茵陳五苓散對脂肪性肝纖維化小鼠的保護作用

[摘要] 目的 觀察茵陳五苓散對脂肪性肝纖維化小鼠的保護作用。方法 通過復合因素造成小鼠慢性脂肪性肝纖維化病理模型，觀察茵陳五苓散對肝纖維化小鼠肝脾指數、血清ALT、AST水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量的影響。結果 茵陳五苓散各劑量組均能降低脂肪性肝纖維化小鼠肝脾指數、血清ALT、AST水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量，與模型組比較，高、中劑量組差異顯著（P＜0.01或P＜0.05）。結論 茵陳五苓散對復合因素致小鼠慢性脂肪性肝纖維化具有一定的保護作用。

[關鍵詞] 茵陳五苓散；脂肪性肝纖維化；小鼠

[中圖分類號] R965.1[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701（2011）20-13-02

Study on Protective Effects of Yinchenwuling Powder on Fatty Hepatic Fibrosis in Mice

YANG Jianqiao1YAN Qinghe2

1.Department of Internal Medicine，Meilin Community Hospital of Ninghai County of Ningbo City in Zhejiang Province，Ninghai 315609，China；

2.Department of Digests，First People’s Hospital of Ningbo City in Zhejiang Province，Ningbo 315010，China

[Abstract] Objective To evaluate the protective effects of Yinchenwuling powder on fatty hepatic fibrosis in mice. Methods Fatty hepatic fibrosis model was made by multiplex factors in mice. The liver weight index，the spleen weight index，the levels of ALT，AST，HA，PCⅢ，LN and Ⅳ-C in serum of mice were measured. Results All dose groups of Yinchenwulingsan could decreased the liver weight index，the spleen weight index，the levels of ALT，AST， HA，PCⅢ，LN and Ⅳ-C in serum. Compared with model control group，high and moderate dose groups significantly decreased（P＜0.01 or P＜0.05）.Conclusion Yinchenwuling powder has protective effect on fatty hepatic fibrosis in mice induced by multiplex factors.

[Key words] Yinchenwuling powder；Fatty hepatic fibrosis；Mice

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是指肝臟內纖維組織異常增生的病理過程，是一種臨床常見的慢性進行性疾病，可進一步發展成肝硬化[1]。2009年1月～2010年12月，我們采用高脂飼料、酒精、四氯化碳（CCl4）等復合因素造成小鼠脂肪性肝纖維化病理模型，觀察茵陳五苓散對小鼠脂肪性肝纖維化的保護作用，為臨床治療脂肪性肝纖維化提供基礎性資料依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物與試劑茵陳五苓散方中澤瀉、茵陳、白術、茯苓、桂枝等中藥材購自浙江中醫藥大學附屬醫院中藥房，按原方比例配伍，水煎液濃縮成按生藥計濃度為1g/mL，白酒（北京紅星股份有限公司）；膽固醇（上海新興化工試劑研究所）；豬油、花生油（市售），聯苯雙酯滴丸（北京協和藥廠）；CCl4（國藥集團化學試劑有限公司）；丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原 （PCⅢ）、層黏蛋白（LN）、Ⅳ型膠原 （Ⅳ-C）等試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.2動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，由浙江大學醫學動物試驗中心提供，動物合格證號：SCXK（浙）2007-0005。

1.2方法

1.2.1動物分組取小鼠60只，適應性喂養3d后隨機分為6組，即正常對照組、模型組、陽性藥對照組、茵陳五苓散高、中、低劑量組，每組10只。

1.2.2動物模型建立與干預[2]除正常對照組外，其他各組動物于試驗第一天皮下注射40% CCl4花生油溶液0.1mL/10g體重，每周注射2次，造模期間，以20%豬油、79.5%普通飼料、0.5%膽固醇混合而成的高脂飼料飼養小鼠3周后，繼以普通飼料飼養2周，另以10%白酒代替水飲用。造模期間，陽性藥對照組按0.15g/kg給藥量ig聯苯雙酯，茵陳五苓散高、中、低劑量組分別按77.4、51.6、25.8g/kg給藥量灌胃茵陳五苓散水煎液（人體劑量的30、20、10倍），每日1次，正常對照組和模型組給予等體積的生理鹽水。

1.2.3指標檢測及方法于第五周末試驗結束時分別將各組小鼠摘眼球取血，分離血清，按試劑盒方法測定ALT、AST活性及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量；處死小鼠后，摘取肝、脾，稱體質量，計算肝、脾臟器指數。

1.3統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件處理數據，統計學方法采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1茵陳五苓散對脂肪性肝纖維化小鼠肝、脾指數及血清轉氨酶的影響

