大蒜根尖的細(xì)胞分裂裝片的制作技巧

【摘要】裝片制作能提高學(xué)生的探索興趣和認(rèn)識世界的能力，本文就大蒜根尖的培養(yǎng)、取材時機(jī)和固定保存、解離與漂洗、染色、壓片等的一些技巧做了些經(jīng)驗上的總結(jié)，希望能給大家提供參考。

【關(guān)鍵詞】培養(yǎng)溫度；取材時機(jī)；分裂相；解離；染色

一、制作大蒜根尖細(xì)胞分裂裝片的意義

1.實驗在科學(xué)教學(xué)中的重要作用

實驗是科學(xué)教學(xué)的重要手段，廣泛應(yīng)用于物理、化學(xué)、生物等學(xué)科教學(xué)中。它在激發(fā)學(xué)生探索興趣、培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新意識、創(chuàng)新精神等方面有重要作用，是科學(xué)研究啟蒙教育的重要途徑。要開展實驗，教師必須提高自身的實驗?zāi)芰Γ诮虒W(xué)活動中通過對學(xué)生的實驗指導(dǎo)，培養(yǎng)學(xué)生的探究興趣，逐步形成創(chuàng)新意識和創(chuàng)新能力。因此，教師應(yīng)該具備一些基本的實驗技能。

2.裝片制作能提高學(xué)生的探索興趣和認(rèn)識世界的能力

初中科學(xué)教科書中，要求學(xué)生會做簡單的裝片。如：口腔上皮細(xì)胞裝片、洋蔥表皮細(xì)胞裝片等。對于有愛好的同學(xué)，我們可以給以專門的指導(dǎo)。細(xì)胞分裂裝片的制作是老師需要掌握的，我們可以把這個實驗教給興趣小組，提高他們的學(xué)習(xí)興趣和專業(yè)技能。

二、制作過程

由于大蒜根尖分生區(qū)細(xì)胞分裂活躍，所以把大蒜根尖作為材料來觀察細(xì)胞分裂，對我們學(xué)習(xí)和認(rèn)識細(xì)胞分裂很有幫助。現(xiàn)在我把大蒜根尖細(xì)胞分裂裝片的制作的經(jīng)驗及基本過程介紹如下

（一）大蒜根尖的培養(yǎng)

1.實驗材料：大蒜比洋蔥實驗效果更好

選用洋蔥和大蒜作為試驗材料，在18 ℃左右的恒溫箱中培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)洋蔥非常容易壞，且生根量極少。大蒜幾乎不壞，且一個蒜瓣的生根量就相當(dāng)于一個洋蔥的生根量，因大蒜的蒜瓣之間有空隙，不易缺氧，避免因缺氧造成的腐爛現(xiàn)象。另外大蒜的染色體數(shù)為16，在觀察染色體時候也比較方便。

2．培養(yǎng)溫度：2 ℃左右效果最好

對大蒜的根尖分別作-2 ℃、0 ℃、2 ℃、4 ℃、6℃、8℃的24h 低溫根尖培養(yǎng)。在低溫處理中，- 2 ℃或0 ℃處理后，鏡檢時發(fā)現(xiàn)幾乎無細(xì)胞分裂現(xiàn)象， 2 ℃時，只有少數(shù)細(xì)胞處于分裂期，且分裂時期不明顯，4 ℃時，不僅積累了很多前、中、后、末期的細(xì)胞，而且染色體比較粗短，典型的分裂相大增，在分生區(qū)內(nèi)，平均每個視野中少則能觀察到3～4 個分裂相，多則可見十幾個分裂相，6 ℃時分裂期細(xì)胞數(shù)目減少，8℃時分裂期細(xì)胞數(shù)目比6 ℃時更少。

3.培養(yǎng)時間：根尖長到0.5-1cm后取材較好

用大蒜作為實驗材料，等根尖長到0.5-1cm后就可剪取0.3cm進(jìn)行實驗，這樣就能大大縮短培養(yǎng)時間，并且實驗效果也好，因為幼根的根尖細(xì)胞分裂更加旺盛，并且顯微鏡下也容易區(qū)分。如果按照一般實驗時間，不僅培養(yǎng)時間長，而且根尖的剪取長度也很難把握。

（二）取材時機(jī)和固定保存

取材時機(jī)最好是中午11：00 點～14： 00 點時取材較好

本實驗對材料的要求是最好用分裂相多的材料作為實驗材料。通過對早6：00 點～晚22：00 點之間的不同時段做對比實驗得出：在23～28 ℃溫度下，中午11：00 點～14：00 點時取材最好，觀察到的分裂相最多，其它時間段相對較少。

由于不能保證在必要時根尖正處于分裂相最多的時期，這就需要把處在細(xì)胞分裂旺盛期的根尖隨時取下來，進(jìn)行固定處理。具體有以下兩種操作方法：

把剪取的根尖放入卡諾固定液（純酒精：氯仿：冰醋酸=12：6：2）中固定1h，然后把根尖保存在70%酒精中。

（三）解離與漂洗

將固定以后的根轉(zhuǎn)入盛有15%HCl溶液的試管中，再將試管放入盛有60°C-65°C的水溶液中解離約3min。

解離后的根尖，必須漂洗干凈，以便能夠著色。而一般的漂洗時間為10min。為縮短時間，可以將解離后的根尖放入盛有清水的小燒杯中，用玻璃棒不斷攪拌，使根尖上附著的鹽酸加速溶解，約2-3分鐘后，再將根尖放入另一盛有清水的水洗杯中，漂洗一下即可。

（四）染色

在實驗中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量濃度為0. 01g/ mL 的龍膽紫染液易把根尖都染成深紫色，較難觀察清楚有絲分裂各時期和染色體行為變化，因此我們將質(zhì)量濃度為0. 01g/ mL的龍膽紫染液進(jìn)行稀釋。因為醋酸能加強(qiáng)細(xì)胞核染色體的選擇著色，所以我們選擇用冰醋酸進(jìn)行稀釋，通過對幾種不同濃度的稀釋液(50%冰醋酸、20%、10 %冰醋酸、4 %冰醋酸)進(jìn)行不同濃度的稀釋比較，最后得出：用10 %的冰醋酸以3 :1的比例稀釋后染色效果最好。

（五）壓片

為了減少細(xì)胞重疊，保證壓片的質(zhì)量，對于較粗的根尖不宜直接壓片，最好是把較粗的根尖縱切成2～3 片再壓片。可以用雙面刀片在蘿卜上割一個根尖長短相當(dāng)?shù)目p隙，然后用鑷子把根尖放入其中，再用左手壓緊，右手用刀片把根尖縱切成2～3 片，經(jīng)縱切后的根尖壓片效果非常理想。不但易于觀察，同時也能縮短時間，提高實驗效率。（如果在解離之前縱切還能進(jìn)一步縮短解離、漂洗、染色、再漂洗的時間，從而進(jìn)一步提高實驗效率）。

取染好的洋蔥根尖，放在載玻片上，滴一滴清水蓋上蓋玻片，用吸水紙包上整個裝片用拇指輕壓，使根尖細(xì)胞分散充分。這樣不但能將壓片過程中滲出來的水吸去，而且更加不容易使根尖和蓋玻片移動。

三、總結(jié)

裝片制作的技巧在實際的反復(fù)操作中可以不斷的改進(jìn)，但是我們的目的并不在于此，而在于掌握一種認(rèn)識世界的方法。所以我覺得裝片做好后，我們的探索才剛剛開始。

（作者單位：浙江樂清市芙蓉鎮(zhèn)中學(xué)）