采用高效液相色譜法同時測定復方丹參滴丸中的多成分含量

摘 要 目的：采用高效液相色譜法（HPLC法）同時測定復方丹參滴丸中的7種成分。方法：應用Diamonsil C18色譜柱，以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，在柱溫35 ℃下使用205、270和285 nm三波長同時檢測。結果：7種成分的峰面積與濃度的線性關系良好，平均回收率在94.3%～101.3%間，加樣回收率符合要求。結論：該方法簡單、準確可靠且重現性好，可用于該制劑的質量控制。

關鍵詞 復方丹參滴丸 HPLC法 含量測定

中圖分類號：R284; R927.2 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533(2011)08-0413-03

Quantitative determination of multi-components in Compound Danshen Dripping Pill by HPLC method

Yao Lin1*，Cheng Wei-ming2**

（1. Shanghai Food and Drug Packaging Material Control Center，Shanghai， 201203；

2. Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Hangzhou，310004）

Abstract Objective: To establish an HPLC method for the simultaneous determination of 7 components in Compound Danshen Dripping Pill. Method: Diamonsil C18 was used as the solid phase， and acetonitrile-methanol-0.1% (v/v) phosphoric acid as the mobile phase for the gradient elution. The column temperature was 35℃，and the detective wavelengths were set as 205， 270 and 285 nm. Results: the linearities of the 7 components were all good in the range of the test concentration，and the average recoveries were between 94.3% and 101.3%. Conclusion: the method was simple，reliable and reproducible，which could be used as quality control for the determination of Compound Danshen Dripping Pill.

Key words Compound Danshen Dripping Pill；HPLC；content determination

中藥成分的含量測定是中藥現代化研究的重要組成部分之一，而中藥復方多成分含量的同時測定研究還可為中藥復方的質量控制提供必要的基礎和方法。復方丹參滴丸系根據1995年版中國藥典一部中復方丹參片的處方、經在現代高科技條件下提取丹參和三七的有效成分、再加入適量的冰片制成的新型純中藥制劑，具有活血化瘀、理氣止痛的功效，臨床上廣泛用于治療胸中憋悶、心絞痛等心血管疾病。與傳統的片劑相比，該滴丸劑具有起效快、用量低、不良反應小等優點，現已被定為全國中醫醫院急診必備成藥[1]。有關研究表明，丹參的活性成分主要為脂溶性的二萜醌類和水溶性的丹參酚酸類物質：脂溶性的二萜醌類物質具有擴張冠狀動脈、提高冠脈血流、保護心肌及廣譜抑菌作用；丹參酚酸類物質則具有抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化和保護心臟微血管內皮細胞等作用[2，3]。三七的主要活性成分是皂苷類物質，后者具有抗血栓形成、擴張血管和保護心肌等作用[4]。因此，對丹參和三七中的多種活性成分進行同時含量測定才可全面控制復方丹參滴丸的質量[5～7]。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1200系列高效液相色譜儀（美國Agilent有限公司），含G1379B自動脫氣機、G1376A四元高效液相泵和G1365B多波長檢測器。

1.2 試藥

原兒茶醛、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA、三七皂苷R1以及人參皂苷Rg1和Rb1（均由中國藥品生物制品檢定所提供）；復方丹參滴丸（購自天津天士力聯合制藥有限公司，批號100721、100722和100723）；乙腈、甲醇（均為色譜純，購自Merck公司）；超純水（由實驗室Milli Q自制，美國Millipore有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特公司）。流動相A為乙腈、B為甲醇、C為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫：0～10 min，3% A，6% B；11～15 min，3%～7% A，6%～12% B；16～30 min，7%～9% A，12%～15% B；31～50 min，9%～32% A，15%～25% B；51～70 min，32%～35% A，25%～50% B。柱溫35 ℃；檢測波長為205、270和285 nm。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備

