高效液相色譜法測定注射用奧拉西坦的含量

姜衛東，盧凱旋 ，萬 順，周 玲，任榮軍

(1.湖南健朗藥業有限責任公司，湖南 岳陽 414000; 2.湖南省岳陽市藥品檢驗所，湖南 岳陽 414000)

奧拉西坦為新一代腦代謝改善藥，屬新型吡咯烷酮類(環GABOB)衍生物，對腦血管病、腦損傷、腦瘤(術后)、顱內感染、癡呆、腦變性疾病等均有良好療效。目前其已在歐洲、美國、日本和韓國上市并廣泛應用于臨床，現行藥品標準采用氮測定法測定奧拉西坦含量[1]，方法專屬性不強，為有效控制本品質量，筆者采用反相高效液相色譜法，建立了奧拉西坦的含量測定方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津L－20AT系列高效液相色譜儀(Slution色譜工作站，二極管陣列檢測器);電子分析天平(梅特勒托利多儀器上海有限公司)。奧拉西坦對照品(由湖南健朗藥業有限責任公司提供，純度為99.8%);注射用奧拉西坦(湖南健朗藥業有限責任公司，批號分別為20091001，20091002，20091003);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Ultimate XB－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(5∶95);檢測波長:214 nm;流速:0.8 mL/min;進樣量:10 μL。理論板數按奧拉西坦計算應不低于3 000。

2.2 溶液制備

取奧拉西坦對照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取本品約相當于奧拉西坦20 mg的量，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。取本品輔料適量，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 專屬性試驗

取注射用奧拉西坦約20 mg，置錐形瓶中，按下列方法進行處理。酸破壞性試驗:加0.1 mol/L鹽酸10 mL溶解后，水浴中回流30 min，冷卻，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至近中性;堿破壞性試驗:加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL溶解后，水浴中加熱5 min，冷卻，用0.1 mol/L鹽酸溶液調節pH至近中性;高溫破壞試驗:置105℃恒溫干燥箱中5 h;氧化破壞試驗:加3%過氧化氫2 mL溶解后，放置2 h;光照試驗:于4 700 lx下光照破壞2 d。然后均加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，該色譜條件可將奧拉西坦與降解產物及輔料完全分離，分離度大于1.5。從二級管陣列檢測器提取的色譜圖上可知奧拉西坦峰的純度角小于閾值，表明該峰為單一峰，該方法專屬性良好。見圖1。

圖1 方法專屬性考察色譜圖

2.4 方法學考察

線性關系考察與定量限確定:精密稱取奧拉西坦對照品16.16 mg，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密量取對照品貯備溶液稀釋一定體積，制成質量濃度分別為 0.040 4，0.080 8，0.161 6，0.242 4，0.323 2 g/L 的對照品溶液，按上述色譜條件分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品質量濃度 C(g/L)為橫坐標、峰面積 A為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A=7.98×106C+20 923.74，r=0.999 8(n=5)。結果表明奧拉西坦對照品質量濃度在0.040 4～0.323 2 g/L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。另精密稱取奧拉西坦對照品10.1 mg，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，精密量取適量，加流動相逐步稀釋至信噪比 S/N約為10，進樣量為10 μL，測得奧拉西坦的最低檢出限為1.28 ng。

精密度試驗:取同一對照品溶液，在上述色譜條件下重復進樣6次，每次10 μL。結果奧拉西坦對照品平均峰面積為1 630 382，RSD為0.64%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，8，12，24 h時進樣10 μL。結果奧拉西坦峰面積的 RSD=0.4%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

表1 回收率測定結果(n=6)

重復性試驗:取本品約相當于奧拉西坦20 mg，同時稱取6份，分別置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。另取奧拉西坦對照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按上述色譜條件測定，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果注射用奧拉西坦的平均含量為104.2%，RSD 為 0.6%(n=6)。

加樣回收試驗:稱取奧拉西坦對照品約16，20，24 mg各3份，精密稱定，確定分別置100 mL量瓶中，各加空白輔料適量，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;另稱取對照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。結果見表1。

2.5 樣品含量測定

取3批不同批號的樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件分別進樣測定。結果批號為20091001，20091002，20091003的樣品中奧拉西坦含量分別為101.6，101.2，101.8 mg/g，含量平均值為101.5 μg/g。

3 討論

奧拉西坦極性較大，易溶于水，不溶于乙腈，常規測定方法為氮測定法[1]，文獻報道多采用氰基柱[2－3]、氨基柱[4]的高效液相色譜法進行測定。筆者通過考察不同的色譜柱，發現Ultimate C18柱與氰基柱均能對奧拉西坦進行分離，但對于與類似結構化合物吡拉西坦的分離及峰形對稱性，前者效果更好。并且，采用Ultimate C18柱分離奧拉西坦，出峰時間快，方法耐用性較好。

奧拉西坦在紫外區無吸收，選用示差析光檢測器，檢測靈敏度太低;采用紫外檢測器的末端吸收，經考察奧拉西坦在210～220 nm波長之間，檢測靈敏度隨檢測波長的增長而降低，同時因流動相中甲醇在末端也有吸收，故測定波長也不宜選擇過小。因此，選擇214 nm作為檢測波長。

[1]WS－1005(X－750)－2002，國家藥品監督管理局藥品標準[S].

[2]閆小燕，胡 欣，曹國穎.等.高效液相色譜法測定奧拉西坦氯化鈉注射液中主藥的含量[J].中國藥房，2006，17(8):618－620.

[3]劉 萍，夏 釗，彭艷梅.高效液相色譜法測定奧拉西坦口服液中奧拉西坦的含量[J].中南藥學，2008，6(6):304－306.