不同產地狹葉柴胡糖類物質含量的比較分析

摘要：分別采用３，５－二硝基水楊酸法和蒽酮－硫酸比色法比較了７個不同產地的狹葉柴胡（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ scorzonerifolium Willd）中還原糖、多糖和總糖的含量。結果表明，同種柴胡由于受不同產地或不同的生長環境的影響，其糖類物質含量差別較大，河北產地的柴胡糖類物質含量最高，其次為黑龍江明水野生柴胡。采用上述分析方法簡便、快速、可靠，為建立柴胡的多指標質量評價體系提供了科學參考。

關鍵詞：狹葉柴胡（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ scorzonerifolium）；總糖；還原糖；多糖；產地

中圖分類號：Ｏ６５７．３２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）22－4707-03

Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Contents on Ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ scorzonerifolium Willd ｆｒｏｍ

Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｐｌａｃｅｓ

ＷＡＮＧ Ｂｉｎa，ＺＨＡＮＧ Ｔｅｎｇ－ｘｉａｏb，ＬＩＵ Ｌｉ－ｊｕｎa，ＭＡ Ｙａｎ－ｑｉｕa，ＣＨＩ Ｙｕｎ－ｃｈａｏa，ＦＡＮ Ｔｉｅ－ｂｏa

（ａ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Pｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Cｈｅｍｉｓｔｒｙ Eｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ； ｂ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Bｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Fｏｏｄ Eｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｕｉｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，

Ｓｕｉｈｕａ １５２０６１， Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔs ｏｆ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ， ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ Ｗｉｌｌｄ， ｗｈｉｃｈ ｗere ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｓｅｖｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｐｌａｃｅｓ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎ， ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｙ ３，５-ｄｉｎｉｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ａｎｔｈｒｏｎｅ - ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｈａｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｈｉｇｈｅｓｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ Ｂ. scorzonerifolium ｆｒｏｍ Ｈｅｉｂｅｉ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ， ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｗａｓ ｆｏｒｍ Ｍｉｎｇｓｈｕｉ ｃｉｔｙ ｉｎ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎ． Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ a ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｂ. scorzonerifolium.

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂ. scorzonerifolium； ｔｏｔａｌ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｐｌａｃｅ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎ

柴胡（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ）屬于傘形科（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａａｅ）。我國已報道的柴胡有４２種、１７個變種及７個變型，作為藥用的有２５種、８個變種、３個變型，除海南省未見報道外，其余各省區均有分布。柴胡人工栽培一般需２～３年，生產周期長，不能滿足市場需求，使得柴胡屬植物除極少種類外，絕大部分在其分布地區都被當作中藥柴胡使用。

柴胡是我國的傳統中藥，《中國藥典》２０１０版規定傘形科多年生草本植物柴胡（北柴胡）Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ ｃｈｉｎｅｓｅ ＤＣ． 和狹葉柴胡（南柴胡）Ｂ. ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ Ｗｉｌｌｄ． 為中藥正品的原植物，其性味苦涼，可疏散退熱、口苦耳聾，頭痛目眩等。近代藥理研究表明柴胡具有鎮靜、鎮咳、抗炎、保肝利膽等藥理活性［１］，其調節免疫系統活性的作用［２］也是近期研究的熱點。除此之外，柴胡多糖還有抗炎、降血脂、增強免疫力、抗病毒、抗潰瘍作用，對肝炎、腎炎、類風濕等自身免疫疾病具有重要的臨床價值［３，４］。目前，對柴胡的研究還主要集中在成分分析、藥理、藥化以及臨床應用等方面。本研究分析了不同產地柴胡糖類物質含量差異，將其作為目標成分之一，旨在為柴胡的質量評價提供參考指標，為建立柴胡多指標質量評價體系提供科學依據。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１柴胡樣品樣品均為狹葉柴胡（Ｂ. ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ Ｗｉｌｌｄ）的根，樣品編號及產地見表１。

１．１．２試劑３，５－二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、鹽酸、酚酞、葡萄糖標準品、蒽酮、葡萄糖、濃硫酸和無水乙醇，均購于國藥集團化學試劑有限公司，純度為分析純。

１．１．３儀器７２３Ｓ分光光度計，山東高密彩虹分析儀器有限公司；ＫＱ－２５０ＤＢ型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；電子計數天平（５００ ｇ／０．００１ ｇ），金羊天平儀器廠；百靈ＬＡＩ１４型電子天平（１１０ ｇ／０．０００ １ ｇ），常熟市百靈天平儀器有限公司；１０１－２Ａ型數顯電熱鼓風干燥箱，上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司。