由表1可知，模型組小鼠肝、脾指數明顯高于正常對照組（P＜0.01），說明酒精、CCl4、高脂飼料等復合因素對小鼠肝功能有損傷作用。陽性藥對照組、茵陳五苓散水煎液各劑量組均能抑制肝纖維化小鼠肝、脾腫大，高、中劑量的茵陳五苓散水煎液與陽性對照藥效果相當。高劑量組與模型組比較差異顯著，具有統計學意義（P＜0.01）；中、低劑量組效果稍弱于高劑量組，與模型組比較差異亦顯著，亦具有統計學意義（P＜0.05）。模型組小鼠血清中AST、ALT水平明顯高于正常對照組（P＜0.01），說明酒精、CCl4、高脂飼料等復合因素對小鼠肝功能有損傷作用。此外，茵陳五苓散水煎液各劑量組均能降低小鼠血清ALT、AST水平，呈劑量依賴性，高劑量的茵陳五苓散水煎液與陽性對照藥效果相當。陽性對照組、茵陳五苓散水煎液高劑量組小鼠血清ALT、AST值與模型組比較，差異具有統計學意義（P＜0.01）；中劑量組效果稍弱于高劑量組，與模型組比較差異亦顯著，具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2茵陳五苓散對脂肪性肝纖維化小鼠肝纖維化指標的影響

由表2可知，模型組小鼠血清中HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量均明顯高于正常對照組（P＜0.01），說明酒精、CCl4、高脂飼料等復合因素致小鼠脂肪性肝纖維化病理模型造模成功。茵陳五苓散水煎液各劑量組均能降低小鼠血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平，呈劑量依賴性，高劑量的茵陳五苓散水煎液與陽性對照藥效果相當。陽性對照組、茵陳五苓散水煎液高、中劑量組小鼠血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C與模型組比較，差異具有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）；低劑量組效果弱于高、中劑量組，與模型組比較差異亦顯著，亦具有統計學意義（P＜0.05）。

3討論

中醫認為，肝纖維化屬于“脅痛”、“黃疸”、“積聚”等病范疇，治療此病宜采用清熱利濕、健脾益氣的治則[3]。茵陳五苓散源自《金匱要略》，是以《傷寒論》中經典方劑五苓散加茵陳而成方。五苓散由澤瀉（15 g）、茯苓（9 g）、豬苓（9 g）、白術（9 g）、桂枝（6g）等藥味組成，方中重用澤瀉為君藥，取其甘淡寒涼之性，直達腎與膀胱，利水滲濕；茯苓、豬苓二藥為臣藥，增強君藥澤瀉利水滲濕之力；白術與桂枝二藥，前者可燥濕健脾、運化水濕，后者可溫經通脈、助陽化氣，共為佐藥。在五苓散組方基礎上加入倍量茵陳（4 g），即可發揮健脾和胃化濁、清熱解毒利濕之功效[4]，具有利濕清熱退黃作用，適用于黃疸諸證。現代藥理研究表明，茵陳五苓散具有顯著的保肝作用，對小鼠免疫性肝損傷、大鼠酒精性肝損傷及大鼠膽汁淤積性肝損傷均具有較強的保護作用[5，6]；茵陳、茯苓、白術均可通過下調血清ALT、AST活性對受損肝細胞起到保護作用，茵陳亦可保護肝細胞并可通過促進膽汁分泌、增加膽汁排泄量，對膽汁淤積性肝損傷起到保護作用[7，8]，茯苓尚可對肝損傷動物免疫功能起到調節作用，澤瀉、豬苓可通過擴張腎血管、增加腎血流量而產生利尿作用，對肝損傷動物疾病恢復起到輔助作用[9]。因此，用茵陳五苓散治療脂肪性肝纖維化，既符合中醫辨證施治理論，又符合現代藥理理論。

CCl4進入動物機體后，在肝內經氧化而形成自由基，后者可啟動脂質過氧化作用，破壞肝細胞膜，導致肝細胞變性壞死[10]。而CCl4結合酒精、高脂飼料等復合因素的方法制造動物肝纖維化模型，可加速脂肪性肝纖維化的形成，造模成功率高[2]。

本研究結果表明，高脂飼料、酒精、結合CCl4等復合因素的造模方法可行，實驗中小鼠肝纖維化病理模型造模成功；茵陳五苓散水煎液25.8、51.6、77.4g/kg劑量組均能不同程度地降低復合因素致脂肪性肝纖維化小鼠肝、脾指數及血清ALT、AST等肝功能指標水平，并可顯著降低小鼠血清中HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C等肝纖維化指標含量，表明茵陳五苓散在保護復合因素致小鼠肝纖維化方面有較好的效果，但其作用機制與臨床應用尚有待于進一步探討。

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（收稿日期：2011-04-15）

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