曲克蘆丁48mg/kg),復方降脂膠囊高(40.00g/kg)、中劑量組(26.67g/kg)、低劑量組(13.33g/kg)。灌胃給藥 5天,給藥體積為 10mL/kg,于末次給藥后 30分鐘開始刺激。空白對照組給予等體積生理鹽水。

2.1.2 方法 受試藥物臨用前用蒸餾水配成所需濃度,各組均灌胃給藥(空白對照組給予等體積生理鹽水),容積為 10mL/kg。

2.1.3 模型制備 造模時,大鼠經腹腔注射 10%水合氯醛(350mg/kg,靜注)麻醉后,仰臥位固定。頸部正中線切口,分離右側頸總動脈,近心端放置BT87-3型實驗性體內血栓形成測定儀的刺激電極,遠心端放置溫度探頭,于末次給藥后 30分鐘開始刺激。刺激的電流強度為 2 mA,連續刺激 7分鐘。當刺激電極接通電流后,由于電流的熱效應引起血管損傷,激活凝血系統及血小板,管腔內逐漸形成混合血栓。由于血栓的形成,管腔內血流逐漸被阻斷,當血流被完全阻斷時,遠心端溫度驟降。此時溫度探頭能測定其溫度驟降,故儀器報警,此即為血管栓閉時間。從開始刺激到溫度驟降所需的時間作為動脈血栓形成時間 OT(s)。

2.2 復方降脂膠囊對 ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞的影響[3-4]

2.2.1 混合致栓劑的配制 取 0.2mLADP(濃度為0.731mg/mL),0.67m L(1mL∶1mg)腎上腺素 ,用生理鹽水定容至 10mL,配制成混合致栓劑。

2.2.2 小鼠肺栓塞模型的復制 取雄性 ICR小鼠 50只,體重 18～22g,按照體重隨機分為 5組,即空白對照組(生理鹽水),陽性組(曲克蘆丁 48mg/kg),復方降脂膠囊高劑量組(40.00g/kg)、中劑量組(26.67g/kg)、低劑量組(13.33g/kg)。灌胃給藥 5天,給藥體積為 10mL/kg,空白對照組給予等體積生理鹽水。末次給藥后 30分鐘,按 0.075m/10g尾靜脈注射 ADP混合致栓劑,形成小鼠肺栓塞(即呼吸急促,無法自主活動),記錄小鼠自注射 ADP混合致栓劑后至恢復自主活動的時間。

3 測量指標

3.1 血栓形成時間(OT)的測定 記錄從開始刺激至動脈遠端溫度驟降的時間,此時間段即作為動脈血栓形成時間。

3.2 小鼠自主活動時間 記錄注射 ADP混合致栓劑后至小鼠恢復自主活動時間。

4 統計學處理

所有數據均采用 SPSS16.0進行統計,以均數 ±標準差表示,方差齊性使用單因數方差分析,方差不齊性使用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

5 結 果

5.1 復方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內膜血栓形成的影響 實驗結果表明,復方降脂膠囊低、中、高劑量組和陽性組均能顯著延長電流損傷大鼠頸動脈內膜血栓形成的時間,與空白對照組比較,具有顯著性差異(P＜0.05或 P＜0.01)。結果見表 1。

表1 復方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內膜血栓形成的影響

表1 復方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內膜血栓形成的影響

與空白組對比,**P＜0.01,*P＜0.05。

動物數(n)給藥劑量(g/kg)OT(s)空白對照組 10 0 576.56±90.81陽性組 10 48mg 766.11±142.41**低劑量組 10 13.33 682.78±118.97*中劑量組 10 26.67 718.60±167.67*高劑量組 10 40.00 747.6±203.03*

5.2 復方降脂膠囊對 ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響 實驗結果表明,復方降脂高劑量組和陽性組對小鼠急性肺血栓有抑制作用,能顯著縮短 ADP混合致栓劑致肺栓塞模型小鼠的喘促持續時間,與空白對照組組比較具有顯著性差異(P＜0.05或 P＜0.01)。結果見表 2。

表2 復方降脂膠囊對ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響

表2 復方降脂膠囊對ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響

與空白組對比,**P＜0.01,*P＜0.05。

動物數(n)給藥劑量(g/kg)喘促持續時間(s)空白對照組 10 0 219.3±40.31陽性組 10 48mg 170.28±27.22**低劑量組 10 13.33 204.85±42.85中劑量組 10 26.67 190.25±24.45高劑量組 10 40.00 180.89±35.71*

6 討 論

大多數心腦血管疾病發生的前提都是動脈粥樣硬化血栓的形成,而血小板的活化在血栓形成過程中起著重要的作用[5]。血栓的形成主要取決于血管內膜受損、血流異常以及血液成分改變 3個因素。脂質增加、血脂比例改變或(和)脂質質量異常都可能引起血管內皮的損傷。脂質沉積在血管內膜,同時單核-巨噬細胞在病變部位移行堆積,大量吞噬脂質后轉變為泡沫細胞,最后形成動脈粥樣硬化(AS)斑塊。另一方面,血脂異常也可引起血管內皮細胞以及血白細胞、血小板功能的異常,增強凝血活性。故血脂異常可通過多種途徑促進血栓的形成,并進一步損傷血管內皮,進而釋放生長因子,促進血管平滑肌增殖,從而加重 AS過程。血栓按照其發生的部位可分為動脈血栓和靜脈血栓[6]。靜脈血栓主要是由于血流緩慢或者瘀滯,導致凝血因子聚集而引起血液凝固,此種血栓因富含纖維蛋白和紅細胞,故又被稱為紅血栓。本實驗通過電流損傷動脈內膜所致的血栓主要是混合血栓,紅白血栓兼有之。實驗結果顯示,復方降脂膠囊能延長內膜損傷后混合血栓引起的血管堵塞時間(OT),縮短 ADP混合致栓劑誘發急性肺栓塞后小鼠恢復自主活動的時間,表明其抗血栓的作用可能與抑制血小板聚集有關。ADP混合致栓劑使纖維蛋白原與相應位點結合,釋放血小板內儲存的鈣,進而促進內源性花生四烯酸(AA)釋放,使血小板聚集。本實驗表明,復方降脂膠囊能減弱血小板聚集,降低血漿黏度,增強纖溶系統,使血小板處于解聚狀態,而達到抑制血栓形成的作用。

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[2] 姜開余,顧振綸,阮長耿,等 .WH 505對實驗性血栓形成的影響及其作用機制[J].中成藥,2000,22(11):782

[3] 李圣青,張艱,戚好文,等 .小鼠肺栓塞模型的誘導及比較[J].第四軍醫大學學報,2004,25(15):1379

[4] 馬世平,劉保林,周素娣,等.西紅花總苷的藥理學研究(對血凝、血小板聚集及血栓形成的影響[J].中草藥,1999,30(3):196

[5] Steinhubl SR,Moliterno DJ.The role of the platelet in the pathogenes is of atherothrombosis[J].Am JCard Iovasc Drugs,2005,5(6):399

[6] 汪鐘,鄭植荃.現代血栓病學[M].北京:北京醫科大學協和醫科大學聯合出版社,1997:462