超聲波提取紫露草總黃酮及其鑒別

廖 莉 孫婷婷 裴正玲 李 容 潘喬丹 黃鎖義

（1.北海廣播電視大學，廣西 北海536000；2.右江民族醫學院，廣西 百色 533000)

超聲波提取紫露草總黃酮及其鑒別

廖 莉1孫婷婷2裴正玲2李 容2潘喬丹2黃鎖義2

（1.北海廣播電視大學，廣西 北海536000；2.右江民族醫學院，廣西 百色 533000)

為充分利用紫露草植物資源，避免資源的浪費，探討紫露草總黃酮的提取及鑒別方法。采用超聲波乙醇浸提法從紫露草中提取黃酮類物質，對所提取的黃酮類物質進行驗證，并用分光光度法測定含量。測得樣品中總黃酮的含量C=0.1562mg/ml，回收率為97.4%，其純度和產率均較高。該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取紫露草黃酮類物質的有效途徑。

超聲波提取；紫露草；總黃酮；鑒別

紫露草（Tradescantia reflexa）別名紫花鴨草，為鴨跖草科多年生宿根草本，原產于北美，我國引種栽培。紫露草莖通常簇生，紫露草性喜涼爽，濕潤氣候，耐寒性較強，適應性廣，耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿，幾乎沒有病蟲害。最常見的是適應性非常強的開藍紫色花的品種。我國各地均有栽培。紫露草性味淡、甘、涼，可以活血、利水、消腫、散結、解毒。能治療癰疽腫毒、結核、淋病等疾病。

近年來，超聲技術應用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質、動物組織漿的毒質等研究已有報道，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產生的強此振動、高的加速度、強此的空化效應、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響。但超聲技術應用于提取紫露草葉中黃酮類物質的研究尚未見報道，本文報道用超聲波提取紫露草總黃酮及鑒別。

（一）儀器與試劑

1.儀器

KQ5200DB型數控超聲波清洗器（超聲工作頻率40KHz）；UV-755B紫外可見分光光度計；ZF-I型三用紫外分析儀；SHB-III循環水式多用真空泵。

2.試劑

95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；蘆丁標準品；新鮮紫露草。

（二）方法與結果

1.總黃酮成分提取

取新鮮紫露草，烘干，粉碎。稱取紫露草粉末6g，加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩5～7ml為止，放置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.測定方法依據

以蘆丁為對照品測定木瓜葉中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區能獲得穩定的特征吸收峰。

3.定量實驗—總黃酮的含量測定

（1）波長的選擇。取樣品液適量，在0.30ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長范圍測定螯合物的吸光度，螯合物于510nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。

（2）標準曲線的繪制。分別精密吸取蘆丁對照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白，于510nm處測定吸光度，見表1。根據上表得回歸方程：A=-2.9069×10-3+12.05C，r=0.9999。

表1 紫外可見分光光度計測定吸光度

（3）提取物含量的測定。精密吸取樣品液 0.50ml，置10.00ml容量瓶，按標準曲線的制備方法測定其吸光度A=0.097，根據回歸方程：A=-2.9069×10-3+12.05C，計算樣品中總黃酮的含量C=0.1562mg/ml。

（4）回收實驗。精密量取樣品液1.00ml，加入標準蘆丁對照品1.00ml（0.10mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為97.4% 。

4.定性實驗—總黃酮的鑒別

（1）顏色反應。紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。

濃氨水反應：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。

三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。

乙酸鎂反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。

鹽酸-鎂粉反應：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。

（2）紙層析。取樣品溶液10μl點在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（體積比）為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。

（三）討論

1.實驗結果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為97.4%，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質的途徑，具有廣闊的應用前景。

2.黃酮類化合物是一大類天然產物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮痛、免疫調節、降血糖、治療骨質疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用。近年來，世界上掀起了植物藥開發的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。紫露草分布廣泛，本文實驗結果表明，紫露草中含有較為豐富的黃酮。因此，紫露草具有廣泛開發和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發。

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O624.42+1；O6-332

A

1008-1151(2011)04-0129-01

2010-01-06

廖莉（1965－），女，廣西北海人，北海廣播電視大學講師，從事教學科研等工作；黃鎖義，右江民族醫學院化學教研室教授，碩士研究生導師。