芽孢桿菌及其提取物對蘭花莖腐病的防治效果

朱秋潮，楊 惠，張甲辰，陳衛良

(1.浙江省紹興市農業技術推廣總站，浙江 紹興312000;2.浙江大學 生物技術研究所，浙江 杭州310058;3.杭州廣普生物科技有限公司，浙江 杭州311215)

蘭花一直深受人們的喜愛與珍藏。2009年蘭花被確定為浙江省省花，全省各地將蘭花作為高利潤的精細農業項目大力開發。但另一方面，隨著盆栽蘭花規模化種植和野生蘭花的馴化與推廣，近年新出現的蘭花莖腐病發生越來越嚴重。在高溫高濕的蘭棚內，雖然適宜蘭花的生長，但同時也是蘭花莖腐病發生的最適條件。一般蘭花發生莖腐病后，整叢蘭花將被淘汰，若是名貴品種，損失嚴重。作者曾用多菌靈等常規藥劑進行防治，但效果并不理想。蘭花莖腐病是由鐮刀菌引起的一種真菌病害，是目前蘭花上的最嚴重病害。通常情況下，因莖腐病造成蘭花死亡2%以上，有的甚至可達30%。有人估計浙江省每年因此病害而造成的損失都在幾千萬元以上。云南大理州調查2005年4-8月，僅因莖腐病造成蘭花損失在1億元以上。蘭花莖腐病已嚴重威脅著蘭花生長，特別是規模化的種植場。至今仍缺乏有效的藥劑，蘭花莖腐病被蘭友們稱為蘭花的不治之癥，是蘭花種植的大敵。本實驗利用生物菌株芽孢桿菌及其提取物防治蘭花莖腐病，并取得了較好防治效果。

1 材料與方法

1.1 材料

供試蘭花材料由中國春蘭樣品園基地提供。供試生防菌株Bacillus pumilus 223和 Bacillus subtilis A30由浙江大學生物技術研究所提供。生防菌株采用NA培養基，配方為:牛肉浸膏3.0 g·L-1，蛋白胨5.0 g·L-1，葡萄糖 2.5 g·L-1，調 pH值7.0左右。

1.2 防治制劑的制備

將生防菌株按5%(V/V)接種于NA培養液中，35℃下振蕩培養24 h，使細菌細胞濃度達到107 mL-1以上，即為細菌培養液。所得細菌培養液在12 000 g離心20 min，所得上清液即為無菌提取液。

1.3 防治方法

1.3.1 防治作用

取已發病的蘭花 (叢)，剔除球莖和葉基部已明顯變褐、腐爛的蘭苗，將余下的蘭苗浸泡于生防菌株細菌培養液或無菌提取液中，浸泡過夜，移苗于新的培養缽中培養。以清水為對照，30 d后觀察發病情況。防治效果/%=(對照發病率-處理發病率)/對照發病率×100。

1.3.2 預防作用

取健壯的蘭花 (叢)，將生防菌株細菌培養液或無菌提取液灌根至盆底流出，10 d后再灌根1次。以清水為對照，30 d后觀察發病情況。預防效果/%=(對照發病率 -處理發病率)/對照發病率 ×100。

2 結果與分析

2.1 防治作用

已發病的蘭苗經生防菌株細菌培養液或無菌提取液浸泡處理后，所得結果見表1。

由表1可知，經B．pumilus 223細菌培養液和B．pumilus 223無菌提取液浸苗處理后，對蘭花莖腐病的防治效果大于80%，具有較好的防治效果。

表1 生防菌株制劑對蘭花莖腐病的防治效果

2.2 預防作用

健壯的蘭花苗經生防菌株細菌培養液或無菌提取液灌根2次后，莖腐病的發病情況見表2。

表2 生防菌株制劑對蘭花莖腐病的預防效果

由表2可知，經B．pumilus 223細菌培養液和B．pumilus 223無菌提取液灌根2次處理后，基本上能預防蘭花莖腐病的發生，顯示出很好的預防效果。

3 小結和討論

芽孢桿菌是一類自然界分布十分廣泛且多樣性豐富的微生物類群，可通過抗生作用、競爭作用、誘導植物獲得系統抗性和促進植物生長等多種作用機理防治植物病害，在植物病害防治方面具有巨大的應用潛力［1］，生防菌株 Bacillus pumilus 223對水稻紋枯病具有較好的防治效果［2］。

在本研究中發現，該菌株對蘭花莖腐病也有較好的防治效果，可防治蘭花莖腐病;另一菌株Bacillus subtilis A30對蘭花莖腐病的防效明顯不及Bacillus pumilus 223，這可能是由于不同芽孢桿菌菌種和菌株之間在作用機理、抗菌物質產生等方面的差異，還有待深入研究。

［1］ 齊愛勇，趙緒生，劉大群.芽孢桿菌生物防治植物病害研究現狀 ［J］.中國農學通報，2011，27(12):277-280.

［2］ 程丹丹.水稻紋枯病生防潛力菌株短小芽孢桿菌223的初步研究 ［D］.杭州:浙江大學，2008.