高效液相色譜法測定麻仁潤腸丸中橙皮苷含量

姜雪敏，楊立志，許世偉，李延雪

(黑龍江省雞西市藥品檢驗(yàn)所，黑龍江 雞西 158100)

麻仁潤腸丸由大黃、火麻仁、炒苦杏仁、木香、白芍、陳皮組方，具有潤腸通便的功效，用于腸胃積熱、胸腹脹滿、大便秘結(jié)。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中無橙皮苷的含量控制。為更好地控制麻仁潤腸丸的質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[2－4]，采用高效液相色譜(HPLC)法測定了制劑中橙皮苷的含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－2010A型高效液相色譜儀;AG285型電子分析天平;KQ－400KDE型超聲波清洗器。橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100721－200512);麻仁潤腸丸(批號為0013278，0013282，0013296);水為純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Extend－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 0.1%磷酸溶液(18∶82);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL;檢測波長:283 nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷0.106 0 mg的溶液，即得對照品溶液。取樣品10丸，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.509 7 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量并以相同工藝制備不含陳皮的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜圖中，在橙皮苷色譜峰相應(yīng)位置無干擾峰出現(xiàn)，表明陰性樣品的其他組分對橙皮苷的測定無干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:精密吸取橙皮苷對照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以橙皮苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1.830 686×106X+2.074449 ×104，r=1.0000(n=5)。結(jié)果表明，橙皮苷 進(jìn) 樣 量 在 0.212 0～2.1200μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.24%(n=6)，表明方法精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號為0013278)，分別依法制備6份供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD=1.02%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品溶液，分別在配制后0，2，4，6，8，10，16 h時(shí)依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD=0.26%(n=7)，表明橙皮苷在供試品溶液中16 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的同批樣品(批號為0013278，含量為5.84 mg/g)6份，每份約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，以兩份為一組，共 3 組，每組分別精密加入 1.060，1.431，1.590 mg橙皮苷對照品，按供試品溶液的制備方法制備溶液并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按擬訂的含量測定方法測定。結(jié)果批號為0013278，0013282，0013296 的樣品中橙皮苷含量分別為 5.84，5.08，5.96 mg/g。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3 討論

橙皮苷的提取是影響其含量測定的關(guān)鍵之一。本試驗(yàn)曾以甲醇、50%甲醇、稀乙醇為提取溶劑，結(jié)果以甲醇為提取溶劑時(shí)橙皮苷含量明顯較高。還比較了超聲提取20，30，40 min，結(jié)果表明超聲30 min橙皮苷提出率高于20 min，與40 min提出率基本相同，故本試驗(yàn)采取超聲30 min的方法提取。對甲醇－水、乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－冰醋酸－水等流動相進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈－0.1%磷酸溶液能很好地改善分離度和柱效，經(jīng)過條件優(yōu)化選擇，確定了乙腈－0.1%磷酸溶液(18∶82)為流動相，橙皮苷峰與其他組分能實(shí)現(xiàn)完全分離。

[1]國家藥典委員會.中華人民國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1 094－1 095.

[2]廖厚知，粟華生，梁山丹，等.HPLC測定銀芒止咳片中橙皮苷的含量[J].中成藥，2007，29(7):附 22 －23.

[3]龐小雄，梁松慶，鐘兆健，等.HPLC法測定拈痛丸中橙皮苷的含量[J].中藥材，2007，30(6):734 －735.

[4]王 薇，丁東平，劉祖雄，等.二陳顆粒的制備與質(zhì)量控制[J].中國藥房，2006，17(23):1 782 －1 784.