nm23和VEGF-C在胃癌組織中的表達及意義

鞏有方 董海生 張鳳敏 姜衛星 張浩 趙健

胃癌是最常見的惡性消化道腫瘤。全部惡性腫瘤的第三位，胃癌的最主要的轉移方式之一是經淋巴道轉移，是影響患者預后的一個重要因素。血管內皮生長因子-C(VEGF-C)主要作用介導腫瘤淋巴管、血管生成和增殖，從而促進腫瘤細胞生長和侵襲，nm23是腫瘤轉移抑制基因，而該基因缺失或者突變，均會促進腫瘤的生長和轉移。本試驗通過VEGF-C和nm23在胃癌組織中表達情況來探討其預后的價值。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取河北冀中能源峰峰集團總醫院2005年5月至2008年12月手術切除及胃癌標本52例，所有患者術前均未行化療和放療。年齡32～74歲，平均年齡48．2歲;其中Ⅰ期10例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，此外取24例癌旁正常組織作為對照。

1．2 方法 兔抗人多克隆VEGF-C抗體，S-P試劑盒由北京中山生物技術有限公司提供，染色方法參照試劑盒說明，分別用

1．5%正常兔血清和0．01 mol/L PBS液取代第一抗體作為替代對照和空白對照。抗nm23基因產物單克隆抗體由美國Santa Cruz公司生產，免疫組化染色采用抗生蛋白鏈菌素-生物素標記法(LSAB)。試劑盒有丹麥DAKO公司生產，按產品說明書試驗。TBS代替第一抗體作陰性對照。

1．3 結果判定 nm23陽性染色為位于細胞漿的棕黃色顆粒或團塊，當陽性染色的癌細胞＜30%時定為陰性表達，即低表達;≥30%時為正常表達［1］。選染色均為癌細胞最密集區，在400倍視野下，以著色細胞占視野細胞總數的多少分為0～3級。0級:0;1級:＜25%;2級:26% ～50%;3級:＞50%。1級以上為陽性，0級為陰性。

1．4 統計學分析 計數資料采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 nm23和VEGF-C在胃癌和癌旁正常胃組織中的表達的關系 nm23在癌細胞和癌旁正常胃組織中都可見陽性表達，但nm-23在52例胃癌組織中陽性表達23例(44．23%)，低于正常組織的83．33%(P＜0．01);VEGF-C在胃癌組織中陽性表達33 例(63．46%)，顯著高于正常胃組織的 29．17%(P ＜0．01)。2．2 nm23低表達與胃癌生物學行為的關系 52例胃癌組織中nm23低表達有29例，低表達率為55．77%，而淋巴結轉移組中有26例，其中低表達有10例(38．46%);在分化程度差組中，胃癌20例中低表達有5例(25．00%)。有淋巴結轉移組陽性率明顯低于無淋巴結轉移組(P＜0．01)。在分化程度差組明顯低于分化程度高組，而nm23低表達在性別、腫瘤大小和TNM分期間差異無統計學意義(P＞0．05)。見表1。

2．3 VEGF-C高表達與胃癌生物學行為的關系 52例胃癌中，VEGF-C陽性表達33例(63．46%)，淋巴結轉移組中，有淋巴結轉移者26例中，VEGF-C表達有19例(73．08%)，有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴結轉移者(P＜0．05)。分化程度組中，分化程度差20例中，VEGF-C高表達18例(90%)，二者比較差異有統計學意義(P＜0．05)。而VEGF-C表達在腫瘤大小、患者性別、TNM分期關系間差異無統計學意義(P＞0．05)。見表 1。

表1 nm23低表達、VEGF-C高表達與臨床各因素關系 n=52，例(%)

2．4 相關性分析 在29例nm23低表達陽性患者中，有24例VEGF-C為陽性表達。23例nm23低表達陰性患者中，VEGF-C為陰性表達8例。提示nm23低表達與VEGF-C高表達呈正相關關系(r=0．61，P ＜0．01)。

