艾葉總黃酮的提取及含量測定

天津市安寧醫院（300300）率紅莉

天津醫科大學藥學院（300070）張慶偉

艾葉具有散寒止痛，溫經止血之功效，用于小腹冷痛、經寒不調、宮冷不孕、吐血、衄血、崩漏經多、妊娠下血等癥，外治皮膚瘙癢[1]。現代研究證實：艾葉化學成分是其功效與毒性表達的物質基礎，與功效、毒性之間存在一定的量效關系、量毒關系[2]。因而，對艾葉的化學成分，尤其是單體化合物的研究成為艾葉現代研究的基礎和關鍵。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 紫外分光光度儀：Hitachi U-3310 UV-VIS Spectrophotometer。旋轉蒸發器：SENCO R系列，上海申生科技有限公司。恒溫干燥箱：天津泰斯特儀器有限公司。單相交流感應電動機：上海申生科技有限公司。恒溫水浴鍋：上海申生科技有限公司。HC-TP-II型架盤天平：天津市天平實業有限公司。電子分析天平：FA2004N型，上海恒平科學儀器有限公司。循環水式多用真空泵。KQ-100超聲波清洗器。

1.2 試藥

1.2.1 植物來源：艾葉干燥葉，購自天津市藥材公司，由生藥及藥用植物學教研室侯丕勇博士鑒定。

1.2.2 標準品：蘆丁，由天津醫科大學藥學院儀器分析室提供

1.2.3 藥品和溶劑：乙醇（65%，75%，95%）：分析純，天津市基準化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 試液的制備

2.1.1 供試品浸膏 將500g干燥的艾葉粉碎，以一定濃度的乙醇（65%，75%，95%）浸漬，每次4L，24h，共2次。合并濾液，抽濾。將藥渣棄去，所得濾液經旋轉蒸發減壓蒸餾，回收乙醇，制成浸膏。精密稱取預處理后的艾葉浸膏，即干浸膏100mg置于100ml容量瓶中，加95%乙醇適量，超聲20分鐘溶解后用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

附表1 回收率實驗測定吸光度

附表2 精密度實驗測定吸光度

2.1.2 對照品溶液 精密稱取干燥蘆丁對照品10mg，置于100ml量瓶中，加95%乙醇適量，超聲20分鐘溶解后用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 標準曲線的制備

2.2.1 對照品溶液 分別精密吸取蘆丁對照液（0.10 mg/ml）0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4. 00ml、5.00ml于10ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml,搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白參比液，于507 nm處測吸光度。

2.2.2 檢測波長的選擇 取樣品液2.00ml，在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長范圍測定絡合物的吸光度，絡合物于可見光區507nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。

2.2.3 線性關系考察 在507nm處測定不同濃度對照品溶液吸光度，繪制標準曲線，回歸方程為: A = 0.0118C+0.0133，r = 0.9991。

2.3 加樣回收率試驗 精密量取樣品液2.00ml，制備6份。分別置于10ml量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇定容至10ml，搖勻，靜置12min。以溶劑的空白試劑作空白參比，于507nm處測吸光度。見附表1。

本實驗測定的平均回收率為96.34%，RSD=0.4653%，小于2%。平均回收率在中藥要求的95%到105%之間。因而本實驗符合方法學要求，可用于艾葉中總黃酮含量的測定。

附表3 不同濃度乙醇提取后艾葉中總黃酮的含量

2.4 精密度試驗 精密量取樣品液2.00 ml，置于10ml量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇定容至10ml，搖勻，靜置12min。以溶劑的空白試劑作空白參比，于507nm處測吸光度，連續測定6次。見附表2。

實驗結果：吸收度值(A)的RSD =0.0865%，小于2%。表明儀器精密度能夠滿足測定要求。

2.5 總黃酮含量的測定 利用不同濃度乙醇進行提取后，艾葉中總黃酮含量測定結果。見附表3。

從數據表中可知， 用95%乙醇提取獲得的艾葉浸膏的總黃酮含量最多，因而，使用95%的乙醇對艾葉中總黃酮成分進行提取為宜。

3 討論

選用蘆丁作為對照品，繪制標準曲線，A= 0.0118C+0.0133， r=0.9991，在5.800～58.000μg/ml范圍內吸收度和對照品的質量濃度呈良好的線性關系。從而計算出艾葉樣品中總黃酮含量，95%乙醇提取的樣品中含有的總黃酮含量為10.06mg/g。經方法學檢驗，本實驗方法操作簡單，結果準確，重現性好，穩定性強，適用于艾葉中總黃酮含量的測定。進而，利用此方法測定不同乙醇濃度(95%、75%、65%)對艾葉提取物中總黃酮含量的影響，以選擇適當的乙醇提取濃度, 確定使用95%的乙醇對艾葉的總黃酮成分進行提取最為適宜，為艾葉化學成分的進一步深入研究奠定基礎。