水提與醇提對(duì)竹子中愈創(chuàng)木酚含量的影響

陳秋香 ，蔣曉煌 ，李 紅

（1.長(zhǎng)沙市中醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410100；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

鮮竹瀝(Succus bambusae)又名竹油，為禾木科植物淡竹的莖用火烤灼而流出的液體，具有清熱化痰、鎮(zhèn)驚利竅作用，可用于治療中風(fēng)痰迷、肺熱痰壅等癥[1-2]。竹瀝始載于《神農(nóng)本草經(jīng)集注》，《本草衍義》曰：“竹瀝行痰，通達(dá)上下百骸毛竅諸處，如痰在巔頂可降，痰在胸膈可開，痰在四肢可散，痰在臟腑可利，痰在皮里膜外可行。又如癲癇狂亂，風(fēng)熱發(fā)痙者可定；痰厥失音，人事昏迷者可省，為痰家之圣劑也。”熊艷等[3]以竹子中主要有效成分愈創(chuàng)木酚為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用乙醇提取法制備竹瀝，并用正交法進(jìn)行工藝優(yōu)選[4]。因乙醇價(jià)格昂貴，易燃易爆，而竹子中有效成分——酚類可溶于水，因此，本文對(duì)水提與醇提進(jìn)行比較，以便找到經(jīng)濟(jì)、安全的提取溶劑。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器

LC-10ATP型高效液相色譜儀（包括LC-IOATv串聯(lián)雙柱塞，SPD-10Avp UV-VIS檢測(cè)器、C-R7A／C-R8A數(shù)據(jù)處理機(jī)，CTO-10ACvp柱溫箱，島津）；KDM型調(diào)溫電熱套（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司）；Adventurer TMAR1140電子分析天平 （感量0.1mg，奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司）；UV－2465型紫外可見分光光度儀（日本島津）；FW100型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試劑

愈創(chuàng)木酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：111510-200911）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為高純水。

1.3 藥品

淡竹：經(jīng)浙江林學(xué)院竹類研究所應(yīng)葉青研究員鑒定為禾本科剛竹屬植物phyllostachys nigra(Lodd)Muro var henonis(Mitf)Stapf ex.的新鮮桿莖，產(chǎn)于湖南省瀏陽(yáng)市。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5]

流動(dòng)相為 0.5%磷酸的水溶液-乙腈（78∶22），固定相為 VP-ODS C18柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速1.0 mL/min；柱溫20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取愈創(chuàng)木酚對(duì)照品28.6 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密吸取1.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得22.88μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 樣品的提取

2.3.1 水提 （1）選取粗細(xì)、長(zhǎng)短相近的竹子，除去枝葉，兩端去節(jié)，用刀將竹子劈成長(zhǎng)約2 cm、粗0.2 cm大小的細(xì)段。取100 g，置蒸餾瓶中，加10倍量蒸餾水浸泡40 min后，放電熱套中加熱回流提取1 h，濾過，再加10倍量蒸餾水，加熱回流提取 0.5 h，濾過，合并兩次濾液，放冷，抽濾，濾液定容至1 500 mL，得水提樣品1，備用。將第1次加水量改為7倍、第2次加水量改為5倍，同法提取、濾過、定容至1 000 mL，得竹子水提樣品2；（2）將竹子細(xì)段粉碎成粗粉，取100 g，同上加7倍、5倍水提2次、濾過、定容至1 000 mL，得竹子水提樣品3，備用。

2.3.2 醇提 同上取竹子細(xì)段100 g，置蒸餾瓶中，加10倍量70%乙醇浸泡40 min后，放電熱套中加熱回流提取1 h，濾過，再加10倍量70%乙醇，加熱回流提取0.5 h，濾過，合并2次濾液，放冷，抽濾，濾液定容至至1 500 mL，得醇提樣品1，備用；將第1次加醇量改為7倍、第2次加醇量改為5倍，同法提取、濾過、定容至1 000 mL，得醇提樣品2，備用。

2.4 供試品溶液的制備

分別精密吸取上述水提液與醇提液各1/10，置水浴上濃縮至約50 mL，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH 1～2，用乙醚萃取 3 次（20、10、10 mL），合并乙醚萃取液，自然揮干，殘?jiān)眉状忌倭慷啻稳芙猓D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度定容，搖勻，作為供試品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

精密吸取愈創(chuàng)木酚對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10 μL依次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：

