棉花黑斑病病原鑒定及生防木霉菌株的篩選

摘要：從河南省部分地區(qū)感染黑斑病的棉花葉片上分離病原菌，并對其致病力、病原及其生防木霉菌株進(jìn)行了研究。共分離到５株棉花黑斑病菌株。致病力分析表明，ＣＨＢ－３的致病力比較強(qiáng)，病情指數(shù)達(dá)到89．３。對Ｙ２１ｃ菌株的核糖體ＲＮＡ基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增和序列測定，并在ＧｅｎＢａｎｋ中進(jìn)行Ｂｌａｓｔ搜索和比對分析，根據(jù)ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列分析結(jié)果并結(jié)合病菌的形態(tài)學(xué)特征，初步認(rèn)為河南省棉花黑斑病的病原菌為細(xì)極鏈格孢菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）。利用平板對峙培養(yǎng)測定了７個木霉菌株對棉花黑斑病菌株ＣＨＢ－３的拮抗作用，篩選到抑菌作用較好的木霉菌株ＴＨ，抑菌率為８８．６％。

關(guān)鍵詞：棉花；黑斑病；木霉；ｒＤＮＡ－ＩＴＳ

中圖分類號：Ｓ４３６．４２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）09－1793-04

Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｃａｕｓｉｎｇ Ｃｏｔｔｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ Ｌｅａｆ Ｓｐｏｔ ａｎｄ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ Ｓｔｒａｉｎｓ

ＣＨＥＮ Ｋａｉ１，ＬＩＵ Ａｉ－ｒｏｎｇ１，２，ＷＵ Ｓｈａｎｇ－ｙｉｎｇ１，ＬＩＮ Ｘｉａｏ－ｍｉｎ１，ＸＵ Ｔｏｎｇ２

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００２９， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ has ｓｐｒｅａｄ ａｒｏｕｎｄ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ｗｉｄｅｌｙ ａｓ ａ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ． Ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ by Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｍｅ ａｒｅａｓ ｏｆ Ｈｅｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｆｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ． Ｔｈｅ ｒＤＮＡ－ＩＴＳ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ２ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ ｄａｔａｂａｓｅ and ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ， ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ． Ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｆｒｏｎｔｉｎｇ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ， ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｅｖｅｎ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ． ＴＨ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｈａｖｅｄ ｂｅｓｔ as ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ８８．６％．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｏｔｔｏｎ； Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ； Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ； ｒＤＮＡ－ＩＴＳ

棉花黑斑病是世界范圍內(nèi)廣為傳播的一種常見的棉葉侵染性病害［１］，又稱棉花輪紋病，俗稱腰折病，多發(fā)于棉花子葉、真葉以及幼苗期。它的病原體為半知菌亞門大鏈格孢屬真菌，被稱為棉花輪紋菌或棉花黑斑病菌。它是棉花苗期葉部病害中分布最廣、流行面積最大、流行頻率最高的病害，陰濕多雨年份往往猖獗流行，給棉花生產(chǎn)造成毀滅性災(zāi)害［１，２］。

棉花黑斑病的病原菌有多種，其中以大孢鏈格孢菌（Ａ． ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ Ｚｉｍｍ．） 、細(xì)極鏈格孢菌（Ａ． ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ Ｗｉｌｔｓｈ．）、棉鏈格孢菌［Ａ． ｇｏｓｓｙｐｉｎａ （Ｔｈｕｍ．） Ｈｏｐｋ．］、細(xì)交鏈孢菌［Ａ． ａｌｔｅｒｎａｔａ （Ｆｒ．） Ｋｅｉｓｓｌ．］等為常見種［２］。不同病原菌間致病力不同，大孢鏈格孢菌致病力最強(qiáng)。目前，棉花黑斑病病原菌研究多集中在發(fā)病條件和化學(xué)防治方面，對其病原菌的鑒定及生物防治報(bào)道較少，還沒有關(guān)于河南地區(qū)棉花黑斑病病原田間致病力和生物防治的研究報(bào)道。本研究從河南省部分地區(qū)感染黑斑病的棉花葉片上采集并分離病原菌，并對其致病力、病原及其生防木霉進(jìn)行了研究，以期為棉花黑斑病的生物防治奠定理論基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

棉花黑斑病菌由本課題組分離。哈茨木霉菌菌株ＴＡ、ＴＤ、ＴＧ、ＴＨ、ＴＩ、ＴＭ及ＴＸ，由浙江大學(xué)徐同教授饋贈。供試棉花品種為新植１號。

１．２棉花黑斑病菌的分離

從洛陽、三門峽、周口市和河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院的田間采集發(fā)病較重且癥狀典型的棉花葉片，取病健交界處組織，先用體積分?jǐn)?shù)為７５％的乙醇消毒３０ ｓ，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為１％的ＮａＣｌＯ消毒５ ｍｉｎ，用無菌水清洗。消毒后的組織塊置于ＰＤＡ平板培養(yǎng)基上，２５℃恒溫培養(yǎng)２ ｄ，長出真菌菌落后挑取邊緣菌絲單孢純化，分離純化得到的菌株接種到ＰＤＡ斜面培養(yǎng)基上。