精密稱定各對照品適量，以75%甲醇溶液定容，制成對照品儲備液。精密量取各儲備液適量，置25 mL容量瓶中，以含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）定容即得（各對照品最終濃度分別為：丹參素，11.50 μg/mL；原兒茶醛，1.561 μg/mL；三七皂苷R1，12.27 μg/mL；人參皂苷Rg1，11.01 μg/mL；丹酚酸B，9.770 μg/mL；人參皂苷Rb1，25.61 μg/mL；丹參酮IIA，0.017 01 μg/mL）。

2.2.2 供試品溶液制備

取復方丹參滴丸50丸，研細后精密稱取適量（約合10丸），置50 mL容量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲波處理30 min，放冷至室溫，以甲醇定容。12 000 r/min離心機離心處理10 min后，取上清液即得。

2.3 線性范圍

按照上述色譜條件，以自動進樣器分別進樣對照品溶液1、2、4、8、25和50 μL，記錄色譜圖（圖1）。分別以各對照品的含量為橫坐標、相應的峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程（表1）。

2.4 精密度、重現性和穩定性實驗

按照上述色譜條件，取供試品溶液連續進樣6針，以峰面積計算7個成分日內精密度和重現性。連續分析7 d，以峰面積計算7個成分的日間精密度；分別于0、1、2、4、8、12和24 h進行測定，計算7個成分的穩定性（表2）。

2.5 回收率實驗

準確稱取已知含量的復方丹參滴丸6份，分別加入7個對照品適量，按照上述色譜條件分析，得7個成分的加樣回收率（表3）。

2.6 樣品測定

取3個批號的復方丹參滴丸，按照上述色譜條件，進樣20 μL分析，結果如下（表4）。

3 討論

丹參素和原兒茶醛的結構中都含有鄰二酚羥基，易被氧化而造成測定含量偏低，查閱文獻[8， 9]發現不同濃度的甲醇-水溶液也會使這兩者的測定含量有所降低。作者通過實驗發現，加入適量的酸能抑制丹參素和原兒茶醛氧化，故在對照品溶液配制時采用了含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）。

復方丹參滴丸為薄膜包衣，單純利用甲醇超聲提取時，甲醇難以進入滴丸。所以，應事先對滴丸進行研磨，以保證甲醇能將其中的目標成分充分提取。

本文測定的7個活性成分，由于各自的結構特點不同，故特征紫外吸收波長有一定的區別，如使用單一波長測定將會造成較大的誤差。因此，本文采用了多波長檢測器，能同時進行多個波長的含量測定。該方法簡單，精密度、重現性和穩定性較好，且同時測定了復方丹參滴丸中的多個活性成分，適于全面評價復方丹參滴丸的質量。

參考文獻

[1]吳凱. 國家中醫藥管理局公布1997年全國中醫醫院急診必備中成藥目錄［J］．中國中醫藥信息雜志，1997，4(12)： 5-6.

[2]杜冠華，張均田. 丹參現代研究概況與進展（續一）［J］．醫藥導報，2004，23(6)： 355-360.

[3]杜冠華，張均田. 丹參現代研究概況與進展（續前）［J］． 醫藥導報，2004，23(7)： 435-440.

[4]馬珂，湯金土. 三七皂甙的實驗研究進展［J］．浙江中西醫結合雜志，2002，12(3)： 197-199.

[5]Zhang H，Yu C，Jia JY，et al. Contents of four active components in different commercial crude drugs and preparations of Danshen (Salvia miltiorrhiza) ［J］．Acta Pharmacologica Sinica，2002，23(12)： 110-115.

[6]魏紅，王寧，孫兆華. 復方丹參片中丹參酮IIA的膠束RP-HPLC法測定［J］．中國醫藥工業雜志，2007，38(6)： 438-439.

[7]紀恒勝，徐慧霞，韓建香. 丹參提取液丹參素和丹參酮IIA的HPLC法測定［J］．齊魯醫學雜志，2008，7(8)： 7-8.

[8]吳遒峰，閻希軍. 復方丹參滴丸的質量研究［J］．中國藥房，1992，3(6)： 3-4.

[9]袁俊賢，朱立中. 丹參片中丹參素和原兒茶醛的HPLC測定法［J］．中成藥，1996，18(1): 15-17.

（收稿日期：2011-06-07）