暹羅斗魚胚胎發(fā)育的觀察

張 希，黃 海，楊 寧

（三亞市南繁科學(xué)技術(shù)研究院，海南 三亞 572000）

暹羅斗魚（Betta splendens Regan），又稱泰國斗魚、五彩搏魚、彩雀等，隸屬鱸形目（Perciformes）、攀鱸亞目（Anabantoidei）、斗魚科（Belontiidae）[1]。其原產(chǎn)地在泰國、馬來西亞等國家。經(jīng)過人工選育后，暹羅斗魚的品種豐富、顏色漂亮，是達(dá)可參賽級別的觀賞魚魚種之一，極具市場前景。國內(nèi)外對于暹羅斗魚的研究較多，歐美學(xué)者對于暹羅斗魚的行為學(xué)進(jìn)行了詳細(xì)和深入的研究，原產(chǎn)地國家研究并掌握了暹羅斗魚的人工繁殖技術(shù)[1-2]。我國關(guān)于叉尾斗魚的胚胎和幼魚發(fā)育的研究已有報道[2]。目前，未見有關(guān)暹羅斗魚胚胎發(fā)育方面的研究報道。筆者進(jìn)行了暹羅斗魚的人工增養(yǎng)殖試驗，觀察胚胎發(fā)育各階段的特征，以期為國內(nèi)進(jìn)行暹羅斗魚人工增養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗在三亞市南繁科學(xué)技術(shù)研究院熱帶海洋生物技術(shù)實驗室進(jìn)行。試驗親魚為海南省三亞市福聯(lián)養(yǎng)殖公司在吉陽鎮(zhèn)人工繁殖的5月齡馬尾斗魚。親魚配對（雌魚全長7 cm，雄魚全長4 cm）后在水族箱中自行產(chǎn)卵[2]，受精卵取自泡沫巢中，在水族箱中孵化，水深15 cm。產(chǎn)卵時間為2011年4月9日，孵化期間最低水溫25.2℃，最高水溫27.0℃。

1.2 試驗設(shè)備

顯微鏡 Nikon eclifse 50i，相機(jī) Canon A720，體視顯微鏡specturum technologies Inc，捕撈工具。

1.3 試驗方法

暹羅斗魚產(chǎn)卵之前，先將雄魚放入準(zhǔn)備好的繁殖缸，再把雌魚裝入塑料杯，一并放入繁殖缸內(nèi)，雄魚泡巢筑好后，將雌魚放出[3]。雌雄魚發(fā)生繁殖行為，即時觀察到受精卵的時間記錄為產(chǎn)卵時間，實時測量水溫，在胚胎發(fā)育早期的受精卵至卵裂期10min在顯微鏡下觀察記錄1次，囊胚期至原腸胚期30min在顯微鏡下觀察記錄1次，每次記錄10枚胚胎，胚體期至孵化期每1h觀察記錄1次，每次記錄20枚胚胎[4-5]。胚胎發(fā)育各時期時間點的確認(rèn)以鏡檢約50%的胚胎出現(xiàn)相應(yīng)分期特征為標(biāo)準(zhǔn)，各發(fā)育時期的劃分參考莫根永等[6]。觀察胚胎發(fā)育過程中進(jìn)行顯微攝影并描繪其形態(tài)特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)卵行為觀察

2011年4月8日下午將土耳其綠色的雄魚放入水族箱中（T=25.5℃），將雌魚放入，發(fā)情的雌魚見到雄魚會出現(xiàn)豎狀的深色“婚姻紋”，雄魚則開始建筑泡巢；4月9日8∶10泡巢建好，將燒杯中的雌魚放出，雄魚便開始向雌魚展示鰭只，之后追咬雌魚，雌魚主動游到泡巢下擺動身體，雄魚此時圍繞雌魚游動，9∶47在泡巢下用身體呈“U”型纏繞住雌魚的身體，生殖孔相對，同時排放出卵子和精子，之后受精卵下沉。排卵結(jié)束，雄魚將下沉的卵銜入泡巢，而雌魚仍呈現(xiàn)出暫時性昏迷狀態(tài)。當(dāng)親魚把卵安置好后，9∶50進(jìn)行第二次交配產(chǎn)卵，經(jīng)19次交配產(chǎn)卵后繁殖結(jié)束，平均每次10～15粒受精卵，共252粒，受精率85.6%。