１．３病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

分離純化后的菌落產(chǎn)孢后，挑取少量菌絲和分生孢子，觀察菌絲及分生孢子形態(tài)，測量分生孢子的長、寬、分隔數(shù)及孢子梗的有無、長短，每個處理至少測量３０個孢子，并對照文獻(xiàn)［３］進(jìn)行形態(tài)鑒定。

１．４病菌對棉花幼苗的致病力測定

幼苗４～５片真葉時，用滅菌后的蒸餾水將枝條及葉片沖洗干凈，再用濕潤紗布輕搓葉片表面，去除表面蠟質(zhì)。采用噴霧法將孢子懸浮液均勻噴灑在葉片表面，病原菌孢子懸浮液濃度為１０８個／ｍＬ，以清水作對照。重復(fù)３次，每重復(fù)２０株。將處理后的棉花植株放入人工氣候箱中，并用塑料袋將整株罩住。溫度、相對濕度、光照時間分別設(shè)置為２９℃、９０％和１５ ｈ。１４ ｄ后調(diào)查發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)。

病情分級：０級，無病癥；１～５級分別為病斑占葉片表面積的０～２０％、２１％～４０％、４１％～６０％、６１％～８０％和８１％～１００％。

病情指數(shù)＝［∑（各級病葉數(shù)×各級代表值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級代表值）］×１００

１．５病菌核糖體ＲＮＡ基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列比較

以ＣＴＡＢ法提取病菌總ＤＮＡ。ｒＤＮＡ－ＩＴＳ擴(kuò)增選用的引物為ＩＴＳ４（５’－ＴＣＣ ＴＣＣ ＧＣＴ ＴＡＴ ＴＧＡ ＴＡＴ ＧＣ－３’）和ＩＴＳ５（５’－ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＴ ＡＡＣ ＡＡＧ－３’）。ＰＣＲ反應(yīng)體系含ＤＮＡ模板１．００ μＬ（約１０ ｎｇ）、１０×緩沖液（１ ０００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，５００ ｍｍｏＬ／Ｌ ＫＣｌ）２．５０ μＬ、Ｍｇ２＋（２５ ｍｍｏＬ／Ｌ ＭｇＣｌ２）１．８０ μＬ、ｄＮＴＰ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｅａｃｈ） ２．５０ μＬ、引物（２ μｍｏＬ／Ｌ）各1．００ μＬ、Ｔａｑ酶１．２５ μＬ，加ｄｄＨ２Ｏ至２５．００ μＬ。反應(yīng)程序?yàn)椋海梗础骖A(yù)變性２ ｍｉｎ；９４℃變性４０ ｓ，５４℃退火４０ ｓ，７２℃延伸４０ ｓ，共３５個循環(huán)；７２℃延伸１０ ｍｉｎ。反應(yīng)產(chǎn)物在質(zhì)量濃度１．２％瓊脂糖凝膠上電泳檢測（１２０Ｖ，３０ ｍｉｎ）。擴(kuò)增的ＰＣＲ產(chǎn)物委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。

１．６木霉拮抗菌株的室內(nèi)篩選

采用對峙培養(yǎng)法。木霉菌和病原菌ＣＨＢ－３于２８℃活化３ ｄ。挑取直徑５ ｍｍ的病原菌菌塊，接種到新制ＰＤＡ平板左側(cè)，再將木霉菌塊接種到平板右側(cè)。以只接種病原菌平板作對照，每處理３次重復(fù)。２８℃恒溫培養(yǎng)６ ｄ，每天記錄病原菌落指向木霉菌半徑以及對照病原菌菌落半徑，計(jì)算抑菌率。

抑菌率＝［（病原菌對照菌落半徑－病原菌落指向木霉菌半徑）/病原菌對照菌落半徑］×１００％

拮抗系數(shù)的分級標(biāo)準(zhǔn)（５級）［４］：Ⅰ級，木霉菌絲占平皿面積的１００％；Ⅱ級，木霉菌絲占平皿面積的２／３以上；Ⅲ級，木霉菌絲占平皿面積的１／３～２／３；Ⅳ級，木霉菌絲占平皿面積的１／３以下；Ⅴ級，病原菌絲占平皿面積的１００％。

１．７數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用ＤＰＳ ｖ ７．０５軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用鄧肯氏法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

