鮮三七根莖中提取三七總皂苷的純化及脫色工藝研究

摘 要:目的:研究影響分離、純化、脫色三七總皂苷的主要影響因素，確立三七總皂苷純化脫色工藝。方法:鮮三七提取液，按醇沉1次，時(shí)間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇，醇沉濃度與樣液比例為1∶1，加絮凝劑濃度為4%的工藝進(jìn)行處理，采用D101大孔吸附樹(shù)脂富集純化和D941離子交換樹(shù)脂脫色三七總皂苷。結(jié)果:70%的乙醇為洗脫劑，上柱液濃度為0.2g生藥/ml，上柱液的量為200ml，上柱后先用蒸餾水快速?zèng)_柱的倍量為1.5，洗脫劑的倍量為3倍，洗脫時(shí)的速度(滴速)為60滴/min。結(jié)論:D101大孔吸附樹(shù)脂富集純化和D941離子交換樹(shù)脂脫色三七總皂苷，效果較好。

關(guān)鍵詞:純化脫色樹(shù)脂絮凝劑

中圖分類(lèi)號(hào):TQ461文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1674-098X(2011)05(b)-0002-02

三七Panax notoginseng(Buck)F.H. Chen為五加科人參屬植物，有“金不換”、“南國(guó)神草”等美譽(yù)，是我國(guó)名貴中藥材，也是云南獨(dú)具特色的中藥材資源，在云南的中藥產(chǎn)業(yè)中占有舉足輕重的地位和作用。其具有活血祛瘀，通脈活絡(luò)，抑制血小板聚集和增加腦血流量。用于腦路瘀阻，中風(fēng)偏癱，心脈瘀阻，胸痹心痛;腦血管病后遺癥，冠心絞痛屬上述癥候者。目前，用干品三七來(lái)提取三七總皂苷進(jìn)行純化及脫色的有文獻(xiàn)報(bào)道，而對(duì)鮮三七提取的三七總皂苷進(jìn)行純化和脫色還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道，因?yàn)樵邗r三七提取過(guò)程中含有大量的糖類(lèi)、鞣質(zhì)和淀粉等雜質(zhì)，在分離純化時(shí)很困難，容易堵塞柱子。所以，我們?cè)谔崛r(shí)采用了生物酶和絮凝劑來(lái)進(jìn)行處理。本文就是以鮮三七根莖提取的三七總皂苷，通過(guò)對(duì)D101大孔吸附樹(shù)脂富集純化和D941離子交換樹(shù)脂脫色工藝條件7進(jìn)行研究，探索對(duì)鮮三七提取的三七總皂苷進(jìn)行純化及脫色工藝的可行方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

離心用DL—40B離心機(jī);減壓濃縮用低溫冷卻液循環(huán)泵(型號(hào):OLS8—5/10)、循環(huán)水式多用真空泵(SHB—111)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(BUCHI Rotavaper R—200)。日本島津LC-10Avp高效液相色譜儀，SPD紫外檢測(cè)器，電子分析天平，超聲波清洗器。

1.2 試藥

鮮三七根莖中提取的三七總皂苷，由文山三七研究院新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究所試制;對(duì)照品三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙腈為色譜純，水為重蒸水。絮凝劑:購(gòu)自山東奧康生物科技有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)鮮三七提取的三七總皂苷進(jìn)行純化研究[1]

對(duì)干三七提取的三七總皂苷進(jìn)行分離提純，經(jīng)大量查資料證明，目前大孔樹(shù)脂有不同的三種型號(hào):D101、AB-8及HPD-100，3種樹(shù)脂均可以富集、分離純化三七總皂苷，其中D101及HPD-100均為聚苯乙烯結(jié)構(gòu)的非極性大孔樹(shù)脂且表面積均為400～500m2/g，但HPD-100為D101升級(jí)換代產(chǎn)品，AB-8為弱極性樹(shù)脂，為此我們選擇了D101大孔樹(shù)脂進(jìn)行分離純化。

在用D101大孔樹(shù)脂純化之前，我們先用最佳提取工藝:把鮮三七根莖破碎為10目的鮮三七顆粒，加6倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2h，再加入0.1ml/200g生物酶A，0.2ml/200g生物酶B，可得到鮮三七提取液。

因鮮三七提取液中含有大量糖類(lèi)、鞣質(zhì)和淀粉等雜質(zhì)，所以，造成在分離純化時(shí)很困難，容易堵塞柱子，所以，采用了絮凝劑來(lái)進(jìn)行醇沉。表1就是我們考察的五個(gè)因素:醇沉的時(shí)間、醇沉乙醇的濃度、提取液濃縮后與乙醇濃度醇沉比例、絮凝劑的量、醇沉次數(shù)。