2.2 胚胎發(fā)育的特征和時間的劃分

2.2.1 受精卵的形態(tài)特征 受精卵呈不透明的乳白色，圓形光滑，外被透明卵膜，卵膜吸水膨脹后直徑為1.000～1.202mm，平均卵徑1.116mm；卵黃直徑0.762～0.8915mm；受精卵為沉性卵（見圖1-1）。在水溫25.3℃下，28min后受精卵的細(xì)胞質(zhì)向動物極集中，隆起形成胚盤，此階段為胚盤形成期。

圖1 暹羅斗魚的胚胎發(fā)育

2.2.2 卵裂期 暹羅斗魚受精后1 h 2min開始第一次卵裂，將胚盤分割成均等的兩個細(xì)胞，第二次卵裂后細(xì)胞數(shù)目為4（見圖1-2、圖1-3）；受精后1 h 38min，出現(xiàn)第三次卵裂，產(chǎn)生的8細(xì)胞兩排分布；胚盤細(xì)胞經(jīng)過數(shù)次分裂后，約在受精2 h 43min，進(jìn)入多細(xì)胞期，細(xì)胞數(shù)目成倍遞增，卵裂細(xì)胞的排列變得不規(guī)則，且細(xì)胞大小不一（見圖1-5）。受精后約4 h 13min，由于胚盤細(xì)胞的持續(xù)分裂，細(xì)胞數(shù)量不斷增多，體積進(jìn)一步變小，似桑葚球狀，此時進(jìn)入桑椹期（見圖1-6）。

2.2.3 囊胚期 胚盤細(xì)胞繼續(xù)分裂，細(xì)胞數(shù)目不斷增加，細(xì)胞不斷堆積，胚盤與卵黃之間形成囊胚腔，受精后5 h 15min，隆起的囊胚在卵黃上呈高帽狀，此時進(jìn)入高囊胚期，又稱初期囊胚（見圖1-7）；之后囊胚高度逐漸變低，細(xì)胞進(jìn)一步增加、變小，進(jìn)入囊胚中期；受精后6 h 53min。囊胚變得更加扁平，此時進(jìn)入低囊胚期，又稱囊胚晚期（見圖1-8）。

2.2.4 原腸期 囊胚邊緣細(xì)胞開始增多，并沿卵黃外圍向植物極方向移動，即胚盤細(xì)胞延伸和下包，胚胎進(jìn)入原腸期。原腸期分為原腸早期、原腸中期、原腸晚期。受精后8 h 45min，胚層細(xì)胞緩慢下包約1/2，即進(jìn)入原腸早期（見圖1-9）；受精后10 h 14min，胚層下包卵黃囊約2/3，進(jìn)入原腸中期（見圖1-10）；受精后12 h 24min，胚盾開始顯現(xiàn)，胚層下包卵黃囊約3/4，進(jìn)入原腸晚期（見圖1-11）。

2.2.5 神經(jīng)胚期 水溫26.4℃，受精后17 h 34min，胚層下包4/5，收縮成胚孔，胚體背部增厚并形成一條神經(jīng)索，標(biāo)志著進(jìn)入神經(jīng)胚期，此時腦的原基初現(xiàn)（見圖1-12）；受精后17 h 34min，胚層全部包圍卵黃囊，稱之為胚孔封閉期（見圖1-13）。

2.2.6 器官形成期 此時胚體的主要器官開始逐漸顯現(xiàn)，在25.8℃，受精后21 h 43min，胚胎頭部明顯增大，兩側(cè)出現(xiàn)一對較大的視泡，即視泡形成期（見圖1-14），此時可以分辨頭尾；在受精后23 h 43min，胚胎擁有5～6對肌節(jié)，尾末端伸長并游離于卵黃囊，即進(jìn)入尾芽期（見圖1-15）；受精后27 h 19min，進(jìn)入晶體形成期，此時的視泡膨大，視泡中央的晶體輪廓清晰，胚體肌節(jié)8～10對（見圖1-16）；胚體繼續(xù)發(fā)育，頭部變大，尾芽伸長，晶狀體更加清晰，體節(jié)增多，受精后30 h 54min，胚體出現(xiàn)間接性扭動，此時為肌肉效應(yīng)期（見圖1-17）。