3 討論

3．1 nm23 1988年nm23基因由美國國立癌癥研究所的Steeg等［2］應用克隆雜交技術首先從小鼠的黑色素瘤細胞中分離得到。該基因定位于人類染色體17q22，產物為152個氨基酸組成的17 kd核內及胞漿蛋白，該蛋白與二磷酸核苷激酶(nucleotide diphosphate kinase，NDPK)的氨基酸序列具有高度同源性。目前認為nm23可能是一種具有NDPK功能的基因，并由此可能抑制腫瘤的轉移能力，NDPK一方面參與細胞骨架微管蛋白的多聚化以調節細胞運動，并參與細胞分裂時紡錘體的形成來調節細胞分化，另一方面通過影響G蛋白的信號傳遞發揮負調節作用［3－5］。nm23基因表達與多種腫瘤好轉呈負相關［4］。本研究發現:胃癌組織中nm-23的表達(55．77%)顯著低于正常組織的87．5%(P ＜0．05)。在組內比較中，nm-23在分化程度、有無淋巴結轉移間差異有統計學意義(P＜0．05)。這提示nm-23基因在抑制腫瘤細胞的活性，在胃癌的發生發展過程中起一定的作用。本實驗說明，nm-23基因具有抑制腫瘤細胞的活性，該基因缺失、突變或失活均會促進胃癌的發生及轉移，可以作為腫瘤預后的一項指標。

3．2 VEGF-C VEGF-C通過旁分泌方式特異地作用于表達VEGF-C的血管內皮細胞，使血管內皮細胞分裂增殖，從而形成新生血管。在沒有血管形成時，大多數腫瘤生長的直徑很少超過1 mm。目前研究VEGF-C作用機制是選擇性作用于血管內皮細胞膜上2種受體:flt-1、KDR，通過磷酸肌醇特異性磷酸酯酶c使胞內IP3濃度升高而發揮作用。VGEF-C的表達與腫瘤復發、轉移呈正相關，可以作為腫瘤預后的預測因素之一。目前研究VEGF-C在術前預測甲狀腺癌［6］、結腸癌的淋巴結轉移方面的可能性;而胃癌方面結論仍有爭論;有研究發現人胃癌細胞中VEGF-C的表達與性別、年齡、大小無關，但與腫瘤細胞浸潤深度、淋巴結轉移密切相關［7］。狄茂軍等［8］經研究發現VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表達隨臨床分期的升高其表達有增強的趨勢，但均未達到統計學意義的差別。Onogawa等［9］研究發現，VEGF-C表達與胃癌漿膜浸潤、淋巴結轉移有關。Amioka等［10］通過研究胃癌標本發現VEGF-C與浸潤深度、淋巴結轉移有關，VEGF-C陽性組胃癌淋巴管密度明顯高于陰性組。因此，在胃癌的生長及轉移過程中，VEGF-C是一項不可或缺的因素之一。

本研究表明，在有可能影響胃癌生物學行為的因素當中，VGEF-C高表達在淋巴結轉移、分化程度間差異有統計學意義(P＜0．05)。亦可能與腫瘤細胞的生物學特性有關，這需要以后進一步研究。最新研究患者應用抗VEGF-C抗體能明顯抑制腫瘤生長和轉移，這也從另一方面提示VEGF-C在腫瘤發生轉移中的作用。

1 張聲，葉樂華，杜華．P53過表達和nm23低表達與胃癌淋巴結轉移關系的探討．中華腫瘤雜志，1995，17:418-420．

2 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al．Evidence for a novel gene association with low metastatic potential．J Natl Cancer Inst，1998，80:200．

3 Demirbas S，Sucullu I，Yildirim S，et al．Influence of the c-erbB-2，nm23，bcl-2 and p53 protein markers on colorectal cancer．Turk J Gastroenterol，2006，17:13-19．

4 Steeg PS．Perspectives on classic article:metastasis suppressor genes．J Natl Cancer Inst，2004，96:E4．

5 Wang LB，Jiang ZN，Fan MY，et al．Changes of histology and expression of MMP-2 and nm-23-H1 in primary and metastatic gastric cancer．World J Gastroenterol，2008，14:1612-1616．

6 鞏有方，趙現斌，張浩，等．甲狀腺乳頭狀癌組織中CD105、VEGF-C表達與其轉移的關系．中國醫師雜志，2009，11:1253-1255．

7 錢立元，魏源水，張翼，等．VEGF-C在胃癌組織中的表達與淋巴管生成及淋巴結轉移的相關性研究．中國普通外科雜志，2007，16:915-918．

8 狄茂軍，王衛星，蘭明銀，等．VEGF-C與VEGFR-3在胃癌組織中的表達及意義．臨床消化病雜志，2008，20:150-152．

9 Onogawa S，Kitadai Y，Amioka T，et al．Expression of vascular endothelial growth factor-C and D(VEGF-C and VEGF-D)in early gastric carcinoma:correlation with clinicopathological parameters．Cancer Lett，2005，226:85．

10 Amioka T，Kitadai Y，Tanaka S，et al．Vascular endothelial growth factor-C expression predicts lymph node metastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa．Eur J Cancer，2002，38:1413-1419．