芽孢桿菌及其提取物對蘭花莖腐病的防治效果

朱秋潮，楊 惠，張甲辰，陳衛(wèi)良

(1.浙江省紹興市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，浙江 紹興312000;2.浙江大學(xué) 生物技術(shù)研究所，浙江 杭州310058;3.杭州廣普生物科技有限公司，浙江 杭州311215)

蘭花一直深受人們的喜愛與珍藏。2009年蘭花被確定為浙江省省花，全省各地將蘭花作為高利潤的精細(xì)農(nóng)業(yè)項目大力開發(fā)。但另一方面，隨著盆栽蘭花規(guī)模化種植和野生蘭花的馴化與推廣，近年新出現(xiàn)的蘭花莖腐病發(fā)生越來越嚴(yán)重。在高溫高濕的蘭棚內(nèi)，雖然適宜蘭花的生長，但同時也是蘭花莖腐病發(fā)生的最適條件。一般蘭花發(fā)生莖腐病后，整叢蘭花將被淘汰，若是名貴品種，損失嚴(yán)重。作者曾用多菌靈等常規(guī)藥劑進(jìn)行防治，但效果并不理想。蘭花莖腐病是由鐮刀菌引起的一種真菌病害，是目前蘭花上的最嚴(yán)重病害。通常情況下，因莖腐病造成蘭花死亡2%以上，有的甚至可達(dá)30%。有人估計浙江省每年因此病害而造成的損失都在幾千萬元以上。云南大理州調(diào)查2005年4-8月，僅因莖腐病造成蘭花損失在1億元以上。蘭花莖腐病已嚴(yán)重威脅著蘭花生長，特別是規(guī)模化的種植場。至今仍缺乏有效的藥劑，蘭花莖腐病被蘭友們稱為蘭花的不治之癥，是蘭花種植的大敵。本實驗利用生物菌株芽孢桿菌及其提取物防治蘭花莖腐病，并取得了較好防治效果。

1 材料與方法

1.1 材料

供試蘭花材料由中國春蘭樣品園基地提供。供試生防菌株Bacillus pumilus 223和 Bacillus subtilis A30由浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所提供。生防菌株采用NA培養(yǎng)基，配方為:牛肉浸膏3.0 g·L-1，蛋白胨5.0 g·L-1，葡萄糖 2.5 g·L-1，調(diào) pH值7.0左右。

1.2 防治制劑的制備

將生防菌株按5%(V/V)接種于NA培養(yǎng)液中，35℃下振蕩培養(yǎng)24 h，使細(xì)菌細(xì)胞濃度達(dá)到107 mL-1以上，即為細(xì)菌培養(yǎng)液。所得細(xì)菌培養(yǎng)液在12 000 g離心20 min，所得上清液即為無菌提取液。

1.3 防治方法

1.3.1 防治作用

取已發(fā)病的蘭花 (叢)，剔除球莖和葉基部已明顯變褐、腐爛的蘭苗，將余下的蘭苗浸泡于生防菌株細(xì)菌培養(yǎng)液或無菌提取液中，浸泡過夜，移苗于新的培養(yǎng)缽中培養(yǎng)。以清水為對照，30 d后觀察發(fā)病情況。防治效果/%=(對照發(fā)病率-處理發(fā)病率)/對照發(fā)病率×100。

1.3.2 預(yù)防作用

取健壯的蘭花 (叢)，將生防菌株細(xì)菌培養(yǎng)液或無菌提取液灌根至盆底流出，10 d后再灌根1次。以清水為對照，30 d后觀察發(fā)病情況。預(yù)防效果/%=(對照發(fā)病率 -處理發(fā)病率)/對照發(fā)病率 ×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 防治作用

已發(fā)病的蘭苗經(jīng)生防菌株細(xì)菌培養(yǎng)液或無菌提取液浸泡處理后，所得結(jié)果見表1。

由表1可知，經(jīng)B．pumilus 223細(xì)菌培養(yǎng)液和B．pumilus 223無菌提取液浸苗處理后，對蘭花莖腐病的防治效果大于80%，具有較好的防治效果。

表1 生防菌株制劑對蘭花莖腐病的防治效果

2.2 預(yù)防作用

健壯的蘭花苗經(jīng)生防菌株細(xì)菌培養(yǎng)液或無菌提取液灌根2次后，莖腐病的發(fā)病情況見表2。

表2 生防菌株制劑對蘭花莖腐病的預(yù)防效果

由表2可知，經(jīng)B．pumilus 223細(xì)菌培養(yǎng)液和B．pumilus 223無菌提取液灌根2次處理后，基本上能預(yù)防蘭花莖腐病的發(fā)生，顯示出很好的預(yù)防效果。

3 小結(jié)和討論

芽孢桿菌是一類自然界分布十分廣泛且多樣性豐富的微生物類群，可通過抗生作用、競爭作用、誘導(dǎo)植物獲得系統(tǒng)抗性和促進(jìn)植物生長等多種作用機(jī)理防治植物病害，在植物病害防治方面具有巨大的應(yīng)用潛力［1］，生防菌株 Bacillus pumilus 223對水稻紋枯病具有較好的防治效果［2］。

在本研究中發(fā)現(xiàn)，該菌株對蘭花莖腐病也有較好的防治效果，可防治蘭花莖腐病;另一菌株Bacillus subtilis A30對蘭花莖腐病的防效明顯不及Bacillus pumilus 223，這可能是由于不同芽孢桿菌菌種和菌株之間在作用機(jī)理、抗菌物質(zhì)產(chǎn)生等方面的差異，還有待深入研究。

［1］ 齊愛勇，趙緒生，劉大群.芽孢桿菌生物防治植物病害研究現(xiàn)狀 ［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2011，27(12):277-280.

［2］ 程丹丹.水稻紋枯病生防潛力菌株短小芽孢桿菌223的初步研究 ［D］.杭州:浙江大學(xué)，2008.