決明子\\枸杞果\\綠茶對非酒精性脂肪肝小鼠血脂代謝的影響對比

作者單位：300270 天津醫科大學臨床醫學院

通訊作者：蘇賀靖

【摘要】 目的 對比決明子、枸杞果、綠茶對非酒精性脂肪肝模型小鼠血脂代謝以及脂肪肝發展的影響情況。方法 采用高脂飲食法（high fat diet，HFD）建立非酒精性脂肪肝小鼠模型，用決明子、枸杞果、綠茶濃縮液分別對甲、乙、丙三組予以灌胃治療，同時對丁組模型對照組和戊組空白對照組予等量的生理鹽水灌胃。經過4周喂養后，每2周在各組分別取5只小鼠進行解剖，取肝臟做石蠟切片進行組織病理學觀察。同時采集靜脈血，采用全自動生化分析儀檢測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）以及高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）（n＝5），并取肝臟，制肝勻漿，測定LTG、LTC。結果 模型治療組與兩對照組相比，HDL-C有所升高，差異有統計學意義（P<0.05），TC、TG、ALT、AST、LDL－C、LTG、LTC明顯降低，差異有統計學意義（P<0.01）。結論 決明子、枸杞果、綠茶對于非酒精性脂肪肝模型對肝臟脂肪沉積以及肝內炎癥發展均有一定程度的抑制作用，其抑制強度分別為決明子>枸杞果>綠茶。

【關鍵詞】 決明子 ； 枸杞果； 綠茶； 脂肪肝； 血脂代謝； 肝指數

Cassia seed， wolfberry fruit and green tea for non-alcoholic fatty liver lipid metabolism in mice compared YAO Peng，ZHANG Yu，QI An-long，HUANG Ke-nan，LIU Tao，WANG Wei，SHEN Jia-jia，REN Ting-yuan，SU He-jing，ZHANG Jie，ZHU Min.Tianjin Medical University，School of Clinical Medicine，Tianjin 300270，China

【Abstract】 Objective To contrast cassia seed， wolfberry fruit and green tea of non-alcoholic fatty liver lipid metabolism of model mice and affect the development of situation.Methods To establish the mouse model of non-alcoholic fatty liver with the high fat diet （high fat diet， HFD）， which was given concentrates of cassia seed， wolfberry fruit and green tea to A， B， C three groups respectively with stomach treatment， meanwhile to the E control group and D model control group fed the same amount of saline. After 4 weeks' feeding， dissected 5 mice respectively from each group every 2 weeks，made the paraffin section of mouse liver for histopathological observation.Collected the venous blood serum and the liver homogenate then detected total cholesterol （TC），triglyceride （TG）， alanine aminotransferase（ALT）， aspartate aminotransferase （AST）， low-density lipoprotein cholesterol （LDLC） and high density lipoprotein cholesterol （HDL-C） （n5） in blood serum and determine the LTG， LTC of liver homogenate by automatic biochemical analyzer.Results Compared with two control groups，HDL-C is higher in model treatment group， so the variation is remarkably （P<0.05），TC、TG、ALT、AST、LDL－C、LTG、LTC level is obviously decreased，the the variation is remarkably （P<0.01）.Conclusion It suggested that the three materials can significantly improved the fuction of liver and reduce the tissue damage and inhibite the fatty liver degeneration， which the intension of inhibition is cassia> medlar> green tea.

【Key words】 Cassia seed； Wolfberry； Green tea； Adiposis hepatica； Lipidemia； Hepatic index