經(jīng)過(guò)以上因素的考察，分析，反復(fù)試驗(yàn)，得出三因素的結(jié)論:醇沉最佳時(shí)間為12 h;醇沉乙醇濃度為70%;醇沉次數(shù)為1次。

然后我們又進(jìn)行其余兩個(gè)因素:提取液濃縮后與乙醇濃度醇沉比例與絮凝劑的用量進(jìn)行兩因素水平正交試驗(yàn)。按以上最佳工藝提取的鮮三七提取液，我們確定了醇沉次數(shù)為1次，醇沉?xí)r間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇。現(xiàn)按醇沉濃度與提取液按不同比例，加不同的絮凝劑進(jìn)行了二因素正交實(shí)驗(yàn)(表2)。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，可確定鮮三七提取液處理工藝條件為:醇沉濃度與樣液比例為1∶1，絮凝劑濃度為4%。

把提取的鮮三七提取液，按醇沉1次，時(shí)間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇，醇沉濃度與樣液比例為1∶1，加絮凝劑濃度為4%的工藝進(jìn)行處理。處理好的三七提取液，上D101大孔樹(shù)脂純化，同時(shí)，在純化時(shí)我們還考察了洗脫劑的選擇、上柱液濃度的選擇、上柱液的量、上柱后先用蒸餾水快速?zèng)_柱的倍量、洗脫劑的倍量、洗脫時(shí)的速度(滴速)等因素，這六個(gè)因素都對(duì)三七總皂苷的純化有影響。

以上六因素經(jīng)過(guò)考察，分析，反復(fù)試驗(yàn)，得出試驗(yàn)結(jié)論:70%的乙醇為洗脫劑;上柱液濃度為0.2g生藥/ml;上柱液的量為200ml;上柱后先用蒸餾水快速?zèng)_柱的倍量為1.5;洗脫劑的倍量為3倍;洗脫時(shí)的速度(滴速)為60滴/min。

2.2 對(duì)鮮三七提取的三七總皂苷進(jìn)行脫色劑的篩選[2]

經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)證明，D101大孔樹(shù)脂分離效果確實(shí)好，但脫色效果不好。所以，我們選擇了活性炭和氧化鋁來(lái)脫色，可兩者脫色時(shí)流速非常慢，而且效果不明顯，其中的氧化鋁在脫色中損失很大。而用大孔弱堿性陰離子交換樹(shù)脂D-941柱子來(lái)脫色，脫色效果最好，與其它三種進(jìn)行了比較。下表3就是四種脫色效果的比較。

經(jīng)以上四種脫色材料試驗(yàn)證明，最后我們選擇大孔弱堿性陰離子交換樹(shù)脂D-941來(lái)脫色，脫色效果較好，總皂苷顏色偏白。

用以上D101大孔樹(shù)脂來(lái)分離得到的三七總皂苷，把三七總皂苷分別用蒸餾水和70%乙醇溶解，得到兩種上柱液，分別過(guò)D-941樹(shù)脂柱，再分別收集洗脫液得到兩種三七總皂苷，經(jīng)兩種檢測(cè)對(duì)比，70%乙醇為上柱液溶劑時(shí)，單體皂苷Rb1和Rg1保留率均很高，且純度也較蒸餾水的高。所以，我們選擇了70%乙醇為上柱液溶劑，工藝簡(jiǎn)潔合理。把分離得到70%的洗脫液，分別上四棵大孔弱堿性陰離子交換樹(shù)脂D-941柱子來(lái)脫色，然后分別用蒸餾水、30%、50%、70%的乙醇洗脫，收集合并過(guò)柱液和洗脫液，減壓濃縮，真空干燥得四種脫色后的三七總皂苷，經(jīng)檢測(cè)洗脫溶劑為70%時(shí)，所得總皂苷質(zhì)量最高。所以，我們確定70%乙醇為最優(yōu)洗脫溶劑。

按以上成型工藝，我們進(jìn)行了鮮三七提取三七總皂苷與干三七提取三七總皂苷的比對(duì)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，鮮三七總皂苷得率比干三七總皂苷得率高、三個(gè)單體(R1+Rg1+Rb1)含量為鮮三七比干三七高。所以，開(kāi)展鮮三七的產(chǎn)地加工，是拓寬三七加工路子，促進(jìn)三七資源的多樣化綜合利用，加強(qiáng)對(duì)產(chǎn)業(yè)鏈結(jié)構(gòu)控制的重要方面，極大地提升了三七產(chǎn)業(yè)技術(shù)層次，實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)附加值的明顯提高。

參考文獻(xiàn)

[1]謝茵，邢桂琴，劉秀芬.三七提取液中三七總皂苷的分離純化工藝研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(6):613～615.

[2]李東，黃羅生，平其能.三七總皂苷純化和脫色工藝研究[J].海峽藥學(xué)，2008，20(1):12～15.