TGF-α在結腸癌組織的表達及臨床意義

【摘要】 目的 轉化生長因子α（TGF-α）是細胞因子家族中發現較早的一類生長因子，參與調節正常細胞和腫瘤細胞生長和分化促進細胞內DNA合成，可致細胞惡性變。本研究通過檢測結腸癌患者組織中TGF-α的表達，旨在探討TGF-α在結腸癌組織中的表達與結腸癌臨床治療的關系。方法 選取本院2005年9月~2010年9月手術切除后的結腸癌組織石蠟標本60例，選取結腸鏡下慢性結腸炎活檢標本60例作為對照。兩批標本均進行連續切片并行免疫組織化學染色檢測TGF-α。用SPSS 11.5統計軟件進行數據處理，P<0.05為有統計學意義。結果 TGF-α在慢性結腸炎組不表達，在60例結腸癌中共43例陽性表達，陽性率為71.6%，結腸癌組織的陽性率明顯高于慢性結腸炎組織，兩者比較差異有統計學意義。TGF-α在結腸癌組織中的表達與結腸癌的臨床病理分期密切相關。結論 TGF-α在結腸癌發生發展中起重要作用，參與了結腸癌的形成，且與結腸癌的侵襲、轉移及預后密切相關。對評價結腸癌的進展程度、有無轉移和預后有一定的參考價值，為治療方案的選擇提供了臨床依據。

【關鍵詞】 結腸癌； TGF-α

TGF-α expression in colon cancer and its clinical significance CAO Feng-jun， HUANG Dong-li，JIANG Wei-ming.Changyi Peoples Hospital in Shandong Province， Changyi 261200，China

【Abstract】 Objective Transforming growth factor α (TGF-α) was a cytokine family discovered a class of early growth factors involved in regulating normal cell and tumor cell growth and differentiation to promote cell DNA synthesis，could cause m alignant change.The detection of colon cancer tissue by TGF-α expression，to investigate the TGF-α expression in colon cancer and the relationship between the clinical treatment of colon cancer.Methods Shandong Changyi Peoples Hospital 2005.9-2010.9 of colon cancer after surgical resection specimens of 60 cases of paraffin，selected colonoscopy biopsy specimens of 60 cases of chronic colitis as controls.Two groups of specimens were examined for both parallel immunohistochemical staining TGF-α.SPSS11.5 statistical software with data processing，P <0.05 was considered statistically significant.Results TGF-α was not expressed in the chronic colitis group，60 cases of colon cancer in 31 patients with positive expression of the CPC， the positive rate was 71.6%， colon cancer tissue were significantly higher than that of chronic colitis， the difference was statistically Significance. And TGF-α expression in colon cancer and colon cancer are closely related to clinical staging.Conclusion TGF-α in the development of colon cancer play an important role in the formation of colon cancer and colon cancer invasion，metastasis and prognosis of relations.Evaluation of the extent of the progress of colon cancer，metastasis and prognosis of some reference value for the choice of treatment provides a clinical basis.

【Key words】 Colon cancer; TGF-α

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目前研究認為，結腸癌發病是一個多因素、多步驟、多基因參與的復雜病理過程，涉及到多種癌基因、DNA修復基因、生長因子/受體等的變化。TGF-α是表皮生長因子(EGF)家族的重要成員。結腸黏膜癌前病變與TGF-α過表達有關，提示TGF-α與結腸癌的發生發展關系密切。本研究采用免疫組化法檢測TGF-α在結腸癌組織中的表達，并探討結腸癌的發生及臨床病理參數之間的關系，進一步明確結腸癌發生發展的相關機制，為結腸癌的臨床診斷和治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇筆者所在醫院2005年9月~2010年9月手術切除后的結腸癌組織石蠟標本60例，選取結腸鏡下慢性結腸炎活檢標本60例作為對照。兩批標本均進行連續切片并行免疫組織化學染色檢測TGF-α。其中，兩類標本均為男39例，女21例。結腸癌標本組≥60歲34例，<60歲26例，平均年齡58.56歲；慢性結腸炎標本組≥60歲39例，<60歲21例，平均年齡56.32歲。所選結腸癌病人術前均未行放化療，并且排除結腸癌家族史。病理分型、分級和病變范圍的確定以手術后病理檢查結果為依據，根據手術中所見記錄腫瘤部位、大小、大體類型、漿膜受侵犯及器官轉移情況。根據國際抗癌聯盟（UICC）關于結腸癌TNM分期法進行臨床分期。

1.2 實驗器材及試劑 Olympus XQ-240電子內鏡、Olympus病理圖像采集分析系統、病理組織漂洪儀、Leica RM2015切片機、10%中性福爾馬林、濃縮型DAB試劑、正常山羊血清工作液、生物素化二抗工作液、辣根酶標記鏈酶卵白素工作液、枸櫞酸鹽緩沖液兔抗人EGFR單克隆抗體、鼠抗人轉化生長因子α單克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體、濃縮型DAB試劑、PV-9000通用型二步法檢測試劑盒。

1.3 實驗方法 免疫組織化學染色：石蠟切片脫蠟。蒸餾水沖洗，PBS浸泡，高壓熱修復抗原；切片脫蠟入水，蒸餾水沖洗；滴加兔抗人EGFR單克隆抗體、 鼠抗人轉化生長因子α單克隆抗體（TGF-α），PBS沖洗；滴加PV-9000通用型二步檢測試劑1（polymer helper），室溫孵育，PBS沖洗；滴加試劑2（poly perocidase-anti-mouse/rabbit IgG），室溫孵育， PBS沖洗DAB顯色；自來水沖洗，蘇木素復染，脫水透明，中性樹膠封片。對照設計：免疫組織化學實驗同時需要設立陰性對照，以PBS代替一抗進行免疫組織化學染色，余步驟同前，以已知的陽性切片做陽性對照。染色結果的判定以細胞內(胞漿或胞核)含有棕黃色染色顆粒為陽性染色細胞。