脂肪肝是由多種原因引起的肝臟脂肪性病變，當肝細胞內脂質蓄積超過5%，或組織學上每單位面積1/3以上肝細胞脂變時，稱為脂肪肝。近年來，由于生活習慣、飲食結構等多種因素的影響，我國脂肪肝發病率有逐漸增加的趨勢，雖然脂肪肝常被認為是良性病變，但大量資料表明，部分脂肪肝患者可發展為肝纖維化，甚至肝硬化，可以認為脂肪肝是肝纖維化及肝硬化的前期病變。高脂血癥作為引發脂肪肝第一大因素，其也是引發心腦血管疾病危險因子。近年來決明子、枸杞果、綠茶作為降脂保健品，越來越受到人們的關注，對它們的研究也越來越深入^［1］。國內外對它們的藥理研究及臨床應用方面取得不少新進展，它們都具有降低血清膽固醇、甘油三酯的作用，其藥理價值也受到人們的關注。決明子除含有糖類、蛋白質、脂肪外，還含類固醇化合物、大黃酚、大黃素、決明素、鈍葉決明素等，還有人體必需的微量元素鐵、鋅、錳、銅、鎳、鈷、鉬等^［2］。其中大黃素葡萄糖甙、大黃素蒽酮、大黃素甲醚，具有降低血清膽固醇、甘油三酯和強心作用，并且能升高高密度脂蛋白、降低低密度脂蛋白。枸杞果含有甜菜鹼、多糖、粗脂肪、粗蛋白、胡蘿卜素、維生素A、維生素C、維生素B₁、維生素B₂及鈣、磷、鐵、鋅、錳、亞油酸等營養成分，具有防止動脈粥樣硬化、抑制脂肪肝、促進肝細胞再生的功效^［3］。綠茶的主要成份是茶多酚、咖啡堿、脂多糖、茶氨酸、維生素C等。尤其茶多酚中的兒茶素能降低血漿中總膽固醇、游離膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇，以及三酸甘油酯，同時可以增加高密度脂蛋白膽固醇，抑制動脈粥樣硬化發生。但是，目前探討決明子、枸杞果、綠茶影響血脂代謝發展的療效對比的研究并不多^［4］。為此筆者通過決明子、枸杞果、綠茶濃縮液灌喂用高脂、高膽固醇飲食建立非酒精性脂肪肝模型小鼠，觀察血脂代謝的變化情況，為更深入的科研工作提供一些基礎數據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 KM小鼠，清潔級，小鼠平均體重為21.3 g，波動范圍在1.4 g上下。

1.2 實驗試劑 膽固醇（上海源聚生物科技有限公司生產，批號：080502）；膽酸（中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號：20070120）；豬油、蛋黃粉、普通飼料、決明子、枸杞果、綠茶（市購）；生理鹽水。

1.3 實驗儀器 美國貝克曼CX5 PRO全自動生化分析儀，尼康YS100和尼康E200顯微鏡、加拿大PixeLINK顯微攝像系統，上海良平儀器儀表公司JA3003電子天平，沈陽龍首電子儀器公司LS-2055AT的全自動石蠟切片機。

1.4 動物分組及處理 30日齡以上雌鼠250只，隨機取其中125只，并把125只KM小鼠隨機分為5組，空白對照組予以普通飼料，其余4組采用高脂飲食建立的非酒精性脂肪肝模型。給予高脂飼料飼（10%豬油，10%蛋黃粉，4%膽固醇，1%膽酸，75%普通飼料），飼喂4周后每組解剖5只^［5，6］，病理證實小鼠非酒精性脂肪肝模型已形成，予以灌喂治療。甲、乙、丙三組為治療組，丁組為模型對照組，戊組為空白對照組，甲組經灌喂予決明子濃縮液，乙組經灌喂給予枸杞果濃縮液，丙組經灌喂予綠茶濃縮液，丁、戊組同時予等量的生理鹽水灌喂對照，每天早晚9點各灌喂一次；每次每只小鼠灌喂量為10 mg/kg，各組按原飼料進行飼養^［7，8］。實驗開始后每2周各組動物均取5只解剖，取肝作組織病理學觀察，了解其病理變化情況，同時采集靜脈血，分離血清，采用全自動生化分析儀，測定TC、TG、ALT、AST、HDL－C和LDL－C濃度，并取肝臟，制肝勻漿，測定LTG、LTC。

表1 KM小鼠分組及不同飲食喂養情況

1.5 觀測指標及檢測

1.5.1 一般項目 觀察動物的體重、飲食、毛發、活動情況、肝/體重比等。

1.5.2 血脂檢測 于動物處死前，采取各組動物血液分離血清，采用生化分析儀測定。

1.5.3 病理學觀察 取肝左葉用10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片，HE染色^［9］，作肝組織病理學觀察，光學顯微鏡下拍照記錄，了解炎癥改善情況和組織脂肪變性的程度。

1.6 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，等級資料用t檢驗，計數資料用χ²檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 小鼠的一般情況 實驗期間空白對照組（戊）精力充沛，靈活好動，飲食正常，皮毛整潔，體重緩慢增加；模型對照組（丁）飲食量大，嗜睡，毛色偏黃，個體較大，體重增長較正常組較快；模型治療組（甲、乙、丙）較模型對照組飲食量較小，活動增加，毛色偏黃，個體較小，體重增長較慢。模型治療乙組和丙組較甲組，活動減少、皮毛凌亂，有不同程度的精神萎靡。