２結(jié)果與分析

２．１棉花黑斑病病原菌致病力比較

從采集到的標(biāo)本中共分離到５株病原菌，分別編號為：ＣＨＢ－１、ＣＨＢ－２、ＣＨＢ－３、ＣＨＢ－４、ＣＨＢ－５。將病菌孢子懸浮液噴灑于健康葉片，接種４８ｈ后部分植株葉面出現(xiàn)紅褐色小圓斑，以幼嫩葉片為主。此后病斑逐漸明顯，擴(kuò)展成不規(guī)則形至近圓形褐色斑，清水對照未發(fā)病。接種后第六天計(jì)算不同菌株的病情指數(shù)，結(jié)果表明不同菌系之間的致病力存在極顯著差異，ＣＨＢ－３的致病力比較強(qiáng)，病情指數(shù)達(dá)到８９．３（表１）。

２．２病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

在ＰＤＡ培養(yǎng)基上接種病原菌后，菌絲呈放射狀向外生長，后呈圓形，邊緣整齊。菌落淡褐色，生長茂密，沒有氣味。菌落生長后期，有明顯環(huán)狀輪紋，背面中心有褐色代謝產(chǎn)物產(chǎn)生（圖１）。分生孢子倒棍棒形，部分孢子卵圓形或倒梨形，基部圓，暗褐色，嘴孢短，成串著生，有橫隔１～９個，縱隔０～６個，隔膜處縊縮，大小１２．５～４２．５ μｍ×６．０～１２．５ μｍ。根據(jù)形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)將ＣＨＢ－３初步鑒定為半知菌亞門，叢梗孢目，暗色孢科，鏈格孢屬真菌［５，６］。

２．３棉花黑斑病菌ｒＤＮＡ－ＩＴＳ的擴(kuò)增及序列比較

以病菌總ＤＮＡ為模板，用通用引物ＩＴＳ４和ＩＴＳ５分別對致病力較強(qiáng)的ＣＨＢ－２、ＣＨＢ－３、ＣＨＢ－５菌株的ＩＴＳ區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增和序列測定，拼接后分別得到長度為５９６、５８５、５７４ ｂｐ的序列。采用ＤＮＡＭＡＮ５．２．２軟件對測得的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)這３株真菌的ＩＴＳ序列完全相同。通過Ｂｌａｓｔ搜索，發(fā)現(xiàn)與所測菌株的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列相似率為１００％的序列（表２）中，有4個來自細(xì)極鏈格孢（Ａ． ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ），５個來自煙草赤星病菌（Ａ． ａｌｔｅｒｎａｔa），５個來自鏈格孢屬真菌（Ａ． ｓｐ．），４個來自未鑒定的子囊菌，１個長柄鏈格孢（Ａ． ｌｏｎｇｉｐｅｓ）和１個蘋果輪斑病菌（Ａ． ｍａｌｉ）。根據(jù)棉花病株癥狀及病菌的形態(tài)特征，結(jié)合ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列分析，所分離的棉花黑斑病病原菌鑒定為細(xì)極鏈格孢（Ａ． ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）。

２．４木霉菌對黑斑病原菌的抑制作用

對峙培養(yǎng)２～３ ｄ木霉菌即表現(xiàn)出對病原菌ＣＨＢ－３的抑制作用。培養(yǎng)４ ｄ后木霉菌與病原菌接觸，木霉菌和病原菌之間形成了較明顯的抑制圈，大部分木霉菌在與病原菌的對峙中形成了對抗生長局面。隨著時間的推移，被包圍的病原菌有些邊緣塌陷，菌落背面褐色加深，生長受到抑制。培養(yǎng)到第六天時與枯萎病菌形成了明顯的抑菌圈。其中ＴＡ和ＴＨ菌株覆蓋或侵入了黑斑病菌ＣＨＢ－３菌落，拮抗作用較強(qiáng)（圖２）。

各菌株對棉花黑斑病菌ＣＨＢ－３的抑制作用存在差異，當(dāng)木霉菌接種６ ｄ時，對病原菌的抑菌率在５６．７％～８８．６％之間。其中木霉菌ＴＨ對黑斑病菌ＣＨＢ－３具有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌率為８８．６％，拮抗系數(shù)為Ⅰ～Ⅱ級；ＴＡ菌株的抑菌效果次之（表３）。