2.2.7 心跳期 胚體尾芽繼續(xù)伸長，心臟開始輕微跳動，受精后34 h 37min，心臟節(jié)律性跳動且跳動加快，可見血液循環(huán)流動，即心跳期（見圖1-18）。

2.2.8 孵化期 隨著胚體的發(fā)育，受精后36 h 54min，心跳加快，胚體扭動劇烈，不斷強(qiáng)烈的擺尾，由于尾不斷拍擊卵膜，使得卵膜變形且變薄，繼而魚苗由頭至尾逐漸脫離卵膜，剛孵出的仔魚全身透明，帶橢圓形卵黃囊，卵黃囊上的星狀色素清晰可見（見圖 1-19、1-20）。

表1是暹羅斗魚胚胎發(fā)育的分期及各時期的主要形態(tài)特征。

表1 暹羅斗魚胚胎發(fā)育分期

3 討論

暹羅斗魚的胚胎發(fā)育經(jīng)過了卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、器官形成期、心跳期和孵化期共7個階段，與其他魚類胚胎發(fā)育的特點是一致的，且符合硬骨魚類胚胎發(fā)育的一般規(guī)律[7-9]。相較于同科的叉尾斗魚和圓尾斗魚，受精卵的特性和大小存在差異，暹羅斗魚的受精卵呈不透明的乳白色，沉性卵，明顯區(qū)別于叉尾斗魚和圓尾斗魚的透明浮性受精卵。暹羅斗魚的卵徑為1.000～1.202mm，叉尾斗魚的卵徑為 0.611 2～0.688 0mm[10]，圓尾斗魚為1.142～1.237mm[11]，對比三組數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn)，叉尾斗魚的受精卵卵徑略小于暹羅斗魚和圓尾斗魚。胚胎發(fā)育過程中，眼囊期的圓尾斗魚在胚體的卵黃囊上出現(xiàn)了色素，距受精時間為22 h 15min，而同科的叉尾斗魚在出膜后12 h小時才出現(xiàn)色素[10]，本研究結(jié)果中，暹羅斗魚在受精后21 h 43min見星狀色素體。從胚胎發(fā)育的整個過程看，親緣關(guān)系較近的這三種斗魚的發(fā)育過程存在極大的相似性，且形態(tài)變化基本相同。

一般而言，同種魚類的受精卵在不同溫度條件下，胚胎發(fā)育所需的時間存在一定的差異，通常溫度越高孵化時間越短[12-15]。本研究中暹羅斗魚的受精卵在25.2℃～27.0℃的水溫條件下，受精卵發(fā)育至出膜歷時36 h 54min，此時，已有超過50%的仔魚出膜[16]，其孵化時間與斗魚屬的其他種類比較接近，如周潔等[11]報道，同屬的圓尾斗魚（Macropodus chinennsis），在水溫 21.5℃～23.5℃的條件下，從受精卵到孵化出膜需要42 h 30min；鄭文彪[10]研究叉尾斗魚（Macropodus opcrcularis）的胚胎發(fā)育時，發(fā)現(xiàn)在水溫24.5-25.5℃的條件下，從受精到孵化歷經(jīng)38 h，可見孵化溫度和胚胎發(fā)育所需要的時間可能存在一定的聯(lián)系，但還需進(jìn)一步研究和驗證。

目前，暹羅斗魚的人工繁殖基本解決，但是產(chǎn)卵量和孵化率的高低受親魚和人工繁殖條件的影響較大[17-18]，故還需深入的研究，加強(qiáng)親魚的魚種培育，改善育苗的人工環(huán)境，提高受精卵的質(zhì)量和穩(wěn)定性，擴(kuò)大暹羅斗魚的苗種規(guī)模，推進(jìn)暹羅斗魚在中國的發(fā)展。

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