長白山蜂膠的GC/MS分析

摘要：利用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（ＧＣ／ＭＳ）對長白山蜂膠超聲波提取物的主要化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定。ＧＣ／ＭＳ共檢出長白山蜂膠化學(xué)成分４２種，包括烷烴、烯烴、醇類、酚類、醛類、酮類、酯類、有機(jī)酸等，其中包括３種黃酮類物質(zhì)，分別為５，７－二羥基二氫黃酮、５，７－二羥基黃酮、７－甲氧基－４＇－羥基二氫黃酮，黃酮總含量為６．２％。結(jié)果表明，長白山蜂膠的有機(jī)組分豐富，其中部分組分具有生物活性。

關(guān)鍵詞：蜂膠；有機(jī)組合；ＧＣ/ＭＳ

中圖分類號：Ｏ６５７．６３文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）22－4716-03

ＧＣ／ＭＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｃｈａｎｇｂａｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｐｒｏｐｏｌｉｓ

ＺＨＥＮＧ Ｙｏｎｇ－ｃｈｕｎａ，ＸＵＥ Ｘｉａｏ－ｌｉｂ，ＬＩ Ｌｉｎａ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｌｅｉａ

（ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ｂ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｌｉｎ １３２１０１，Ｊｉｌｉｎ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｃｈａｎｇｂａｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｐｒｏｐｏｌｉｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＧＣ／ＭＳ． ４２ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ， ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｌｕｄｅ ａｌｋａｎｅｓ， ａｌｋｅｎｅｓ， ａｌｃｏｈｏｌｓ， ｐｈｅｎｏｌｓ， ａｌｄｅｈｙｄｅｓ， ｋｅｔｏｎｅｓ， ｅｓｔｅｒｓ， ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ． ３ ｆｌａｖａｎｏｎｅｓ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｒｅａｃｈｅｄ ６．２％ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ５， ７－Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ； ５，７－Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ； ７－ｍｅｔｈｏｘｙ－４＇－Ｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｒｉｃｈ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｈａｎｇｂａｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｐｒｏｐｏｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｒｏｐｏｌｉｓ； orangic components； ＧＣ/ＭＳ

蜂膠（Ｐｒｏｐｏｌｉｓ）一詞來自于希臘語，是工蜂從植物芽孢或樹干上采集的樹脂等分泌物，混合其上腭腺和蠟腺的分泌物加工而成的一種具有芳香氣味的膠粘性物質(zhì)，是蜜蜂用來縮小蜂巢口、防止外來入侵的一種物質(zhì)［１］。蜂膠常溫下為固體，多呈黃褐、棕褐和灰褐等顏色，具有令人喜愛的特殊芳香味，食之略帶辛辣。溫度低于１５ ℃時變硬、變脆、易粉碎。蜂膠的化學(xué)成分十分復(fù)雜，含有微量的氨基酸和維生素、豐富的礦物質(zhì)、微量元素、有機(jī)酸和萜類化合物，同時還含有７０種以上的黃酮類化合物，如：蘆丁、槲皮素、高良姜精、苛因、楊梅素、芹菜素、松屬素等［２］，正是這些豐富而獨(dú)特的活性物質(zhì)，使得蜂膠具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種醫(yī)療保健功能，常被制成膜、片、栓、膠囊、口服液等應(yīng)用于保健品、食品等領(lǐng)域［３］。蜂膠中黃酮類物質(zhì)的含量已成為判定蜂膠質(zhì)量等級的重要參數(shù)［４－６］。目前，蜂膠中有效成分的提取多采用醇提法，而微波、超聲波、超臨界ＣＯ２流體萃取等一些輔助設(shè)備的應(yīng)用顯著縮短了提取時間，提高了提取效率［７，８］。氣相色譜－質(zhì)譜法（Ｇａｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＧＣ／ＭＳ），因其分離效果好、檢測效率高，可定性、定量分析的優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于低沸點(diǎn)組分的分析。實(shí)驗(yàn)以長白山原蜂膠為原料，經(jīng)過乙醇－超聲波萃取，并采用ＧＣ／ＭＳ對萃取液的組分進(jìn)行了初步分析，為闡明長白山蜂膠的藥用功效提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

１材料與方法

１．１材料

原蜂膠，２０１０年８月購于吉林省養(yǎng)蜂科學(xué)研究所下屬蜂產(chǎn)品專賣店，膠源主要為花期在６～７月間的長白山野生植物（如：樺樹等）。

１．２儀器

質(zhì)譜聯(lián)用儀：Ａｕｔｏ Ｓｙｓｔｅｍ ＸＬ－Ｔｕｒｂｏ Ｍａｓｓ及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國ＰＥ公司）；ＫＱ３２００ＤＢ超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ＷＫ９０小型藥物粉碎機(jī)（山東省青州市精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司）；ＡＬ２０４電子天平［梅特勒－托利多（中國）］；乙醇、氯仿等均為分析純。

１．３方法

１．３．１提取方法將蜂膠置于－１０ ℃冷凍１～２ ｈ，用小型藥物粉碎機(jī)粉碎后，準(zhǔn)確稱量１．０００ ０ g蜂膠樣品，用無水乙醇定溶于１００ ｍＬ容量瓶中，搖勻，超聲提取２０ ｍｉｎ后，用乙醇定容至１００ ｍＬ，靜置。取上清液２ ｍＬ，真空濃縮至干，并用１ ｍＬ氯仿溶解殘留物，過０．２２ μｍ濾膜，備用。

