RegⅠα蛋白表達與原發性胃癌發展過程的病理特性和相關性研究

[摘要]目的 探討RegⅠα蛋白表達與原發性胃癌發展過程的病理特性和相關性。方法 收集本院胃癌標本138例，設胃癌組和癌旁正常黏膜組，采用免疫組化觀察RegⅠα蛋白在原發胃癌的表達，并對2年原發性胃癌患者生存率進行分析。結果 與對照組比，胃癌RegⅠα 陽性率為64.1 %；早期胃癌和進展期胃癌Reg I α 表達無差異，但Borrmann IV RegⅠα 陽性表達強于其他分期；陽性主要集中在胃竇；印戒細胞癌陽性表達較高；淋巴細胞轉移與血行轉移 Reg I α 陽性表達較高；臨床分期、分化程度與RegⅠα表達有關，與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小無關。胃癌患者RegⅠα 蛋白表達陰性的2年生存率為84.9 %。結論RegⅠα可作為評價胃癌預后的參考指標。

[關鍵詞] 原發性胃癌；RegⅠα蛋白；免疫組化

[中圖分類號]R735.2 [文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701（2011）20-01-03

Expression of RegⅠα Protein and Pathologic Feature in Developing of Primary Gastric Cancer

DAI Weili1 HUANG Yan2HONG Huanping3

1.Department of Pathology， Zhejiang Province Tumour Hospital，Hangzhou310022，China；2.Department of Pathology，Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310009， China ；3.Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310058， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of RegⅠα protein in gastric carcinoma， and explore its correlations to clinic pathologic features and prognosis of gastric cancer. Methods Immunohistochemistry was used to reveal the expression of RegⅠα protein in 138 speciments of primary gastric carcinomas and corresponding normal tissues collected from gastric cancer patients enrolled in our hospital. The correlations of RegⅠα protein to clinic pathologic features and prognosis of gastric carcinoma and 2-year survival rate in the patients were analyzed. Results 64.1% patients showed a positive Reg I α protein. Early gastric cancer and advanced cancer Reg I α expression was not different， but Reg I α expression in Borrmann IV is higher than other stages. RegⅠα expression was mainly in the antrum. RegⅠα protein expression in signet ring cell carcinoma was significantly stronger than in other types of tumor. The patients with RegⅠα protein-positive had a significantly higher rate in lymphatic metastasis and venous invasion. RegⅠα expression was irrelevant with age， sex， tumor location， tumor size. The 2-year survival rate in the patients with RegⅠα protein- positive was 84.9%. ConclusionRegⅠα protein may function as a factor in the development of gastric cancer.

[Key words] Primary gastriccarcinoma； RegⅠα Protein； Immunohistochemistry

胃癌的好發年齡在40歲以上，男性多見。原發性胃癌早期臨床多無明顯的上消化道癥狀，隨著病情的發展，可逐漸出現無特征性的酷似胃炎或胃潰瘍的癥狀。RegⅠα蛋白屬于鈣依賴性植物血凝素家族（C型植物血凝素家族），研究發現它在哺乳動物生理學和人類疾病中有多重角色，其在胃癌發生發展中的病理生理作用尚不清楚。國內外學者認為，RegⅠα與胃癌的關系密切[1-4]。本課題研究RegⅠα在原發性胃癌發生發展過程中的表達，考察RegⅠα與胃癌的相關性和其病理特點，并對臨床診斷提供建議。

1材料與方法

1.1組織標本

收集本院2008年1月～2009年4月手術切除胃癌標本138例，按WHO腫瘤病理學與遺傳學分類（胃癌）進行組織學分型[2]。設立胃癌組和癌旁正常黏膜片組（遠離腫瘤浸潤部位5cm以上的胃黏膜片組織）。所有患者在手術前均未接受過化療和放療。組織標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，每個蠟塊取4μm厚連續切片做免疫組化染色，所有病例均經術后組織病理學確診，可參考圖1。

1.2試劑

鼠抗人RegⅠα抗體（IgG）、生物素標記的羊抗鼠IgG抗體和抗生素蛋白（ABC）均由瑞士Dako公司生產。

1.3免疫組化方法

經脫蠟處理的原發性胃癌組織切片在含5g/L鼠抗人RegⅠα 抗體（IgG）的PBS中孵育，4℃過夜；采用生物素標記的羊抗鼠IgG抗體于室溫內孵育20min，后在已混合的ABC孵育20min，采用對二氨基聯苯和過氧化氫顯色1min；陰性對照處理同樣本。

1.4免疫組化結果判斷

所有結果均由兩位病例醫生獨立地按盲法觀察，高倍鏡（×400）隨機取4個不同的視野，記錄細胞總數及陽性細胞數，按陽性細胞所占比例計分：陽性細胞率≤5%為0分，陽性細胞率 ＞5%且≤25%為1分，陽性細胞率＞25%且≤50%為2分，陽性細胞率＞50%為3分；同時根據染色的強弱程度計分：無染色0分，弱染色1分，中等強度染色2分，強染色3分。最終根據二者的乘積判斷結果，≤1分為陰性，＞1分為陽性。

1.5統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件，用配對t檢驗分析RegⅠα蛋白在腫瘤組織和正常對照組的表達，卡方檢驗分析RegⅠα蛋白表達與各種病理參數的關系；隨訪資料的生存分析采用Log-rank檢驗，P＜0.05可認為有統計學差異。