１．２方法

１．２．１不同產地柴胡總糖及還原糖含量分析

１）標準工作曲線的建立。精確稱取干燥恒重的無水葡萄糖１００ ｍｇ，加蒸餾水定容至１００ ｍＬ容量瓶中，配制成１ ｍｇ／ｍＬ的標準溶液。取９支試管（編號為０～８，２５ ｍｍ×２５０ ｍｍ），按表２加試劑，將各管混合均勻，沸水浴５ ｍｉｎ，取出后立即在冷水中冷卻，再向各管加入２１．５ ｍＬ蒸餾水，混勻，于５２０ ｎｍ處測定吸光值，并以葡萄糖ｍｇ數為橫坐標，以吸光值為縱坐標繪制標準曲線（重復測定３次，取平均值做標準曲線）。

２）總糖測定液的制備。精確稱取樣品５００ ｍｇ，放入錐形瓶中，加蒸餾水３０ ｍＬ，６ ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌ ２０ ｍＬ，于沸水浴中加熱水解４０ ｍｉｎ，取１滴水解液于白瓷板上，以碘－碘化鉀試劑檢查，水解液不呈藍色為水解完全，冷后加１滴酚酞指示劑，以６ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ中和并過濾收集于１００ ｍＬ容量瓶中，殘渣以蒸餾水沖洗，定容至刻度，混勻，備用。

３）還原糖測定液的制備。精確稱取樣品５００ ｍｇ于５０ ｍＬ錐形瓶中，加少量水調成糊狀，再加２０ｍＬ水，置８０ ℃水浴４０ ｍｉｎ，然后過濾于１００ ｍＬ容量瓶中，以蒸餾水沖洗殘渣，并定容至刻度，備用。

４）樣品的測定。精確量取制備的總糖測定液１ ｍＬ于試管中，依據標準曲線的制備方法進行各項操作，按表２所列試劑依次加入蒸餾水１．０ ｍＬ、３， ５－二硝基水楊酸１．５ ｍＬ，使終體積為３．５ ｍＬ。每個測試樣品溶液平行測定３次，取平均值代入公式計算。同樣方法測定并計算還原糖的含量。含量的計算公式如下：

百分含量＝｛［（Ｘ×１００）÷１ ０００］÷Ｍ｝×１００％

式中，Ｘ為根據標準曲線計算換算為葡萄糖的ｍｇ數；Ｍ為制備樣品測定液時稱取的柴胡干燥粉末的重量，單位為ｇ。

１．２．２不同產地柴胡中多糖含量分析

１） 標準工作曲線的建立。將葡萄糖于６０ ℃烘１ ｈ，再逐漸升溫至１０５ ℃干燥至恒重。精確稱取１０ ｍｇ，置１００ ｍＬ容量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度得葡萄糖標準液，取１６支試管，除空白試液外，其余５組均做３次平行試驗，按表２加入試劑，于６２０ ｎｍ處測定吸光度，繪制標準曲線（表３）。

２）可溶性多糖測定液的制備。精確稱取柴胡粉末（烘干至恒重）１．００ ｇ，每個樣品稱取３份（３次平行），分別置于１００ ｍＬ具塞三角瓶中，加８２％（體積分數，下同）乙醇 ４５ ｍＬ，浸泡３０ ｍｉｎ，超聲提取３０ｍｉｎ，靜置過濾，重復提取１次，過濾（保存濾渣），２次濾液合并并置于１００ ｍＬ容量瓶中，再用８２％乙醇定容至刻度，備用。

３）粗多糖測定液的制備。將提取后的濾渣蒸干，加２％（質量分數，下同）的鹽酸４５ ｍＬ，置沸水浴中提取1 ｈ，放冷，過濾后濾液置于１００ ｍＬ容量瓶中，濾渣重復提取１次，過濾，洗滌濾紙，合并濾液及洗滌液至容量瓶中，最后用２％鹽酸定容至刻度，備用。

４）樣品的測定。精確量取制備的可溶性多糖測定液０．６ ｍＬ于試管中，依據標準曲線的制備方法進行各項操作，按表3所列試劑依次加入蒸餾水０．４ ｍＬ、蒽酮－濃硫酸５．０ ｍＬ，使終體積為６．０ ｍＬ。每個測試樣品溶液平行３次測定，取平均值代入公式計算。同樣方法測定并計算粗多糖的含量。含量的計算公式與１．２．１步驟中使用的公式相同。最后根據下列公式求和：

