提高EP-SPM產品質量的工藝研究

朱德育 朱義彬 翟明禮 武培 蘇瑜

提高EP-SPM產品質量的工藝研究

朱德育 朱義彬 翟明禮 武培 蘇瑜

目的 降低有關物質含量;方法 改進提取精制工藝;結果 優化了提取精制工藝;結論

改進后的提取精制工藝可以降低有關物質的含量，使產品能夠100%符合歐洲藥典2001版質量標準［2001：0293］。

提取;精制;有關物質;歐洲藥典

螺旋霉素(Spiramycin簡稱SP)是十六元環大環內酯類抗生素，于1954年Phone-Poulenc實驗室從Streptmyces ambofaciens代謝產物中分離獲得。螺旋霉素屬中譜抗生素，它不可逆地抑制了核糖體上肽鍵的形成，主要對葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌等革蘭氏陽性菌及腦膜炎雙球菌等革蘭氏陰性菌有高度敏感性。它對耐青霉素的致病菌具有較好的療效。在現代生活中有廣泛的用途，國內還用于急性乳腺炎、急性淋巴炎等，都具有很好的療效［1，2］。

我公司研制的螺旋霉素經中國科學院微生物研究所鑒定為(Streptomyces ambofaciens)與Spiramycin的產生菌為同一菌種。研制的原料藥經組分確證與歐洲藥典委員會提供的Spiramycin標準品相符，因此我們將該品命名為：EP-SPM。

1 材料與方法

1.1 菌種

生二素鏈霉菌(Streptomyces ambofaciens)F809-21天方藥業股份有限公司提供。

1.2 含量及有關物質的測定方法：按歐洲藥典［2001：0293］有關物質檢測法檢測

2 結果與討論

2.1 EP-SPM 有關物質的確定

分別稱取標準品與樣品25 mg，按歐洲藥典［2001：0293］有關物質檢測法檢測，得高效液相色譜圖2.1：從色譜圖可以看出，樣品中主要超標的前雜質峰與標準圖譜中第一個雜質一致，即前雜質應為NSPMⅠ(NewspiramycinⅠ)，與SPMⅠ在結構上少了一個碳霉糖，分子量為693。后雜質與標準圖譜中DSPM(Dimer Spiramycin)一致，即螺旋霉素的二聚物，其分子量為SPM的二倍。

圖1 標準品與樣品高效液相色譜圖有關物質對照

2.2 EP-SPM有關物質特性

EP-SPM 為弱堿性生化物質，在水溶液中呈二級電離pK1=7.1，pK2=8.4，共有SPM、SPM+、SPM2+三種存在狀態。

對于堿性生化物質：

pH＞pK 物質呈游離分子狀態 易從水相→有機相

pH＜pK 物質呈“+”離子狀態 易從有機相→水相

由EP-SPM HPLC圖譜分析可見：

極性大小：前雜質＞EP-SPM＞后雜質;堿性強弱：前雜質＞EP-SPM＞后雜質，所以，pK前雜質＞pKEPSPM＞pK后雜質。

2.3 去除有關物質的工藝改進

2.3.1 去除前有關物質的工藝研究 洗前雜質峰適宜的pH條件應盡量滿足使前有關物質最大程度進入水相，而主要組分盡可能多地留在有機相，所以pK前雜質＞pH ＞pKEPSPM。

當溫度在20～22℃范圍內，下相洗滌液pH一般在7.0時，即pK1左右，能較好滿足上述要求。如果pH降低，會使主要組分大量進入水相，收率降低;pH升高，前雜質不易進入水相，導致前有關物質不合格。

溫度升高，主要組分和有關物質在水相溶解度均降低，上述的洗滌條件不能使前有關物質充分進入水相，前有關物質會不合格。如果將pH調低，可以使前有關物質合格，但當pH＜pKEPSPM，也會使主要組分大量轉入水相，洗滌損失率增大，所以洗滌溫度應控制在25℃以下。

因此，適宜的緩沖液洗滌條件為：0.01M pH 2.5-3.0緩沖液，下相pH 7.0-7.4，溫度為20℃ ～25℃。

2.3.2 去除后有關物質的工藝研究 反萃的pH條件應滿足使主要組分大量進入水相，而后有關物質盡可能保留在有機相，所以pKEPSPM ＞pH＞pK后雜質。

當溫度在20℃ ～25℃時，反萃pH控制在5.5能較好滿足上述條件，使后雜質合格。如果pH降低，會使主要組分更多地進入水相，收率提高，但pH就可能小于pK后雜質，使后有關物質呈離子狀態，而大量進入反萃液，導致不合格。原工藝中反萃pH3.5是造成后雜質不合格的主要因素。

如果溫度升高，由于溶解度下降，總收率會降低，后有關物質也會降低，為了提高收率而將pH降低，有可能會使pH＜pK后雜質，使后雜質大量進入水相，導致后有關物質不合格。適宜的反萃條件為pH 5.5，溫度20℃ ～25℃。洗滌：緩沖液pH 2.5-3.0洗滌pH 7.0-7.4溫度25℃以下。反萃取：緩沖液pH 2.0溫度20℃ ～25℃下相平衡pH 5.5。結果見表1。

3 結論

洗滌：緩沖液pH 2.5-3.0，洗滌pH 7.0-7.4溫度25℃以下。反萃取：緩沖液pH 2.0溫度20℃ ～25℃下相平衡pH 5.5按此工藝洗滌和反萃取，前、后有關物質均符合歐洲藥典質量標準。溫度提高(大于25℃)在相同的反萃pH條件下，收率降低，但可適當降低反萃取pH來保證收率的提高，平均收率65%。

［1］朱峰，王爾康.螺旋霉素的在評價.中國抗生素雜志，1991，16(3)：231-236.

［2］陳長華，肇玉鵬.螺旋霉素培養基的改進.中國抗生素雜志，1994，19(4)：271-274.

463000 河南駐馬店天方藥業股份有限公司

表1 生產實驗EP-SPM的收率與質量

批號 洗滌 反萃取℃pH ℃ pH 收率% 總收率% 前有關物質 后有關物質%030940030 20 7.0 22 5.4 76.24 65.33 0.9 1.4 030940040 20 7.0 22 5.3 77.64 64.20 0.9 0.8 030940050 20 7.1 20 5.5 78.94 68.05 1.3 1.5 030940060 24 7.5 20 5.2 77.19 66.12 1.2 1.3 030940070 24 7.4 20 5.2 78.68 65.56 1.0 1.3 030104090 20 7.4 20 5.4 77.97 64.69 1.0 1.0 031040100 21 7.4 20 5.4 74.00 65.10 1.0 1.0 031040110 20 7.4 20 5.5 78.79 62.41 1.7 1.0