2.2 體重和肝指數 模型治療組較模型對照組，小鼠體重變化較小，肝指數有明顯降低，其中甲組降低明顯（P<0.01），見表2。

表2 各組小鼠體重、肝指數變化情況

2.3 血液指標 5組小鼠采集靜脈血，分離血清觀察查血脂情況的改變見表3。

2.4 肝臟病理學變化

2.4.1 肉眼觀察 實驗開始時空白對照組（戊組）小鼠肝臟形態顏色均正常，其余4組模型組小鼠肝臟體積增大，包膜緊張，色澤灰黃，切面油膩。治療開始2周后模型治療組，甲組小鼠包膜緊張，邊緣較鈍，質地略軟，色變灰，表面呈花斑狀，觸之似泥塊并有油膩感，部分小鼠肝臟有黃白色的局灶性脂肪沉積，乙、丙兩組較之甲組色黃，質地較硬。模型對照組（丁組）小鼠脂肪肝無改善，空白對照組 （戊組）小鼠肝臟形態正常。治療開始4周后模型治療組，甲組小鼠肝臟切面油膩，外形稍飽滿圓鈍，質地略軟，色灰，乙、丙兩組較之甲組改變較小。模型對照組（丁組）小鼠脂肪肝無改善，戊組（空白對照組）小鼠肝臟形態正常。治療開始6周后模型治療組甲組小鼠肝臟外形飽滿圓鈍，質地較脆，色灰白，乙、丙兩組小鼠肝臟切面油膩，質地略軟，色灰黃。模型對照組（丁組）小鼠脂肪肝加重，空白對照組 （戊組）小鼠肝臟形態正常。治療結束時模型治療組，甲組小鼠肝臟外形飽滿圓鈍，質地較脆，色灰紅（圖A），乙組小鼠肝臟外形飽滿，質地較軟，色灰白（圖B），丙組小鼠肝臟切面油膩，質地略軟，色灰白（圖C）。模型對照組（丁組）小鼠脂肪肝加重，臟體積明顯增大，包膜緊張，邊緣較鈍，色黃，切面油膩（圖D）。空白對照組（戊組）小鼠肝臟形態正常（圖E）。

2.4.2 光鏡觀察 在10×40倍光鏡下，HE染色。正常對照組（戊組）肝小葉結構正常，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列。無肝細胞腫脹及脂肪變（見圖1）；治療開始2周后模型對照組（丁組）小鼠肝組織HE染色顯示：小鼠肝臟呈中度脂肪變（見圖2），且肝臟脂肪變性程度明顯高于模型治療組（甲、乙、丙組）小鼠。模型治療組（甲、乙、丙組）的三組小鼠中，甲組小鼠較乙組和丙組小鼠小葉內脂變程度輕 （見圖3）；治療開始6周后模型對照組（丁組）小鼠肝組織HE染色顯示小鼠呈中重度的大泡性脂肪變，脂滴分布密度增大并可見脂滴融合（見圖4）。模型治療組（甲、乙、丙組）的三組小鼠中，甲組小鼠較乙組和丙組小鼠小葉內炎癥程較輕，肝內脂肪滴明顯減少，乙、丙兩組小鼠肝內炎癥情況也有不同程度的降低；實驗結束時模型對照組（丁組）小鼠肝組織HE染色可見大部分肝細胞漿含大脂滴，部分脂滴形成大空泡，將細胞核擠壓至一邊，且以中央靜脈周圍為甚；肝小葉結構破壞，肝細胞排列不規整，并伴大量肝細胞腫脹，脂滴融合形成脂囊（見圖5），模型治療組（甲、乙、丙組）的三組小鼠輕微的肝細胞脂肪變性，其中，甲組小鼠較乙組和丙組小鼠小葉內炎癥程較輕，肝內脂滴明顯減少，乙、丙兩組小鼠肝內匯管區及小葉內炎癥細胞浸潤和散在的點狀壞死，其炎癥情況也有不同程度的降低（見圖6）。

3 討論

本實驗選用作為養生佳品的決明子、枸杞果和綠茶的濃縮液來治療由高脂飲食法建立的非酒精性脂肪肝小鼠模型，經過一段實驗周期后，測定其血液指標并制作病理切片，來研究三種濃縮液對血脂代謝的影響情況。通過對比表明，決明子、枸杞果、綠茶均在不同程度上具有抑制肝臟脂肪沉積和抗肝組織損傷以及脂肪變性的作用^［10］，其影響程度為決明子>枸杞果>綠茶。雖然實驗在模型小鼠上取得了較明顯的效果，但小鼠與人在脂類代謝機制上有很多不同之處，因此在臨床應用上還有待進一步探討。加之實驗條件有限，實驗數據的收集和整理也有很多不完善之處，希望與大家共同探討研究。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2011-04-07）

（本文編輯：王春蕓）