痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠血漿NO和5－HT濃度的影響1）

付秋菊，楊德功，黃厚才，王志國，姚盛名，朱婉華，田耀洲

偏頭痛是由于發作性血管舒縮功能障礙以及某些物質暫時性改變所致的一種伴有腦及自主神經系統功能暫時性障礙的頭痛[1]。世界衛生組織指出嚴重的偏頭痛將與癱瘓一同位居人類疾病致殘率之首，但其發病機制仍不明確，存在多種學說，其中血管學說、神經遞質學說仍是各國學者比較公認的學說。研究表明[2]，一氧化氮（NO）可引發神經源性炎癥，激活傷害感覺神經元的敏感性，介導機體內痛覺信號的傳導，從而放大其生物學作用，致使痛覺的發生[3]。另外在偏頭痛患者中存在一系列的生化改變，在已進行的所有偏頭痛生化研究中，5－羥色胺（5－HT）含量變化最恒定，并具有相對特異性，是公認的在偏頭痛發病中起重要作用的神經遞質。

為闡明痛寧膠囊治療偏頭痛的作用機制，以硝酸甘油型偏頭痛大鼠為研究對象，以血漿NO和5－HT濃度變化為偏頭痛發作時的觀察指標，研究痛寧膠囊對上述指標的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物與分組 SD大鼠60只，上海西普爾－必凱實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（滬）：2008－0016，雌雄各半，體重283g±23g。隨機分為空白對照組及偏頭痛模型對照組、陽性藥物對照組及痛寧膠囊藥液高、中、低劑量組，每組8只。

1.1.2 主要藥物、試劑及儀器 痛寧膠囊，南通良春風濕病醫院院內制劑，批準文號：蘇藥制字Z04001376；產品批號：091208。硝酸甘油注射液，5mg／mL，北京益民藥業有限公司生產，批準文號：國藥準字 H11020289，生產批號：20100911；琥珀酸舒馬普坦片，天津華津制藥有限公司，批準文號：國藥準字H20040700，生產批號：006909T，用蒸餾水配制成濃度為1 mg／mL的舒馬普坦藥液備用；NO試劑盒，南京建成生物工程研究所，生產批號：20100726；大鼠5－HT試劑盒，上海江萊生物科技有限公司，LOT：10－05；分光光度計721；全自動酶免分析儀等。

1.2 方法

1.2.1 偏頭痛模型建立及藥物干預 根據Cristina等[4]方法，除空白對照組不作處理，其余各組動物予以大鼠皮下注射硝酸甘油10mL／kg，制作偏頭痛模型。30min后按組灌胃給藥。空白對照組和模型對照組灌胃等容積的蒸餾水，陽性藥物對照組灌胃琥珀酸舒馬普坦藥液6mL／kg，研究藥物組痛寧膠囊藥液高、中、低劑量組分別以8.64g／kg、4.32g／kg、2.16g／kg灌胃。1.2.2 NO、5－HT檢測 大鼠造模后4h，予以用10%水合氯醛300mg／kg腹腔麻醉動物，腹主動脈采血約4mL加入肝素鋰的真空采血管中，混勻后3 000r／min離心10min，分離血漿，提取上清，于－20℃保存樣品。NO以硝酸還原酶法測定其濃度。5－HT采用ELISA法測定。

2 結 果

2.1 各組大鼠血漿NO濃度比較（見表1） 模型對照組大鼠血漿NO濃度較空白對照組顯著升高（P＜0.01）。陽性藥物對照組，痛寧膠囊高、中劑量組均能顯著降低血漿NO濃度，與模型對照組比較有統計學意義（P＜0.05）。痛寧膠囊高劑量組與陽性藥物對照組比較無統計學意義（P＞0.05）。

表1 痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠NO的影響（±s）

表1 痛寧膠囊對硝酸甘油型偏頭痛大鼠NO的影響（±s）

組別 動物（只） 劑量 NO（μmol／L）空白對照組 8 等容積蒸餾水119.38±4.71模型對照組 8 等容積蒸餾水 153.24±9.761）陽性藥物對照組 8 6mL／kg 135.87±7.862）痛寧膠囊高劑量組 8 8.64g／kg 137.20±12.472）痛寧膠囊中劑量組 8 4.32g／kg 142.10±8.992）痛寧膠囊低劑量組 8 2.16g／kg 154.58±14.14與空白對照組比較，1）P＜0.01；與模型對照組比較，2）P＜0.05

2.2 各組大鼠血漿5－HT濃度比較（見表2） 與空白對照組比較，模型對照組大鼠血漿5－HT濃度顯著降低（P＜0.01）。與模型對照組比較，陽性藥物對照組，痛寧膠囊高劑量能顯著升高血漿5－HT濃度（P＜0.05）。痛寧膠囊高劑量組與陽性藥物對照組比較無統計學意義，高劑量痛寧膠囊與舒馬普坦升高血漿5－HT濃度作用強度相當。

