RP-HPLC法測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量

孫艷 張群

新疆維吾爾自治區伊犁州友誼醫院，新疆伊寧 835000

RP-HPLC法測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量

孫艷 張群

新疆維吾爾自治區伊犁州友誼醫院，新疆伊寧 835000

目的 建立RP-HPLC法測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量的方法。方法采用反相高效液相色譜，色譜柱：Zirchrom C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，檢測波長403 nm；柱溫30℃；流速1 mL/min。結果 羥基紅花黃色素A在0.0 408～0.3 264 μg內線性良好，y=644 726.015 4×-2058.071 4，r=0.999 9，回收率為101.73%，RSD為1.65%。結論 采用該方法進行含量測定準確可靠，重現性好，對谷紅注射液的質量控制有重要意義。

HPLC；谷紅注射液；羥基紅花黃色素A

谷紅注射液為中西藥復方制劑，為乙酰谷酰胺和紅花提取物制成的滅菌水溶液，主要用于治療腦血管疾病和腦供血不足，腦血栓，腦栓塞及腦出血恢復期，還可以用于治療冠心病，脈管炎等。該制劑的現行質量標準只是采用高效液相法對乙酰谷酰胺進行了質量控制，對紅花提取物未作相關研究。查閱國內文獻，發現從紅花提取物角度進行研究的文獻僅有寥寥數篇。該研究建立了反相高效液相色譜法測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A含量的方法，較文獻報道的方法方便快捷，縮短了出峰時間，對谷紅注射液的質量控制起到一定的指導作用。

1 儀器與材料

Waters 2695；Sartorius BS210S型電子天平；UV-2490型紫外分光光度計；SK5200HP超聲波清洗器。谷紅注射液，博安兄弟制藥（中國）有限公司生產20mL/支，批號為20110723，20110724，20110725；羥基紅花黃色素A對照品，購于中國藥品生物制品檢定所，批號：111637-200905；甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Zirchrom C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測波長403 nm；柱溫 30℃；流速 1 mL/min，進樣量 10 μL。所選擇的流動相為甲醇-0.5%磷酸水(40∶60)等度洗脫。理論板數按羥基紅花黃色素A峰計，應不低于5500。精密吸取供試品溶液、流動相、對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，流動相在此峰位無吸收，對羥基紅花黃色素A的含量測定無干擾，方法專屬性良好。見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取2.04 mg羥基紅花黃色素A對照品置于100 mL的容量瓶中，25%甲醇定容至刻度，濃度為0.020 4 mg/mL，作為對照品，置于4℃冰箱備用。

2.3 供試品的制備

精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

圖1 谷紅注射液及對照品色譜圖

2.4 標準曲線的建立

取對照品溶液 2、4、6、8、10、12、14、16 μL 進樣， 以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標做標準曲線，得回歸方程：y=644 726.015 4×-2 058.071 4,r=0.999 9。表明當進樣量在0.040 8～0.326 4 μg內，羥基紅花黃色素A線性關系良好。其標準曲線見圖2。

圖2 標準曲線圖

2.5 精密度的測定

精密吸取對照品10 μL進樣，連續6次。羥基紅花黃色素A的RSD分別為0.85%。表明儀器精密度良好。

2.6 重復性的測定

按2.3項下方法制備供試品6份，過0.22 μm的微孔濾膜，取10 μL進樣，羥基紅花黃色素A的平均含量分別為0.25 mg/mL；RSD分別為1.22%。表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性的考察

按 2.3 項下配制供試品， 在 0，2，4，6，8，10 h 取 10 μL 進樣測定，羥基紅花黃色素A的平均含量分別為0.25 mg/mL；RSD分別為1.55%。表明樣品溶液在10 h內穩定性良好。

2.8 加樣回收率

精密稱量已知含量的樣品1 mL置于50 mL容量瓶，加入定量的對照品，甲醇定容至刻度。精密吸取10 μL進樣，羥基紅花黃色素A的加樣回收率分別為104.9%；RSD分別為1.64%，見表1。

表1 加樣回收率結果

2.9 樣品測定

按2.3項下配制樣品，精密吸取10 μL進樣，見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取適量羥基紅花黃色素A，加水制成每1 mL含羥基紅花黃色素A 0.5 mg的溶液，在200～800 nm波長內掃描，結果顯示，羥基紅花黃色素A的403 nm處呈現最大吸收，因此選擇403 nm作為檢測波長。

表2 樣品中羥基紅花黃色素A的含量

3.2 液相條件的選擇

《中國藥典》（2010年版）第1部中關于紅花的質量控制采用的流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)，首先選擇該條件進行試驗，發現該條件下主峰拖尾，分離度不是很理想，現參考有關羥基紅花黃色素A的文獻資料[1-5]，確定了該實驗所采用的色譜條件，在該條件下，主峰峰型對稱，分離度較好。

3.3 測定方法的選擇

該本實驗采用RP-HPLC法測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量，該方法簡單易操作、準確可靠、重現性好，對控制谷紅注射液藥材的質量具有指導性作用。

[1]姜茁松,王麗娜,耿瑋.HPLC測定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量[J].中國現代中藥,2011,13(9):26-29.

[2]魏安池,代紅麗,谷文英.RP-HPLC法測定紅花中羥基紅花黃色素A的含量[J].河南工業大學學報：自然科學版,2005,26(4):48-51.

[3]趙明波,鄧秀蘭,王亞玲,等.高效液相色譜法測定紅花中的羥基紅花黃色素A[J].色譜,2003,21(6):62-64.

[4]彭紅,付建武,余日躍.復方當歸注射液中羥基紅花黃色素A和阿魏酸的含量測定[J].時珍國醫國藥，2009,20(12):19-21.

[5]李莉.高效液相色譜法測定紅藥片中羥基紅花黃色素A的含量[J].海峽藥學,2009,21(7):109-110.

R284.1

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1674-0742（2012）09（c）－0131-02

2012-08-07）