摘要:利用氨基酸自動(dòng)分析儀,比較分析馬氏珠母貝插核貝和未插核貝外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌的蛋白氨基酸組成含量。結(jié)果表明,①未插核貝外套膜、閉殼肌和內(nèi)臟團(tuán)氨基酸總含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù),干樣)分別為(13.01±0.02)%、(10.87±0.06)%、(10.41±0.13)%,插核貝分別為(11.31±0.01)%、(14.78±0.10)%和(10.26±0.09)%;②各部位中Asp、Glu和Gly含量高于其他氨基酸。外套膜各氨基酸含量,除Ser、Met、Tyr和Phe無(wú)顯著變化外,未插核貝Thr、Val和Cys低于插核貝,其余氨基酸高于插核貝,且存在顯著性差異。閉殼肌中,除Cys和Pro基本無(wú)變化外,未插核貝各氨基酸含量均低于插核后,差異顯著(P<0.05)。而內(nèi)臟團(tuán)中,除Glu、Val、Ile和Lys未插核貝高于插核貝,Gly和Ala低于插核貝,且存在顯著性差異(P<0.05)外,其余氨基酸插核貝和未插核貝均差異不顯著(P>0.05)。
關(guān)鍵詞:馬氏珠母貝;插核;外套膜;內(nèi)臟;閉殼肌;氨基酸
中圖分類號(hào):Q176文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0439-8114(2011)10-2081-03
Effect of Bead Insertion on Amino Acid in Different Tissues of Pintada martensii
MA Xiao-tian1a,BAI Yang1a,LIU Juan-hua1a,MIAO Dong-liang1a,JI Li-li2,SONG Wen-dong1b
(1a.College of Food Science and Technology; 1b.College of Science, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, Guangdong,China;
2. School of Environmental Science and Engineering, Donghua University, Shanghai 201620, China)
Abstract: The effect of bead insertion on amino acid components in mantle, visceral mass and adductor muscle of Pintada martensii was analyzed by Amino Acid Automatic Analyzer. The results showed that ①The total amino acid of mantle, visceral mass and adductor muscle of P. martensii treated out bead insertion were(13.01±0.02)%, (10.87±0.06)%, (10.41±0.13)%, while of those with bead insertion were (11.31±0.01)%, (14.78±0.10)% and (10.26±0.09)%, respectively. ②The content of Asp, Glu and Gly was higher than that of other amino acids. In mantle, except Ser, Met, Tyr and Phe,which had no significant change between those with or without insertion, the content of Thr,Val and Cys of shellfish without insertion was lower than that with insertition; while that of others were higher. In visceral mass, the content of amino acid was significantly lower(P<0.05) in shellfish not treated by insertion except Cys and Pro. Meanwhile, in adductor muscle, Glu, Val, Ile and Lys of shellfish without bead insertion were significantly higher(P<0.05); as Gly and Ala was significantly lower; and the other amino acid had no difference.