表2 痛寧膠囊對硝酸甘油偏頭痛大鼠5－HT濃度的影響（±s）

表2 痛寧膠囊對硝酸甘油偏頭痛大鼠5－HT濃度的影響（±s）

組別 動物（只） 劑量 5－HT（ng／mL）空白對照組 8 等容積蒸餾水83.6±2.5模型對照組 8 等容積蒸餾水 39.4±1.71）陽性藥物對照組 8 6mL／kg 58.7±2.02）痛寧膠囊高劑量組 8 8.64g／kg 56.3±2.42）痛寧膠囊中劑量組 8 4.32g／kg 42.0±2.0痛寧膠囊低劑量組 8 2.16g／kg 40.5±1.3與空白對照組比較，1）P＜0.01；與模型對照組比較，2）P＜0.05

3 討 論

本實驗所選造模方法簡單、經濟、機制單一，可在短期內復制[5]。該模型具有表面效度，能夠在活體清醒狀態下觀察大鼠的行為學特征，可用于中藥治療作用的研究[6]。

舒馬普坦作為經典的抗偏頭痛藥物，通過激動5－HT1B／1D受體發揮其藥理作用，是目前已知具有確切作用機制的治療偏頭痛藥物[7]。

偏頭痛發作期間，發現全血中硝酸鹽類升高[8]，而近年來使用NOS抑制劑（L－NMMA）能夠有效治療偏頭痛、緊張型頭痛以及叢集性頭痛[9]，更加證實NO在偏頭痛和其他頭痛產生中是一個十分關鍵的因子[10]。如激活NO引發偏頭痛的可能機制是：通過擴張腦及腦以外的血管，或直接作用于血管周圍感覺神經引發頭痛[10]；調整三叉神經元降鈣素相關基因肽（CGRP）基因的表達[11]，引起CGRP的釋放[12]；增強三叉神經脊束核內第一突觸中對有害刺激的反應[13]；激活NO－環單磷酸鳥苷（cGMP）途徑進一步引發瀑布反應[9]；通過作用于核轉錄因子（NF－κB）引 AP－I的亞單位c－fos和junB的表達增加[1]，參與機體內痛覺信號的傳導，提示NO誘發偏頭痛存在一系列的級聯反應。

本實驗中亦發現模型組大鼠血漿NO濃度升高，可能是硝酸甘油作為NO的前藥[9]，使得其向NO的轉化率升高[1]，通過導致腦膜血管擴張、神經源性炎癥形成及激活下丘腦、腦干及脊髓節段神經元功能等作用，引起三叉神經纖維的超敏性，誘發頭痛[14]。而痛寧膠囊能顯著降低硝酸甘油誘導的偏頭痛大鼠血漿NO的濃度，提示抑制NO的合成，或者減少其釋放，或者加速其分解代謝可能是痛寧膠囊治療偏頭痛的作用機制之一。

5－HT是一種神經遞質，可加重偏頭痛相關癥狀[15]。無論是有無先兆的偏頭痛患者頭痛發作期間中均發現，低血漿5－HT和高5－羥吲哚乙酸（5－HIAA）水平，且在腦脊液亦有5－HIAA的升高，這種水平的改變不僅是血小板功能障礙更主要是腦功能障礙的反應[16]。應用5－HT耗竭藥物致低5－HT狀態的大鼠皮質擴散抑布波增強，三叉神經血管感受傷害途徑的激活[17]。應用單光子發射計算機體層成像技術亦發現，偏頭痛發作期間腦干5－羥色胺轉運蛋白（5－HTT）的升高，這種改變與突出間隙5－HT水平的下降相吻合[18]。而曲坦類選擇性抗偏頭痛藥物起作用與三叉神經與背根神經節神經元5－HT1B／1D／1F受體表達有關[19]。可進一步導致大腦微血管對NO反應的敏感性增高[20]，部分5－HT漏出到血管周圍的細胞外液中，與組胺、緩激肽、血管遲緩激肽等神經肽類物質一起使血管壁痛閾降低，并造成動脈的“無菌性炎癥”[21]。

本實驗就痛寧膠囊對5－HT的濃度是否有影響進行研究，觀察到皮下注射硝酸甘油可明顯引起偏頭痛大鼠血漿5－HT濃度的顯著降低，而予以痛寧膠囊干預后，能夠顯著升高其血漿濃度，提示痛寧膠囊通過升高5－HT的濃度途徑治療偏頭痛，而具體通過何種機制升高5－HT，目前尚不清楚，有待進一步的研究。

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