實時熒光核酸恒溫擴增技術檢測尿液中沙眼衣原體的分析

[摘要] 目的 評價實時熒光核酸恒溫擴增技術（SAT）檢測尿液中沙眼衣原體（CT）的特異性和敏感性。方法 對175例疑似患者生殖道拭子行CT-SAT、PCR檢測和沙眼衣原體培養，同時對對應的175份尿液標本行CT-SAT檢測。結果 SAT對同一患者的拭子標本和尿液標本的檢測結果符合率100%。1例淋球菌培養陰性而SAT陽性，2例PCR陽性而SAT陰性。結論 SAT技術檢測拭子及尿液中的沙眼衣原體具有很高的靈敏度和特異性，為CT的實驗室診斷提供新的檢測方法。

[關鍵詞] 沙眼衣原體；SAT； PCR；培養；尿液

[中圖分類號] R374.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）22-124-02

Real-time Fluorescence Detection of Nucleic Acid Amplification Constant Urine Analysis of Chlamydia Trachomatis

SUN Yuhua CHEN Feng CAI Ruiyun

Guangji Hospital in Dongguan City of Guangdong Province，Dongguan 523690，China

[Abstract] Objective To evaluate the real-time isothermal nucleic acid amplification fluorescence（SAT） Chlamydia trachomatis in urine（CT） of the specificity and sensitivity. Methods 175 cases of suspected patients of genital swab line CT-SAT，PCR testing and Chlamydia trachomatis culture，while the corresponding urine specimens of 175 CT-SAT test. Results SAT on the same source swab specimens and urine samples consistent results：Case of SAT-positive and N.gonorrhoeae culture-negative，2 SAT-negative and PCR positive. Conclusion SAT swabs and urine detection of Chlamydia trachomatis with high sensitivity and specificity of laboratory diagnosis for the CT to provide a new detection method.

[Key words] Chlamydia trachomatis； SAT； PCR； Culture；Urine

實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（simultaneous amplification and testing，SAT）是將新一代的核酸恒溫擴增技術和實時熒光檢測技術相結合的一種新型核酸檢測技術，該技術具有高靈敏度、高特異性、低污染、反應穩定等優點。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑

CT-SAT試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，PCR試劑盒由深圳匹基生物工程有限公司提供，沙眼衣原體培養使用Mc Coy培養皿，實時熒光核酸擴增儀為杭州博日科技有限公司生產。

1.2 標本來源

2009年9月～2010年7月來本院就診的疑似患者175例，其中男62例，女113例，每份患者取3份分泌物拭子標本和1份尿液標本。

1.3 標本采集

準備3個無菌拭子，分別以A、B、C標示。B號拭子的管內加入1mL無菌生理鹽水，C號拭子的管內加入1.5mL無菌生理鹽水。患者采樣前2h不排尿，取材方法按常規操作[1]。即男性患者由尿道口內3cm處、女性患者由宮頸口內1～1.5cm處取材。棉拭插至取材處后，轉動并停留數秒種后取出。A拭子用于淋球菌培養，1h內盡快接種。B拭子取后-20℃冰箱保存，作PCR測定待用。C拭子取后取1mL混合液至專用尿液保存液（試劑盒提供）中，混勻，-20℃冰箱保存，作CT- SAT測定待用。另取1mL首段尿液至專用尿液保存液（試劑盒提供）中混勻，-20℃冰箱保存，用于CT-SAT測定待用。

1.4 檢測方法

尿液標本和拭子標本從冰箱取出，平衡至室溫同時行CT-SAT檢測，按照試劑盒說明書進行操作。

1.5 沙眼衣原體培養

見參考文獻[1]。

1.6 統計學分析

應用SPSS10.0軟件對數據進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 SAT、PCR及沙眼衣原體培養的檢測

SAT檢測的陽性63例尿液標本其對應的63例拭子標本SAT檢測也是陽性，符合率100%，1例沙眼衣原體培養陰性而SAT陽性，2例PCR陽性而SAT陰性。尿液標本不適用于PCR和沙眼衣原體培養，故均以拭子結果為參照[4]。見表1。