Y=2 788 994.755X-7 060.8，r=0.999 7

結(jié)果表明，愈創(chuàng)木酚在0.046～0.229μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取愈創(chuàng)木酚對(duì)照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定愈創(chuàng)木酚的吸收峰面積，計(jì)算RSD為1.06%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取水提樣品溶液 10 μL， 于 0、2、4、8、16 h進(jìn)樣，測(cè)定愈創(chuàng)木酚的吸收峰面積，計(jì)算RSD為1.15%，表明樣品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

對(duì)同一批竹子粗粉的水提液，按供試品液制備方法平行制備6份，精密吸取10μL，依法測(cè)定愈創(chuàng)木酚的吸收峰面積，計(jì)算RSD為2.14%。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取竹子粗粉 6份，按“2.3.1水提（2）”中水提樣品3方法加水提取2次，抽濾，合并濾液，各取1/2，約500 mL，每份加入0.268 mg/mL的愈創(chuàng)木酚對(duì)照品1.0 mL，加水定容至1 000 mL，精密吸取100 mL置水浴上濃縮至約50 mL，按“2.4”供試品溶液制備法制備供試液。再依法同上測(cè)定愈創(chuàng)木酚的吸收峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （n=6）

2.1 0 樣品的含量測(cè)定

取對(duì)照品溶液與供試品溶液，過0.45μm微孔濾膜，分別吸取10μL注入高效液相色譜儀中測(cè)定其峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2、圖1～3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水提法略低于醇提法，但兩者比較無(wú)顯著性差異，將竹子粉碎后再水提，提取效率最高。

表2 水提與醇提愈創(chuàng)木酚含量測(cè)定結(jié)果 （n=3）

圖1 愈創(chuàng)木酚對(duì)照品HPLC圖

圖2 水提液HPLC圖

圖3 醇提液HPLC圖

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水提取與醇提取愈創(chuàng)木酚含量相差不大，可以用水提法代替醇提法，以節(jié)約成本，增加安全性；從溶媒用量來(lái)看，兩次加水10倍與第1次加水7倍、第2次加水5倍的含量也無(wú)顯著差異，為減少資源浪費(fèi)和降低成本，宜采用將竹子粉碎后加水7倍、5倍提取。

含量測(cè)定方法基本參照文獻(xiàn)方法[5-7]，稍作改進(jìn)，除去了5%碳酸氫鈉溶液洗滌這一步，使愈創(chuàng)木酚損失更少，回收率更高。

中藥竹瀝是我國(guó)傳統(tǒng)用藥，具有確切的療效，豐富的資源。近年來(lái)對(duì)竹瀝的研究多集中在化學(xué)成分[8]、制備工藝[9]、含量測(cè)定[10]及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[11]，但對(duì)其品種、有效成分、藥理作用等方面研究相對(duì)較少。熊艷等報(bào)道，醇提法制備淡竹瀝的愈創(chuàng)木酚含量(4.19μg/g)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)的干餾法(0.193μg/g)[4]，這可能是高溫干餾將愈創(chuàng)木酚破壞所致。

[1]雷載權(quán)，張廷模.中華臨床中藥學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：1 338.

[2]宋立人，洪 恂，丁緒亮，等.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：839.

[3]熊 艷，吳學(xué)文，蔣孟良.淡竹瀝四種不同制備工藝的比較研究[J].中成藥，2006，28（12）：1 825-1 826.

[4]熊 艷，吳學(xué)文，蔣孟良，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選淡竹瀝的制備工藝[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28（15）：1 253-1 255.

[5]熊 艷，吳學(xué)文，蔣孟良.HPLC測(cè)定鮮竹瀝口服液中愈創(chuàng)木酚的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2007，32(8)：747-748.

[6]李 紅，蔣孟良.HPLC法測(cè)定不同種類竹子的竹瀝中愈創(chuàng)木酚的含量[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010,30(5)：38-40.

[7]李 紅,蔣曉煌,蔣孟良,等.采收對(duì)竹子中愈創(chuàng)木酚含量影響的研究[J]. 中國(guó)藥事，2010，24（5）：441-443.

[8]許小平，李忠琴，歐敏銳，等.竹瀝成分分析及祛痰鎮(zhèn)咳作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)新醫(yī)藥，2003，2（12）：3-6.

[9]熊 艷，吳學(xué)文，蔣孟良.兩種工藝制備竹瀝中游離氨基酸比較[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（3）：631-632.

[10]李 紅，蔣孟良，劉黨生，等.紫外法測(cè)定竹瀝中總酚含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10（8）：16-17，61.

[11]周孟輝，李 紅，蔣曉煌，等.不同采收期水竹所制竹瀝的HPLC指紋圖譜研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（3）：33-36.