Key words: Pintada martensii; bead insertition; mantle; visceral mass; adductor muscle; amino acid
馬氏珠母貝(Pintada martensii),又稱合浦珠母貝,屬暖水性海洋貝類,主要分布在廣東、廣西和海南,是我國(guó)南方沿海地區(qū)的主要經(jīng)濟(jì)貝類[1]。其所產(chǎn)出的珍珠稱南珠,粒大、圓潤(rùn)、光彩迷人,深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài),近年來(lái)市場(chǎng)需求也越來(lái)越大。隨著人工插核育珠技術(shù)的成熟,已可成功培育優(yōu)質(zhì)珍珠。人工插核是先將珠核植入貝體,再往珠核上移植外套膜細(xì)胞小片,小片分裂增殖形成珍珠囊由分泌細(xì)胞分泌珍珠質(zhì),形成珍珠。馬氏珠母貝是濾食性動(dòng)物,靠閉殼肌開(kāi)合進(jìn)食。插核后,由于貝體產(chǎn)生排異反應(yīng),很可能會(huì)引起貝體基本組分的變化,插入的珠核可能被從創(chuàng)口中擠出來(lái)[2],未被擠出的珠核則經(jīng)過(guò)20 d休養(yǎng)期后,順利分泌珍珠質(zhì)。本文利用氨基酸自動(dòng)分析儀,研究插核和未插核馬氏珠母貝外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌氨基酸組成和含量的變化,以期為珍珠的形成機(jī)制、改進(jìn)插核技術(shù)及培育優(yōu)質(zhì)珍珠提供參考。
1材料與方法
1.1材料與儀器
材料:馬氏珠母貝采自湛江徐聞養(yǎng)殖基地(200只),平均貝重(45±10)g,貝齡2年。取100只貝,當(dāng)天進(jìn)行插核手術(shù),將經(jīng)插核處理和未經(jīng)插核處理的馬氏珠母貝暫養(yǎng)20 d。海水取自湛江東海島,砂濾;試驗(yàn)期間保持水溫23~25 ℃,pH值8.12~8.35,鹽度1.020~1.025(鹽度不足可用海水晶調(diào)兌),24 h不間斷充氣,保持溶氧。投喂扁藻,每天2次,密度為8.5×105~1.1×106 cell/mL,上午9∶00換水,每天檢查貝體3次,及時(shí)清除死貝,以免污染水質(zhì)。暫養(yǎng)結(jié)束后,開(kāi)殼后快速解剖,分離外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌,清洗并裝袋,-20 ℃冷凍備用。
儀器:日立L-8900氨基酸自動(dòng)分析儀。
1.2試驗(yàn)方法
將樣品解凍,勻漿,在80 ℃烘干至恒重。即得插核貝外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌,未插核貝外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌,共6組樣品,每組樣品每只貝3個(gè)重復(fù)。準(zhǔn)確稱取樣品0.100 0 g,經(jīng)6 mol/L HCl于110 ℃含氮?dú)饷芊夥磻?yīng)釜中水解20 h。
1.3氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定條件
流動(dòng)相:檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=2.2、3.5、5.5、7.0);分析時(shí)間:30 min;反應(yīng)柱柱溫:135 ℃;分離柱柱溫:52 ℃;緩沖液:流速1.200 mL/min;茚三酮:流速0.700 mL/min。每組樣品重復(fù)確定3次,單個(gè)氨基酸相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于10%(按照GB/T 5009.124-2003測(cè)定)。測(cè)定的結(jié)果以樣品干重百分?jǐn)?shù)表示,樣品含量=(測(cè)定數(shù)值/樣品干重)×100%。
1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理,利用配對(duì)t檢驗(yàn)(Paired-Sample Test)檢驗(yàn)插核前后外套膜、閉殼肌和內(nèi)臟團(tuán)氨基酸組成及含量的差異顯著性。描述性統(tǒng)計(jì)值使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,P<0.05為具有顯著性差異。
2試驗(yàn)結(jié)果