2.2 CT-SAT檢測的敏感性及特異性

與沙眼衣原體培養結果作比較，CT-SAT尿液/拭子標本的檢測靈敏度為98.41%（62/63），特異性為99.11%（112/113），經χ2檢驗，差異無顯著性（χ2=0.01，P＞0.05）；與PCR結果作對比，CT-SAT尿液/拭子標本的檢測靈敏度為100%（63/63），特異性為98.21%（110/112），經χ2檢驗，差異無顯著性（χ2=0.05，P＞0.05）。見表1。

2.3 CT-SAT法對拭子標本和尿液標本檢測結果的符合率分析

CT-SAT法對175例患者的拭子標本和尿液標本進行檢測，兩組標本檢測結果的符合率為100%，差異無顯著性（P＞0.05）。

3 討論

目前CT檢測都是以患者的泌尿生殖道分泌物進行沙眼衣原體抗原檢測、沙眼衣原體培養和/或PCR檢測。取生殖道分泌物容易增加患者的取樣痛苦，同時幾種檢測方法在敏感性和特異性上都有不足。沙眼衣原體抗原檢測多用膠體金試劑，陽性率都較低容易造成女性患者尿道感染的漏檢。沙眼衣原體培養的敏感性和特異性都較好，但是耗時長。PCR檢測的是DNA，患者治療后病灶處殘留的DNA包括殺死后還沒排出的菌體DNA都會導致PCR陽性結果。病人經治療后病菌死亡、癥狀消失即可判為治愈，如果要等PCR轉陰，勢必造成過度治療[2]。本研究中有2例PCR陽性而CT-SAT及沙眼衣原體培養均陰性就是這種情況。CT-SAT檢測病原菌體RNA，RNA在死亡的病原體中快速降解，活菌中才有完整的RNA片段，故能排除患者治療后病灶處的殘留物對檢測結果的影響，有利于臨床用藥后的療效監測及判愈。在175例標本中1例CT-SAT陽性，而沙眼衣原體培養陰性，可能是沙眼衣原體培養敏感性不足的原因，此例標本經PCR實驗后得到驗證，也證明了CT-SAT的高靈敏度。而且CT-SAT可以對尿液標本進行檢測，尿液作為一種非侵入性的取樣標本，取樣方便，減少了患者采樣的痛苦，也減少了醫生的工作量[3]。RNA在環境中極不穩定，容易降解，大大降低了交叉污染概率及環境污染[4]。

本研究顯示，利用SAT技術檢測沙眼衣原體，不僅特異性好，靈敏度高，可用于臨床用藥后的療效監測及判愈，而且尿液標本可以代替拭子標本。在臨床應用中表現出采樣方便、耗時短、低污染、結果準確可靠等優點，為沙眼衣原體的實驗室診斷提供新的采樣方式和檢測方法[5]，是一種值得推廣的檢測方法。

[參考文獻]

[1] 葉順章.性傳播疾病的實驗室診斷[M].北京：科學出版社，2001：73-81.

[2]葉順章，王千秋，王荷英，等. PCR檢驗技術在性病臨床標本實驗診斷中應用價值的研究[J].中國皮膚性病學雜志，2002，16（1）：6-8.

[3] 王彬.泌尿生殖道支原體感染的特征及藥敏結果分析[J].中國當代醫藥，2010，17（4）：123-124.

[4] Lowe P，Oloughin P，Evans，et al.Comparison of the gen-probe APTMA Combo-assay to the AMPL ICOR CT/NG assay for detection of Chlam ydia trachamatis and neisseria gonorrhoeae in urine samples from Austrlian men and women[J].J Clin Microbiol，2006，44（7）：2619-2621.

[5] 王寶璽，朱學駿，倪安平，等.細胞培養、連接酶鏈反應和六種聚合酶鏈反應試劑盒檢測沙眼衣原體的比較研究[J].中華皮膚科雜志，2001，343：181-183.

（收稿日期：2011-03-10）