茶毛蟲核型多角體病毒毒株分化對病毒增殖和毒效的影響

唐美君，殷坤山，郭華偉，肖 強

(中國農業科學院 茶葉研究所，浙江 杭州 310008)

茶毛蟲 (Euproctis pseudoconspersa Strand)又名茶黃毒蛾，是我國高山茶園和有機茶園常見的害蟲。茶毛蟲核型多角體病毒 (EpNPV)是控制茶毛蟲種群的重要病原物［1］。茶毛蟲病毒殺蟲劑具有防效高、持效期長、對環境安全等優點［2-4］，近年來在茶葉生產中得到了廣泛應用，受到了有機茶農的歡迎。有研究報道，采自貴州、湖北、浙江和湖南的EpNPV毒株之間存在較大的致病力差異，不同毒株之間的遺傳距離也有較大差距，表明不同毒株之間出現了遺傳分化［5］。這種毒株分化對EpNPV大量增殖是否會有不利影響，以及不同毒株組合后對毒效是否有增效作用，目前尚不明確。為了篩選合適的病毒毒株用于病毒生產和田間應用，進行了Ep NPV毒株分化對病毒增殖和毒效的影響研究，旨在為EpNPV的生產和應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試昆蟲

從田間 (江蘇宜興)采集茶毛幼蟲，以鮮茶葉為飼料，在 (23.5±0.5)℃，相對濕度70%～80%和光周期12 h/12 h(白天/晚上)的人工氣候室中連續飼養。

1.2 供試毒株

供試毒株分別為貴州毒株、湖北毒株、浙江毒株、湖南毒株4個茶毛蟲核型多角體病毒分離株。2009年分別從貴州中八、湖北襄樊、浙江雁蕩和湖南長沙采集，將各毒株分別進行病毒增殖，按蟲尸搗碎、過濾、差速離心、顯微鏡測、定量稀釋的方法獲得各分離株1×109PIB·mL-1的純病毒原液備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 對病毒增殖產量的影響

分別配制濃度為1×106PIB·mL-1的浙江毒株、貴州毒株、湖北毒株和湖南毒株的病毒液各1 000 mL備用。從茶園剪取帶老葉茶枝，分別在各毒株病毒液中浸濕，晾干后放入有銅紗網蓋的木盒(46 cm×32 cm×17 cm)中。接入5齡茶毛蟲幼蟲，在 (24.5±0.5)℃、相對濕度70% ～80%、光周期12 h/12 h的恒溫培養室內飼養。幼蟲取食帶病毒葉3 d后無病毒葉片繼續飼養。每處理設3次重復，每重復供試蟲100頭。

幼蟲開始死亡后，逐日收集蟲尸，并稱重。幼蟲全部死亡或化蛹后，提取蟲尸中的病毒，用血球計數法測定病毒多角體含量，計算病毒產量。

1.3.2 對病毒毒效的影響

首先配制濃度為1×106PIB·mL-1的浙江毒株、貴州毒株和湖北毒株病毒液單劑各400 mL，然后將浙江毒株分別與貴州毒株、湖北毒株按體積比1∶1進行混配，形成2個病毒濃度為1×106PIB·mL-1的混劑。從茶園剪取老葉，分別在各病毒液中浸濕，晾干后放入500 mL罐頭瓶中。接入2齡茶毛幼蟲，同等條件下飼養，以飼喂不加病毒的茶葉為對照。每處理設3次重復，每重復供試蟲50頭以上。待幼蟲開始死亡后，逐日檢查死蟲數。

采用Sakai公式計算毒株混用后的協同毒力指數，然后判定兩者的協同作用。

1.4 數據統計

采用DPS軟件統計分析病毒產量的數據，進行單因素試驗方差分析，均值之間的差異顯著性采用鄧肯氏新復極差法進行檢驗。

2 結果與分析

2.1 對病毒增殖產量的影響

結果 (表1)表明，浙江毒株較其他3個毒株病毒產量略高，每克蟲尸的病毒產量為48.17×108PIB，其他3個毒株的病毒產量40.44×108～46.06×108PIB·g-1，4個毒株的病毒增殖產量沒有顯著差異 (F=0.128 0，n=3，P=0.940 6)。

顯微觀察結果顯示，浙江毒株和貴州毒株增殖的病毒，多角體大而均勻;其余2個毒株增殖的病毒則多角體大小不勻，小的較多。此外，浙江毒株各次增殖的產量穩定，其余3株的產量不穩定。因此，人工大量增殖EpNPV時選用浙江毒株為最佳。

表1 Ep NPV分離株病毒增殖的產量比較

2.2 對病毒毒效的影響

供試的4個毒株毒力強弱依次為浙江毒株＞貴州毒株＞湖北毒株 ＞湖南毒株［5］。本研究選取了毒力最強的浙江毒株分別與貴州毒株、湖北毒株進行組合，結果表明 (圖1)，浙江毒株與貴州毒株1∶1混配，其協同毒力始終為相加作用;浙江毒株與湖北毒株1∶1混配，前期表現為拮抗作用，后期為相加作用。不同分離株組合后總體上為相加作用，未見增效作用。因此，在實際應用EpNPV時以單一毒株為宜。

圖1 茶毛蟲核型多角體病毒分離株混配后的協同毒力

3 小結與討論

昆蟲病毒的毒力強弱是評價該病毒應用潛力的重要指標。但并非毒力越強越好。如果毒力太強，以至于寄主種群不能在自然界較長時間存活，該毒株也會無法生存和流行;同時，在昆蟲病毒的增殖生產過程中，如果毒株的毒力太強，將無法實現人工大量增殖［6］。已有的研究表明，EpNPV浙江毒株的毒力強于其他 3個毒株［5］。本研究表明，Ep NPV毒株分化對病毒增殖沒有不利影響，4個毒株的病毒增殖產量相差不大，但浙江毒株優于其他3個毒株;強弱毒株組合后的協同作用總體為相加作用，沒有發現有增效作用。因此，浙江毒株是適宜用于室內病毒增殖和田間茶毛蟲防治的較理想的EpNPV分離株。

［1］ 齊義鵬，葉林柏，劉岱岳，等.用茶毛蟲核型多角體病毒防治茶毛蟲 ［J］.生物防治通報，1986，2(1):43.

［2］ 孫椒德，吳光遠，林阿祥，等.茶毛蟲核型多角體病毒制劑的防效 ［J］.華東昆蟲學報，1996，5(1):55-59.

［3］ 冷楊，肖強，殷坤山.茶毛蟲核型多角體病毒 Bt混劑的作用特性 ［J］.植物保護學報，2007，34(2):177-181.

［4］ 唐美君，殷坤山，郭華偉，等.茶毛蟲核型多角體病毒和Bt混劑的配比篩選及藥效評價 ［J］.植物保護，2010，36(5):165-167.

［5］ 付建玉，席羽，唐美君，等.茶毛蟲核型多角體病毒不同分離株的毒力水平與遺傳結構關系分析 ［J］.茶葉科學，2011，31(4):289-294.

［6］ 孫修煉，胡志紅.我國昆蟲病毒殺蟲劑的研究與應用進展［J］.中國農業科技導報，2006，8(6):33-37.