2結果

見表1 、

2.1胃癌組織與癌旁正常胃黏膜組織Reg I α蛋白的表達

免疫組化結果表明，138 例胃癌組織標本中，RegⅠα陽性率為64.1%（89/138），對照組138例癌旁正常組織中RegⅠα陽性率為 20.3%（28/138），統計學分析結果顯示，與癌旁正常組織相比，RegⅠα在胃癌組織中的表達顯著 （P＜0.01） 。

2.2RegⅠα蛋白表達與原發性胃癌發展過程的病理特性

表1顯示，早期胃癌和進展期胃癌的RegⅠα 陽性表達無顯著差異，但進展期分期的Borrmann Ⅳ 期RegⅠα 陽性表達強于其他分期；陽性主要集中在胃竇的癌細胞胞漿中，在幽門和胃體表達較弱；組織分型中，陽性表達最高為印戒細胞癌；淋巴細胞轉移與血行轉移可表達RegⅠα 陽性；臨床分期、分化程度與RegⅠα陽性表達有關 （P＜0.01）；RegⅠα表達與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小均無關。

2.3RegⅠα蛋白表達和原發性胃癌生存率的關系

對138例胃癌患者隨訪2年的生存率結果顯示，胃癌患者RegⅠα 蛋白表達陽性患者和RegⅠα蛋白表達陰性患者的2年生存率分別為34.8 %和84.9 %，差異有統計學意義（P＜ 0.01）。

3 討論

RegⅠα是一組分泌蛋白，其功能相當于急性反應蛋白、抗凋亡因子或胰腺β細胞和神經細胞分泌的生長因子。研究發現它在哺乳動物生理學和人類疾病中有多重角色。Dieckgraefe BK等[3]發現，RegⅠα在胃中表達強度要比腸消化道中高，它參與了消化道黏膜片的增生、分化、抗凋亡、炎癥反應。在最近幾年，有實驗依據支持這些蛋白在腫瘤變化和進展中扮演的角色。RegⅠα可能誘導炎癥中上皮細胞的細胞凋亡[4]。因此本課題的研究旨在考察RegⅠα蛋白的表達在原發性胃癌的發生、發展中扮演的角色和可能的作用及對胃癌患者的生存率的影響。

目前的研究顯示，RegⅠα不但在早期的胃癌中表達，而且還在癌灶鄰近的上皮細胞中有表達，與Sekikawa 等A[1]的試驗結果相似。Yutaka Yonemura[5]用RT-PCR法分析RegⅠαmRNA在112例初期胃癌中87例陽性的免疫組化法分析195例初期胃癌中60例陽性（30.8%）。我們的研究結果為64.13%的RegⅠα蛋白表達，與上述文獻相當。

RegⅠα蛋白表達與淋巴結和靜脈轉移相關，與Fukui H 和Yonemura Y 研究結果相同[6，7]。腫瘤靜脈轉移的發生率RegⅠα蛋白陽性表達比RegⅠα蛋白陰性表達的患者要有意義。本課題發現RegⅠα表達與腫瘤浸潤和腫瘤分期有關，與 Yonemura Y[7]的研究結果相似。胃癌患者RegⅠα 蛋白表達陽性患者和RegⅠα 蛋白表達陰性患者的2年生存率存在顯著性差異，與劉曉光等[8]的研究結果相似。

我們的課題結果提示，RegⅠα在癌細胞中的表達與腫瘤活動是平行的， RegⅠα在腫瘤細胞增長和轉移中扮演著重要角色，可作為評價胃癌預后的參考指標。

[參考文獻]

[1] Sekikawa A，Fukui H，Fujii S，et al. Reg I protein may function as a trophic and/or antiapoptotic factor in the development of gastric cancer.Gastroenterology[J]. 2005，128 （3）：642-653.

[2] Fenoglio-Preiser C，Munoz N，Carneiro F.et al. Gastric carcinoma[R]. In：World Health Organization Classification of tumours.Pathology and genetics of tumours of the digestive system，Lyon： IARC Press，2000：39-52.

[3] Dieckgraefe BK，Crimmins DL，Landt V，et al. Expression of the regenerating gene family in inflammatory bowel disease mucosa：Reg Ⅰα lpha upregulation，processing，and antiapoptotic activity[J]. J Investig Med，2002，50：421-434.

[4] Malka D，Vasseur S，Bodeker H，et al. Tumor necrosis factor alpha triggers antiapoptotic mechanisms in rat pancreatic cells through pancreatitis associated protein I activation[J]. Gastroenterology，2000，119：816-828.

[5] Yamaqishi H，Fukui H，Sekikava A，et al. Expression profile of REG family proteins REG Ⅰ alpha and REG IV in advanced gastric cancer：comparison with mucin phenotype and prognostic markers[J]. Mod Pathol，2009，22 （7）：906-913.

[6]Fukui H，Fujii S，Takeda J，et al. Expression of reg I alpha protein in human gastric cancers[J]. Digestion，2004，69 （3）：177-184.

[7]Yonemura Y，Sakurai S，Yamamoto H，et al. REG gene expression is associated with the infiltrating growth of gastric carcinoma[J]. Cancer，2003，98：1394–1400.

[8]劉曉光，楊月琴，李繼承.原發性胃癌REG Ⅰα蛋白表達與臨床病理特性的相關性研究[J].分子細胞生物學報，2008，3 （1）：573-576.

（收稿日期：2011-05-06）

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