多糖含量＝可溶性多糖含量＋粗多糖含量

１．３方法學考察

１．３．１精密度試驗精確稱取樣品，分別按１．２．１和１．２．２制備供試品溶液，按樣品測定項操作連續測總糖、多糖各５次，計算總糖、還原糖、多糖含量。

１．３．２加樣回收率試驗試驗以重復試驗所得的總糖、還原糖、多糖的平均含量為樣品含量，精確稱取樣品５份，加入等量對照品溶液，按樣品測定項操作。

１．３．３重復性試驗精確稱取樣品分別按１．２．１和１．２．２制備供試品溶液各５份，并計算含量。

１．３．４穩定性試驗精確稱取樣品分別按１．２．１和１．２．２制備供試品溶液，每隔１０ ｍｉｎ測定１次吸光度。

２結果與分析

２．１精密度及加樣回收率

精密度及回收率結果表明，本方法精密度良好，ＲＳＤ分別為１．７３％、０．９５％和１．５７％。加樣回收率分別為１００．９７％、９９．８１％和１０２．３％，ＲＳＤ分別為１．１２％、１．３９％和１．４７％。由此可知，３，５－二硝基水楊酸法測定柴胡中總糖和還原糖，蒽酮－硫酸比色法測定柴胡中的多糖，方法簡便、可靠、易行。

２．２重復性及穩定性

在６０ ｍｉｎ內，樣品吸光度均基本穩定，ＲＳＤ分別為０．９１％、１．２９％和１．４３％，重復性及穩定性結果表明，本方法重復性好且測定的數據穩定，為測評柴胡中糖類物質提供了一種穩定有效的測定方法。

２．３不同產地柴胡中總糖、還原糖和總多糖的含量

經回歸分析，得出柴胡糖類物質含量的回歸方程：總糖及還原糖含量為ｙ＝０．４１８ ８ｘ－０．０５１ ０，Ｒ２＝０．９９９ ３，ｎ＝８；多糖含量為：ｙ＝６．９２１ ３ ｘ＋０．００４ ７，Ｒ２＝０．９９９ ０，ｎ＝６。從圖１中可以看出不同產地的柴胡糖類物質含量差別較大，其中總糖含量最高的是４號河北產柴胡（３３．８４％），其次是２號黑龍江野生柴胡（２９．９１％），３號安徽產柴胡（２７．６１％），１號黑龍江人工栽培柴胡（２７．５５％），６號陜西產柴胡（２７．５３％），５號山東產柴胡（２６．０６％），７號內蒙古產柴胡（２３．１７％），多糖與還原糖含量的高低順序亦與總糖的順序相似。其中，３號和５號樣品的總糖含量雖然較高，但是多糖含量相對較低，不符合總糖含量與多糖含量趨向的一致性。１號和２號樣品分別為栽培品種和野生品種，雖然都為同一產地，但各種糖類物質均存在差別，總糖和多糖的含量野生品種比栽培品種高出約２％。

３ 討論

柴胡多糖的藥用價值逐漸被發掘和重視，但藥材產地對其含量的影響還沒有相關的研究報道，本研究首次對該領域展開了初步的研究，以３，５－二硝基水楊酸法測定不同產地柴胡中總糖與還原糖，蒽酮－硫酸比色法測定不同產地柴胡中總多糖的，并對其進行了全面的方法學考察，回收率和精密度結果表明兩種方法均排除了干擾因素，精密度良好，說明方法簡便、可靠、易行。

通過對７個不同產地來源的柴胡中糖類物質含量進行分析發現，同種柴胡不同產地或不同的生長環境，其糖類物質含量差別較大，因此中藥常常強調其道地性；同種產地野生品種和栽培品種總糖和多糖均存在一定的差異，如１號黑龍江栽培與２號黑龍江野生的差別。可見，生態因子對物種有效成分的積累存在一定影響，但從臨床應用的較多的多糖成分來看，兩者的含量差別不是很大，在資源缺乏的情況下，栽培品種可以替代野生品種。

中國藥典等僅以柴胡中皂苷成分作為質量評價標準，其結果難以全面保證整個藥材的質量，因為除柴胡皂苷等外，柴胡還含有多糖、黃酮和揮發油等活性成分。本研究介紹的糖類物質含量是評價其質量的一個重要指標，筆者認為應建立以柴胡皂苷、多糖及其他有效成分的多指標質量評價體系，以確保藥物的有效性和安全性。

參考文獻：

［１］ 謝東浩，蔡寶昌，安益強，等． 柴胡皂苷類化學成分及藥理作用研究進展［Ｊ］． 南京中醫藥大學學報，２００７，２３（１）：６３－６５．

［２］ 楊錯，邢立國，劉玉蘭． 柴胡乳劑對小鼠免疫功能的影響［Ｊ］． 沈陽藥科大學學報，２００６，２３（３）：１６９－１７１．

［３］ 張永文． 柴胡果膠多糖的結構與藥理活性研究進展［Ｊ］． 國外醫學中醫中藥分冊，１９９６，１８（４）：２０－２３．

［４］ 張亮，胡海保． 南柴胡多糖分離與組成的初步研究［Ｊ］． 中草藥，２０００，３１（９）：６４７－６４８．