1.4 統計學處理 應用SPSS 11.0統計軟件包進行分析，計數資料比較采用卡方檢驗。檢驗水準為α=0.01。

2 結果

Olmpus病理圖像采集系統采集圖片，同機病理圖像分析系統分析。綜合結果進行判斷： TGF-α主要表達于胞漿。染色陽性以細胞膜和(或)細胞漿呈棕色顆粒狀染色為標準，且著色明顯高于背景或背景不著色而細胞著色者為陽性細胞染色。

2.1 TGF-α在結腸炎黏膜、結腸癌組織中的表達 結腸炎中TGF-α無表達，結腸癌中陽性表達率為71.6%，結腸癌組織中陽性表達率明顯高于結腸炎。

2.2 TGF-α在結腸癌中的表達與其生物學行為之間的關系 TGF-α在結腸癌中的表達與患者年齡、性別、病變部位、浸潤深度、淋巴結轉移及分化程度無關，而與臨床分期密切相關，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的陽性率為48.7%，Ⅲ+Ⅳ期的陽性率為85.7%，差異有統計學意義（P<0.01）。見表1。

3 討論

TGF-α是細胞因子家族中發現較早的一類生長因子，于20世紀70 年代末，首先從幾種實體腫瘤細胞介質中得到分離，并鑒定為一種多肽類生長因子。TGF-α的生物功能廣泛而復雜，取決于其傳遞方式及靶細胞的生理狀態。除在早期的胚胎發育中存在外，正常組織產生的TGF-α量很少，多種腫瘤細胞系可產生TGF-α，在對卵巢癌、結腸癌、子宮內膜癌、胃癌等的研究中均發現TGF-α表達時與腫瘤不良預后及短生存率有關。但近年來有相反的報道，在對甲狀腺癌、子宮內膜癌、外陰癌的研究中發現， TGF-α有抑制細胞增殖的作用［1］。TGF-α的適度表達可以促進黏膜損傷后的修復，但它對多種上皮組織的促增殖作用卻提示TGF-α具有潛在的致癌或促癌作用。一方面過表達的TGF-α能誘導c-myc和c-fos等癌基因的表達，刺激腫瘤細胞通過自分泌

作用與EGFR形成自身環路，另一方面， TGF-α可能與結腸癌中過表達的EGF家族其他成員，如兩性蛋白(AR)、肝素結合生長因子(HB-EGF)Cript和pS2(雌激素調節蛋白)共同參與了黏膜的癌變和進展。實體瘤快速生長離不開血管的生成，新生的血管網絡系統為腫瘤的生長提供充分的營養物質，以助腫瘤細胞快速增殖［2］。TGF-α的致癌作用常表現為與其他因素的共同作用。有研究證明，豚鼠胰腺導管上皮細胞在惡性轉化過程中出現TGF-α的過量表達，提示它可能與胰腺癌的起源有關［3］。Chu等［4］發現，部分肝細胞癌及其癌旁組織表達TGF-α，且與HBSAg 有密切關系。所以認為，TGF-α在肝癌發生發展中有重要作用。有研究顯示，某些腫瘤中的TGF-α水平與腫瘤細胞的惡性程度呈線性關系，如腦膠質瘤［5］。Alberto等［6］發現，TGF-α在結腸癌和結腸炎性病組織中有高表達，認為TGF-α與結腸癌細胞增生和刺激DNA 合成有關。多種結腸黏膜癌前病變與TGF-α過表達有關，提示TGF-α與結腸癌的發生發展關系密切。Filipe等［7］運用免疫組化法對25例結腸癌患者(結腸癌組)和56例結腸潰瘍和慢性結腸炎患者(結腸病組)的對比分析顯示，結腸癌組TGF-α的表達強度明顯高于結腸病組，其表達強度在結腸病組正常黏膜區、結腸癌組正常黏膜區、結腸病組腸化區、結腸癌組腸化區和結腸癌組不典型增生區逐漸增強。這提示了TGF-α的過表達與多種結腸黏膜癌前病變有關，可能是結腸癌形成的一個重要因素［8］。有學者采用放射免疫法對手術前后結腸癌患者血清TGF-α水平進行了比較，發現手術后血清TGF-α水平明顯低于手術前，提示動態檢測血清TGF-α水平對評價結腸癌治療療效有一定的參考價值［9］。

本研究采用免疫組化法檢測60例結腸癌組織中TGF-α，結果顯示43例呈陽性表達，陽性率71.6%，在慢性結腸炎組織中的陽性表達率為0%，兩者比較差異具有統計學意義(P<0.01)；TGF-α在結腸癌組織中的陽性表達水平與結腸癌患者的性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結轉移、浸潤深度、分化程度無關，而與臨床分期有關，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的陽性率為48.7%，Ⅲ+Ⅳ期的陽性率為85.7%，差異有顯著性（P<0.01），可作為惡性程度的參考指標。在正常組織中，TGF-α呈低表達，表達水平的升高有利于腫瘤的早期診斷。TGF-α可通過多種途徑促進腫瘤的發生發展，與結腸癌的生長及預后均有關，因此可成為檢測結腸癌發生和判斷預后的標志物，有助于選擇治療方案。對TGF-α的深入研究，將更有效的提高結腸癌的防治水平。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2011-09-26）

（本文編輯：梅宏偉）