經(jīng)L8900日立氨基酸自動(dòng)分析儀檢測(cè),從插核和未插核馬氏珠母貝外套膜、內(nèi)臟團(tuán)和閉殼肌中分別檢出17種氨基酸,色氨酸已被破壞,其中酸性氨基酸2種,非極性氨基酸7種,必需氨基酸7種,半必需氨基酸2種,各氨基酸的含量見(jiàn)表1。從氨基酸組成來(lái)看,插核和未插核貝各部位氨基酸組成基本一致,均為Glu含量最高,Asp、Gly、Ala、Leu、Lys和Arg較為豐富,Cys、Met和His含量較低。從插核和未插核貝各部位的氨基酸含量來(lái)看:外套膜中,除Ser、Met、Tyr和Phe外,插核貝外套膜各氨基酸含量均與未插核貝差異顯著(P<0.05),插核手術(shù)使Asp、Glu、Gly、Ala、Ile、Leu、Lys、Arg、His和Pro含量降低,Thr,Val和Cys升高。閉殼肌中,除Cys和Pro外,插核貝各氨基酸含量均升高,且與未插核貝差異顯著(P<0.05)。而內(nèi)臟團(tuán)中,插核手術(shù)僅導(dǎo)致Gly和Ala顯著升高(P<0.05),Glu、Val、Ile和Lys降低(P<0.05),未插核貝和插核貝其它各氨基酸含量變化不顯著(P>0.05)。從總氨基酸含量來(lái)看,插核貝閉殼肌中最高,其次為外套膜,插核手術(shù)導(dǎo)致馬氏珠母貝外套膜氨基酸含量降低,閉殼肌氨基酸升高,內(nèi)臟團(tuán)略微降低。
3討論
馬氏珠母貝為海水珍珠貝,其氨基酸組成與淡水育珠蚌三角帆蚌、非育珠蚌毛蚶、黃螺、花蛤基本相同,含量與企鵝珍珠貝全臟器氨基酸含量[3]相似,低于淡水育珠蚌三角帆蚌[4],高于非育珠蚌毛蚶、黃螺、花蛤等[5]。經(jīng)氨基酸自動(dòng)分析儀檢測(cè),未插核馬氏珠母貝的3種組織中,閉殼肌氨基酸含量最高,其次為外套膜,這是由不同組織具有不同的生理功能造成的。這與段德麟[6]報(bào)道的蝦夷扇貝中閉殼肌氨基酸含量最高一致。據(jù)小林新二郎[7]研究,閉殼肌由橫紋肌和平滑肌組成,前者有貝殼的開(kāi)閉運(yùn)動(dòng),后者有閉殼作用,能保持一定程度的收縮和緊張狀態(tài),所以其蛋白質(zhì)含量集中。外套膜是肌肉質(zhì),善于伸縮,有三層結(jié)構(gòu),外側(cè)上皮組織、內(nèi)側(cè)上皮組織和結(jié)締組織,外側(cè)上皮細(xì)胞有很強(qiáng)的分泌能力,其分泌的粘液即為殼角蛋白的前體。由此可見(jiàn),閉殼肌和外套膜是貝體儲(chǔ)存和積累蛋白質(zhì)的主要場(chǎng)所。
邱安東等[8]的研究表明:不同pH值可影響三角帆蚌外套膜珍珠質(zhì)分泌,中性水體,合成和分泌旺盛,酸性和堿性水體,珍珠質(zhì)分泌細(xì)胞合成和分泌能力減弱;不同pH還影響外套膜表面蛋白質(zhì)含量,酸堿性水體中外套膜外表皮細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)最少。不同濃度硫酸銅對(duì)三角帆蚌外套膜也有不同程度的損害[9]。可見(jiàn),外界刺激會(huì)影響貝體不同組織的功能。而馬氏珠母貝經(jīng)插核手術(shù),造成貝體創(chuàng)口,降低了貝體新陳代謝、免疫力和外套膜分泌細(xì)胞的活力,其分泌能力也相應(yīng)降低,致使外套膜氨基酸含量降低。插核后,貝體產(chǎn)生排核現(xiàn)象,增大閉殼肌的收縮性,王恒慶等[10]研究表明術(shù)后馬氏珠母貝蛋白總含量增加。插核后,外套膜氨基酸含量降低,閉殼肌含量升高,內(nèi)臟團(tuán)基本未變。
珍珠層是由殼角蛋白和霰石形成的復(fù)合體,大量文獻(xiàn)表明殼角蛋白可控制CaCO3晶體的生長(zhǎng)[11-15],外套膜對(duì)貝殼和珍珠的形成及質(zhì)量有至關(guān)重要[7]。本研究顯示插核手術(shù)導(dǎo)致外套膜氨基酸含量降低,其原因還可能是氨基酸被轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)臟的初生珍珠囊或次生珍珠囊,進(jìn)而轉(zhuǎn)運(yùn)到貝殼和珍珠中。石安靜等[16]對(duì)三角帆蚌珍珠囊的形成研究表明:在休養(yǎng)期中30 d左右,可生成次生珍珠囊,分泌珍珠質(zhì)。本文測(cè)得插核手術(shù)導(dǎo)致外套膜Glu、Asp和Gly顯著降低,而研究中表明殼角蛋白富含Asp、Gly、Ser和Glu[17],其可能在珍珠的可形成過(guò)程中起重要作用[18]。
馬氏珠母貝氨基酸決定貝的營(yíng)養(yǎng)水平,同時(shí)也影響貝殼和珍珠的形成及珍珠的質(zhì)量。了解插核手術(shù)對(duì)馬氏珠母貝各部位氨基酸組成和含量的影響,可為進(jìn)一步理解貝體各組織的生理功能、培育優(yōu)質(zhì)珍珠及研究馬氏珠母貝貝體和珍珠層間氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)提供參考。
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