３討論

黑斑病是棉花苗期葉片病害中分布最廣，危害最大，流行頻率最高的一種毀滅性病害，在我國主要產(chǎn)棉區(qū)都有發(fā)生，尤其是北方棉區(qū)，在陰濕多雨年份極易發(fā)生流行。對棉花黑斑病的研究主要是利用化學(xué)殺菌劑和預(yù)處理非致病性生防制劑。Ｓｈｔｉｅｎｂｅｒｇ 等［7］的研究表明，系統(tǒng)性殺菌劑（戊唑醇）和保護(hù)性殺菌劑（代森錳）對棉花黑斑病均具有較好的防治效果，不同殺菌劑對碧瑪棉產(chǎn)量和生長沒有顯著影響，但系統(tǒng)性殺菌劑在抑制已感染病害上具有更好效果。Ｊａｂａｊｉ－Ｈａｒｅ等［８］研究了非致病性的雙核絲核菌和苯并噻二唑（ＢＴＨ）對棉花黑斑病的防治效果，結(jié)果表明非致病性的雙核絲核菌防病效果要優(yōu)于ＢＴＨ，且兩者在抗病中具有協(xié)同作用。本研究進(jìn)行了棉花黑斑病病原菌的分離、形態(tài)鑒定，并基于ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列進(jìn)行了分子鑒定，并首次利用哈茨木霉對其進(jìn)行了室內(nèi)抑菌研究。

木霉菌是重要的植物病害防治菌，它可通過重寄生、抗生溶菌作用、競爭作用、誘導(dǎo)抗性及促進(jìn)植物生長等機(jī)制抑制真菌病害［９］。本試驗(yàn)研究了７個哈茨木霉菌株對棉花黑斑病病原菌的拮抗作用，并篩選得到較理想的拮抗木霉菌株ＴＨ和ＴＡ。目前木霉菌在實(shí)驗(yàn)室、溫室控制條件下或田間小型試驗(yàn)中已獲得較好的防治效果，但與在大田應(yīng)用還有較大的差距。主要是田間環(huán)境條件復(fù)雜，如土壤物理化學(xué)因素、土壤微生物、植物根系和氣象因素等［１０］。本試驗(yàn)結(jié)果為將哈茨木霉菌株ＴＨ和ＴＡ等開發(fā)成生防制劑提供了依據(jù)，但關(guān)于ＴＨ和ＴＡ等菌株防治田間棉花黑斑病的施用方法、次數(shù)和劑量等尚待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)：

［１］ ＣＯＴＴＹ Ｐ Ｊ． Ｅｖａｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Dｉｓｅａｓｅ，２００１，７１：１０８２－１０８４．

［２］ ＣＯＬＳＯＮ－ＨＡＮＫＳ Ｅ Ｓ， ＤＥＶＥＲＡＬＬ Ｂ Ｊ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ２， ６－ｄｉｃｈｌｏｒｏｉｓｏｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ， ｉｔｓ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ ｏｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００１，４９（２）：１７１-１７８．

［３］ 魏景超． 真菌鑒定手冊［Ｍ］． 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，１９７９．１－７８０．

［４］ ＢＥＬＬ Ｄ Ｋ， ＷＥＬＬＳ Ｈ Ｄ， ＭＡＲＫＨＡＭ Ｃ Ｒ． Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｓｉｘ ｆｕｎｇａｌ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８２，７２（４）：３７９－３８２．

［５］ 巴尼特Ｈ Ｌ， 亨特Ｂ Ｂ． 半知菌屬圖解［Ｍ］． 沈崇堯，譯．北京：科學(xué)出版社，１９７７．１－２４０．

［６］ 張?zhí)煊睿?中國真菌志：第十六卷：鏈格孢屬［Ｍ］． 北京：科學(xué)出版社，２００６．３３０－３３９．

［７］ ＳＨＴＩＥＮＢＥＲＧ Ｄ， ＤＲＥＩＳＨＰＯＵＮ Ｊ． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｉｎ ｐｉｍａ ｃｏｔｔｏｎ ｂｙ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ［Ｊ］． Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，１９９１，１０（５）：３８１－３８５．

［８］ ＪＡＢＡＪＩ－ＨＡＲＥ Ｓ， ＮＥＡＴＥ Ｓ Ｍ． Ｎｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂｉｎｕｃｌｅａｔｅ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ａｎｄ Ｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ ｐｒｏｔｅｃｔ ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｄａｍｐｉｎｇ－ｏｆｆ ａｎｄ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ２００５， ９５（９）： １０３０－１０３６．

［９］ ＬＩＥＶＥＮＳ Ｂ， ＣＬＡＥＳ Ｌ， ＶＡＫＡＬＯＵＮＡＫＩＳ Ｄ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｒｏｂｕｓｔ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｔｏ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ ａｎｄ ｆ． ｓｐ． ｒａｄｉｃｉｓ－ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ［Ｊ］． Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，９（９）：２１４５－２１６１．

［１０］ ＢＵＲＭＥＩＳＴＥＲ Ｌ， ＨＡＵ Ｂ． Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｂｅａｎ ｒｕｓｔ ｆｕｎｇｕｓ Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ： ｌｅａｆ ｄｉｓｃ ａｓｓａｙｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｐｏｒｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅｓ［Ｊ］． ＢｉｏＣｏｎｔｒｏｌ， ２００９，５４（４）：５７５－５８５．