葡萄糖6-磷酸異構酶在類風濕性關節(jié)炎診斷中的意義

崔麗艷,胡曉舟,張文靜,張 捷

(北京大學第三醫(yī)院檢驗科,北京100191)

類風濕性關節(jié)炎(RA)是一種常見的慢性炎癥性疾病,病因不是很清楚,主要表現(xiàn)為關節(jié)受損。關節(jié)內(nèi)及關節(jié)外自身抗體的存在是RA的特征之一。自身抗體的檢測如類風濕因子是最常用的診斷和預測指標[1]。RA患者對自身抗體的反應是不同的。大約70-80%的RA患者體內(nèi)存在RF,其他自身抗體比如抗C1q抗體[2]和抗中性粒細胞胞漿抗體[3]則很少出現(xiàn)。然而,RF也在其他自身免疫性疾病、感染性疾病和3-5%的健康人(老年人時增加到10-30%)血清中存在[4],表明類風濕因子對RA不是很特異。葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)是一種廣泛表達并且具有多種功能的蛋白質(zhì),它是能量循環(huán)過程和糖分解過程中必不可少的胞漿酶,同時它又作為細胞外信號傳導分子。眾所周知,GPI是自分泌運動因子和神經(jīng)細胞因子,可能在腫瘤和自身免疫方面起著一定的作用[。5,6另]外,文獻[7]報道,GPI可以引起DBA/1小鼠關節(jié)炎,支持GPI在小鼠的自身免疫過程中發(fā)揮著一些直接作用。因此本研究通過分析RA患者血清中GPI、RF、CRP、ESR的獨立檢測的水平以及聯(lián)合檢測來探討其對于RA診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 RA組 選擇2007年12月至2008年9月北京大學第三醫(yī)院風濕免疫科門診和住院患者39例,其中男性13例,女性26例,年齡20-83歲,平均年齡(61±16)歲,所有患者均符合美國風濕病協(xié)會(ACR)1987年修訂的RA診斷標準。

1.1.2 非RA組 同期在我院門診就診和住院的患者52例,其中男性18例,女性34例,年齡19-83平均年齡(54±17)歲,均符合國內(nèi)或國際相應的診斷標準。其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者23例,混合型結締組織病2例,強直性脊柱炎6例,干燥綜合征10例,未分化結締組織病3例,多發(fā)性肌炎/皮肌炎5例,脊柱關節(jié)病2例,腸病性關節(jié)炎1例。

1.1.3 健康對照組 我院體檢健康者32例,其中男性10例,女性22例,年齡26-81平均年齡(53±16)歲。

1.2 研究方法

1.2.1 標本的采集與保存 所有病例均空腹采集靜脈血3 ml,分離血清,-80℃冰箱備用。所有標本一次凍融后測定。

1.2.2 試劑及測定方法 GPI試劑盒和抗原標準品均由上海北加生化試劑公司提供,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中GPI;RF-IgM和CRP所有試劑均由貝克曼庫爾特公司提供,方法為速率散射比濁法,在IMMAGE雙光徑免疫濁度分析儀上完成測定;ESR為動態(tài)血沉測定法,所用血沉儀由北京健峰公司提供。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示,不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)(25%-75%分位數(shù))表示。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)的組間比較采用獨立樣本t檢驗,不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)的組間比較采用非參數(shù)檢驗。診斷的敏感性、特異性、準確性通過計算得到,各項指標的診斷價值的比較通過ROC曲線得到。用配對資料McNemar χ2檢驗和Spearman相關分析,評價診斷指標之間的差異及相關性。

2 結果

2.1 RA組與非RA組、對照組之間各項指標的比較 RA組GPI、RF、CRP、ESR 水平均明顯高于非 RA組和正常對照組,差異具有顯著性(P＜0.05)。各指標在非RA組和正常對照組之間比較沒有差異(P＞0.05),各組之間性別以及年齡進行比較,統(tǒng)計學上沒有顯著差異(P＞0.05),說明在病例的選擇上各組之間沒有差異。結果見表1。

2.2 GPI與 RF、CRP、ESR的相關性分析 GPI與RF具有明顯的正相關(r=0.576 P＜0.05),GPI與ESR、CRP也具有明顯的正相關(r=0.411 P＜0.05;r=0.422 P＜0.05)。

表1 患者的一般資料

2.3 GPI、RF、CRP及 ESR的 ROC曲線 GPI、RF、CRP及ESR四項檢測指標的曲線下面積分別為0.821、0.783、0.687、0.709,GPI與 CRP、ESR 的曲線下面積比較均有顯著性差異,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其余各檢測項目間比較均無顯著差異(P＞0.05)。見圖1及表2。

