HPLC法測定刺五加軟膠囊中刺五加苷E的含量

摘 要:目的 建立刺五加軟膠囊中刺五加苷E的含量測定方法。方法 采用HPLC法測定，使用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)，流速:1.0ml/min，檢測波長:210nm。結(jié)果 刺五加苷E對照品在10.16g/ml～91.44g/ml范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系(r=0.9998)，平均回收率為98.06%，RSD=1.3%(n=6)。結(jié)論 該法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作刺五加軟膠囊中刺五加苷E的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞:刺五加苷E刺五加軟膠囊高效液相色譜法

中圖分類號:R2文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1674-098X(2011)05(b)-0210-01

刺五加軟膠囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中藥軟膠囊，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的作用。臨床用于體虛乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多夢。本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[1～4]，建立了高效液相色譜法(HLPC)測定刺五加軟膠囊中刺五加苷E的含量方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作刺五加軟膠囊中刺五加苷E的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀，紫外檢測器;TU-1901紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);十萬分之一天平(梅特勒)。

1.2 試藥

刺五加苷E對照品(中國藥品生物制品檢定所提供批號111713-200502供含量測定用);刺五加軟膠囊(自制批號:20100301、20100302、20100303規(guī)格為0.3g);乙腈為色譜純，水為去離子水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm);乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速:1.0ml/min;檢測波長:210nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10μl，理論板數(shù)以刺五加苷E峰計(jì)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取刺五加苷E對照品5.08mg，置于50ml量瓶中，先用2ml50%甲醇溶解，再加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配成濃度為101.6g/ml的甲醇溶液。再精密量取該甲醇溶液5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含刺五加苷E50.8g/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品10粒，除去膠皮取內(nèi)容物，精密稱定，取相當(dāng)于2粒的量，精密稱定。置250ml三角瓶中，加10ml正已烷，混合均勻后移入分液漏斗中，依次用20，10，10ml乙腈提取三次，合并乙腈層于蒸發(fā)皿上蒸發(fā)至干，用1ml甲醇溶解，取SPE-C18小柱(依次用10ml甲醇和10ml純化水洗滌，吹干)，上樣，用甲醇洗脫至25ml容量瓶中，控制流速在1ml/min，定容，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

線性關(guān)系的考察:取刺五加苷E對照品用甲醇制成101.6g/ml的溶液，精密量取此溶液1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下測定，記錄色譜圖，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=43.325x+56.524，r =0.9998。

結(jié)果表明，刺五加苷E在10.16g/ml～91.44g/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，取同一批已知含量樣品6(批號:20100301)份，每份精密稱定相當(dāng)于1粒內(nèi)容物的樣品，再加入刺五加苷E對照品溶液10ml(50.8g/ml)，按照2.3項(xiàng)供試品制備方法進(jìn)行測定，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.06%，RSD為1.26%，表明準(zhǔn)確度良。計(jì)算每份的回收率，結(jié)果見表1。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，進(jìn)樣10μl，重復(fù)6次進(jìn)樣，依法測定，其峰面積的RSD=0.41% (n=6)。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號2010301)的供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8小時(shí)后測定，峰面積積分值基本不變，RSD=0.74%(n=5)。結(jié)果表明，在室溫條件下，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號的樣品(批號20100301)6份，按照供試品含量測定方法進(jìn)行操作，結(jié)果平均含量為0.652mg，RSD=0.62%(n=6)，表明本含量測定方法的重復(fù)性良好。

2.9 樣品含量測定

分別取本品三批(20100301、20100302、20100303)，按供試品溶液制備方法制備并測定，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 通過紫外掃描，刺五加苷E在210nm處有最大吸收，故選擇210nm為檢測波長

3.2 由于生產(chǎn)中采用精制玉米油為溶劑，在檢驗(yàn)過程中對色譜柱污染比較嚴(yán)重

針對這種情況，我們先采取正已烷-乙腈萃取的方法去除部分油脂，再采用固相萃取法用SPE-C18對油脂進(jìn)行吸附，從而達(dá)到去除油脂對色譜柱污染的目的。

3.3 先后試用了三種流動相系統(tǒng)

甲醇-水、甲醇-水-磷酸和乙腈-水-磷酸，結(jié)果乙腈-水-磷酸系統(tǒng)分離效果較好。通過乙腈-0.1%磷酸溶液10∶90、15∶85、20∶80、25∶75不同比例的選擇，確定15∶85的比例分離效果最好，保留時(shí)間適中。

3.4 實(shí)驗(yàn)證明，用該法檢測刺五加軟膠囊中刺五加苷E含量，可操作性強(qiáng)、精密度高、重現(xiàn)性及線性關(guān)系良好，回收率高，與其他峰分離良好，可作為刺五加軟膠囊中刺五加苷E的質(zhì)量控制方法

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005版(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2005(1).