１．３．２色譜條件ＨＰ－５ＭＳ 石英毛細(xì)管柱（３０ ｍ×０．２５ ｍｍ Ｉ．Ｄ．，膜厚０．２５ μｍ）；載氣為高純氦（≥ ９９．９９９％），流速１ ｍＬ／ｍｉｎ；進(jìn)樣口溫度２６０ ℃；分流進(jìn)樣，分流比為２０∶１；采用程序升溫，初始溫度８０ ℃，保持３ ｍｉｎ，以８ ℃／ｍｉｎ的速度升至２６０ ℃，保持３０ ｍｉｎ。

１．３．３質(zhì)譜條件ＥＩ離子源，離子源溫度２３０ ℃；傳輸線溫度２９０ ℃，倍增器電壓６００ Ｖ；電子能量７０ ｅＶ，質(zhì)量掃描范圍３３～５００ ａｍｕ，溶劑延遲３ ｍｉｎ。

２結(jié)果與分析

ＧＣ/ＭＳ定性主要是采用未知物譜圖與已知的ＥＩ標(biāo)準(zhǔn)譜圖相比較獲得的匹配度來表征未知物和已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的譜圖相似度。在上述條件下，蜂膠的組分與ＥＩ標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫以及文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析［９－１１］，共鑒定出化學(xué)成分４２種，包括烷烴、烯烴、醇類、酚類、醛類、酮類、酯類、有機(jī)酸等成分，其總離子流圖見圖１。采用化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)按峰面積歸一法進(jìn)行自動積分計算，求得蜂膠中各成分的相對含量。化學(xué)成分定性、定量分析見表１。

ＧＣ/ＭＳ共檢出化學(xué)成分４２種。其中，烷烴有１０種，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)（下同）占２３．８１％；烯烴有２種，占４．７６％；醇類有５種，占１１．９０％，酚類有１種，占２．３８％；醛類有４種，占９．５２％；酮類有３種，占７．１４％；酯類有４種，占９．５２％；有機(jī)酸有７種，占１６．６７％；另有４種，占９．５２％；未知成分有２種，占４．７６％。含量最高的成分為三十六烷，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)占２１．２％。鑒定獲得的黃酮類物質(zhì)有3種，分別是５，７－二羥基二氫黃酮、５，７－二羥基黃酮和７－甲氧基－４＇羥基二氫黃酮。

３小結(jié)與討論

以無水乙醇為溶劑，采用超聲波萃取法提取，可從蜂膠分析得到了４２個組分，包括３種黃酮類物質(zhì)，黃酮總含量約占６．２％。采用超聲萃取法可節(jié)省溶劑、縮短試驗(yàn)時間，具有方便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，但較之超臨界ＣＯ２流體萃取法，存在提取成分不精細(xì)、提取液有溶劑殘留的缺點(diǎn)，然而由于其設(shè)備便宜、方便，易于操作，因此應(yīng)用較為廣泛。蜂膠的化學(xué)成分非常復(fù)雜，加上長白山獨(dú)特的高山氣候孕育了獨(dú)具特色的高山花卉，這里原始的生長環(huán)境和涼冷的高山氣候，使其出產(chǎn)的蜂膠化學(xué)成分純凈、雜質(zhì)含量低，具有較好的開發(fā)前景。

參考文獻(xiàn)：

［１］ ＢＵＲＤＯＣＫ Ｇ Ａ． Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｂｅｅ ｐｒｏｐｏｌｉｓ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９８，３６（４）：３４７－３６３．

［２］ 胡福良，玄紅專． 蜂膠化學(xué)成分的最新研究進(jìn)展［Ｊ］． 養(yǎng)蜂科技，２００３（１）：２７－３０．

［３］ 胡福良，朱威，李雅晶，等． 蜂膠化學(xué)成分和生物學(xué)活性的多樣性研究［Ｊ］． 蜜蜂雜志， ２００６（１）：３－５．

［４］ ＧＢ／Ｔ ２０５７４－２００６，蜂膠中總黃酮含量的測定方法 分光光度比色法［Ｓ］．

［５］ ＧＢ／Ｔ １９４２７－２００３，蜂膠中蘆丁、楊梅酮、斛皮素、坎菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、高良姜素含量的測定方法 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測法和液相色譜－紫外檢測法［Ｓ］．

［６］ ＧＢ／Ｔ２４２８３－２００９， 蜂膠［Ｓ］．

［７］ 薛曉麗． 提取工藝對蜂膠總黃酮含量的影響［Ｊ］． 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報，２００７，１６（３）：３－４．

［８］ 谷玉洪，羅濛，徐飛，等． 超臨界ＣＯ２提取蜂膠中總黃酮的工藝研究［Ｊ］． 中草藥，２００６，３７（３）：３８０－３８２．

［９］ 余蘭平，盛文勝． 氣相色譜－質(zhì)譜法分析蜂膠和楊樹膠的化學(xué)成分［Ｊ］． 蜜蜂雜志，２００６，２６（６）：３－６

［１０］ 崔慶新，劉國富． 蜂膠乙醇提取物化學(xué)成分的ＧＣ／ＭＳ研究［Ｊ］． 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，２００１（６）：３６－３８．

［１１］ 馬海樂，駱琳，陸道禮，等． 蜂膠超臨界ＣＯ２萃取物的ＧＣ指紋圖譜研究［Ｊ］． 養(yǎng)蜂科技，２００５，（１）：３６－３８．