實時熒光定量-PCR和酶聯(lián)免疫吸附法檢測巨細胞病毒-IgM抗體的比較

范文勇

（廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳 518101）

近年來，隨著產(chǎn)前篩查在基層醫(yī)院的開展以及基層醫(yī)生對巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染致畸認識的加深，本地區(qū)現(xiàn)已基本普及對孕前婦女CMV抗體（CMV-IgM）的檢測。既往CMV-IgM的檢測多采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunoabsorption assay，ELISA）[1]，本研究擬采用實時熒光定量-PCR（real-time PCR）檢測孕前婦女外周血CMV-IgM抗體水平，同時與ELISA法進行比較，評價這兩種方法對CMV-IgM抗體檢測的敏感性及準確率。

1 對象與方法

1.1 對象

本研究收集2008年1月～2010年6月在我院進行孕前檢查的108例女性，年齡21～32歲，抽取空腹靜脈血5 ml，離心分離血清后置于-80℃冰箱保存，用于CMV-IgM抗體的檢查。

1.2 試劑及檢測方法

CMV-IgM試劑盒（ELISA）購于德國羅氏公司，嚴格按照試劑盒說明書步驟操作，采用美國寶特ELX808酶標儀進行檢測，波長設為450 nm處檢測OD值，每份標本重復檢測3次，取其均數(shù)。實時熒光定量-PCR送中山大學達安基因公司檢測，引物系列：sense 5'-GTG CAC AGT CCT AGG ATT AA-3'，anti-sense 5'-GAG TAA CGA TTC GAA CCG TA-3'，逆轉錄反應條件為37℃ 1 h，然后95℃ 3 min；實時熒光定量-PCR 反應為 93℃ 3 min，然后 93℃ 30 s，55℃ 45 s，72℃45 s，共40個循環(huán)。主要儀器為ABI 3900臺式高通量DNA合成儀，科大創(chuàng)新HC-3018R高速冷凍離心機，ABI 9700 PCR儀，ABI 7500全自動熒光定量PCR儀。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

兩種檢測方法CMV-IgM陽性率比較，實時熒光定量-PCR法陽性率高于ELISA法，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩種檢測方法的CMV-IgM陽性率比較

ELISA法檢測為陽性的62例婦女采用實時熒光定量-PCR檢測也為陽性，其余18例實時熒光定量-PCR法檢測為陽性的婦女ELISA法檢測均為陰性。筆者分析發(fā)現(xiàn)，此18例標本血清CMV-IgM抗體拷貝數(shù)均明顯較低（拷貝數(shù)<10-4/ml）。

3 討論

本研究表明，采用實時熒光定量-PCR檢測孕前篩查婦女外周血CMV-IgM抗體水平較傳統(tǒng)的ELISA法敏感性及準確率高，對于孕前篩查可能具有較好的臨床價值。

我國是CMV感染高發(fā)的國家，且多數(shù)人感染后無明顯臨床癥狀，表現(xiàn)為潛伏感染[2]。然而，孕婦近期感染CMV后，不僅會對孕婦產(chǎn)生嚴重影響，如流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等[3]，CMV還可通過胎盤屏障到達胎兒體內，導致胎兒畸形、發(fā)育遲緩和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常等[4]。檢測孕前婦女外周血CMV-IgM抗體水平是評價CMV近期感染的重要檢測指標[5]，目前也為廣大臨床醫(yī)師所重視。CMV-IgM抗體一般在病毒感染3～5 d后出現(xiàn)，可維持12～16周，具有出現(xiàn)早、消失快的特點[6]。病毒感染的早期或恢復期，血中CMV-IgM抗體水平較低。因此，采用敏感性高的檢測手段對CMV感染的早期準確診斷具有重要的臨床意義。既往多采用ELISA法，近年來隨著實時熒光定量-PCR技術的普及，有研究報道實時熒光定量-PCR檢測血清CMV-IgM抗體水平也具有較好的敏感性及準確率。

筆者選擇108例孕前婦女，同時采用實時熒光定量-PCR和ELISA法檢測外周血CMV-IgM水平，其中實時熒光定量-PCR陽性率為74%，而ELISA法為57%，兩者差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。進一步分析發(fā)現(xiàn)，其中18例實時熒光定量-PCR陽性的婦女外周血CMV-IgM抗體水平均為低拷貝數(shù)（拷貝數(shù)<10-4/ml），提示對于病毒低拷貝數(shù)的人群，采用實時熒光定量-PCR法檢測可在一定程度上提高診斷的敏感性及準確率。實時熒光定量-PCR具有快速、準確、敏感性高的特點，筆者認為利用其這些特點可以在一定程度上提高CMV感染檢測的敏感性及準確率，但其費用較傳統(tǒng)ELISA法高，這可能也在一定程度上限制了這種技術的臨床運用。

總之，筆者認為，實時熒光定量-PCR對孕前婦女CMVIgM抗體水平的檢測較傳統(tǒng)ELISA法具有較高的敏感性及準確率，值得臨床推廣使用。

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[6]應慧強.5826名孕婦巨細胞病毒近期感染檢測分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2005,25(4):71.