圖1 GPI、RF、CRP及ESR的ROC曲線

2.4 診斷的敏感性、特異性及準確性分析 根據(jù)ROC曲線,以敏感性及特異性之和最大的點作為診斷界值,GPI、RF、CPR及ESR診斷 RA的敏感性、特異性及準確性見表3。GPI與RF聯(lián)合檢測的敏感性、特異性及準確性分別為89.7%[80.2%-99.3%] 、72.6%[58.6%-86.6%]和 78.1%[65.1%-91.0%]。四項指標單獨檢測的敏感性無顯著性差異(P＞0.05),特異性及準確性GPI與RF明顯高于CRP與ESR,具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),但是GPI與RF之間以及CRP與ESR之間均無顯著性差異(P＞0.05)。GPI與RF聯(lián)合檢測的敏感性明顯高于二者單獨檢測(P＜0.05),特異性沒有顯著差異(P＞0.05),準確性明顯高于RF(P＜0.05)。

表2 各項指標檢測的ROC曲線分析

表3 各項指標單獨檢測及聯(lián)合檢測診斷RA的敏感性、特異性及準確性

3 討論

類風濕性關節(jié)炎(RA)的發(fā)病是多因素作用的結果,包括遺傳因素可能的作用、環(huán)境因素、免疫機制和使炎癥發(fā)生的細胞因子網(wǎng)絡的作用[8-11]。然而疾病發(fā)生發(fā)展的機制仍然不是很清楚。RA和特定的HLA-DR,CD4+T細胞的關系是在關節(jié)炎的啟動和發(fā)展過程中起作用[12]。自身抗體在RA和其他各種炎癥性關節(jié)炎中的病理作用還不是很明確,但是使用T細胞受體轉(zhuǎn)基因關節(jié)炎小鼠模型K/BxN進行研究發(fā)現(xiàn),葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)可以作為B細胞和T細胞的自身抗原,將抗GPI抗體轉(zhuǎn)移到NA?VE小鼠體內(nèi)可以誘導與人類RA特征相似(不是完全相同)的關節(jié)炎的特征[13]。

研究結果顯示,RA患者GPI、RF、CRP及 ESR水平明顯高于對照組。有文獻報道,對GPI的自身免疫反應可以自發(fā)的誘導K/BXN T細胞受體轉(zhuǎn)基因小鼠的關節(jié)炎[7]可以推測GPI在人類關節(jié)炎的發(fā)生過程中起了重要作用,同時也證明了GPI不是類風濕性關節(jié)炎的疾病特異性抗體,而是與廣泛的免疫相關的炎癥性關節(jié)炎相關的一種抗原。阻斷此種抗原的作用可能有助于改善疾病的預后。

GPI與RF、ESR及CRP具有明顯的正相關,此結果提示我們在關節(jié)炎的發(fā)病過程中是多種因素聯(lián)合作用的結果,文獻[13-15]報道GPI可以誘導類風濕性關節(jié)炎的發(fā)生,CRP、ESR作為反映類風濕性關節(jié)炎患者關節(jié)炎癥程度的指標。這些結果提示血清中GPI可能參與了關節(jié)炎癥的發(fā)生。

通過ROC曲線分析,四項檢測指標的曲線下面積按由高到低的順序排列分別為GPI(0.821)、RF(0.783)、ESR(0.709)、CRP(0.687),但 GPI與 RF 的曲線下面積比較無顯著性差異。四者單獨檢測的敏感性由高到低依次為GPI(0.744)、RF(0.718)CRP(0.718)、ESR(0.692),特異性由高到低的順序為GPI(0.774)、RF(0.726)、CRP(0.619)、ESR(0.345),準確性由高到低依次為 GPI(0.764)、RF(0.724)、CRP(0.650)、ESR(0.455)。而將GPI與 RF聯(lián)合檢測后診斷的敏感性(0.897)及準確性(0.781)提高了,特異性(0.726)與單獨檢測GPI沒有顯著性差異。敏感性提高,特異性沒有顯著差異,與我們所選擇的聯(lián)合檢測的方式相關。單獨檢測GPI與以往的RF、CRP、ESR等指標相比,沒有明顯的優(yōu)勢,但是將GPI與RF聯(lián)合檢測提高了診斷的敏感性及準確性,因此在臨床上我們可以二者聯(lián)合進行檢測,對患者的早期診斷具有重要的意義。但是我們需要收集更多的病例來驗證該實驗結果,并且對患者進行隨訪,觀察該指標對患者預后判斷的作用,這對于臨床工作將更有意義。

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